Визначення кількості бактерій у молоці за редуктазною пробою з резазуріном

Проба на редуктазу є непрямим показником бактеріального забруд­нення, який ґрунтується на біохімічній активності мікроорганізмів.

Про кількість бактерій у молоці можна судити по наявності фермента редуктази, який виділяють бактерії в процесі життєдіяльності. Редуктаза здатна знебарвлювати добавлені в молоко слабкі органічні барвники - метиленову синь чи резазурін. Знебарвлення проходить тим швидше, чим більше в молоці редуктази, а отже і бактерій.

Основний розчин резазурину натрієвої солі готують так: 100 мг резазурину натрієвої солі переносять у мірну колбу на 200 мл і доводять до мітки прокип'яченою і охолодженою до 25 °С дистильованою водою. Суміш старанно перемішують. Строк зберігання основного розчину резазурину натрієвої солі – не більше 30 діб при температурі 8-10 °С.

Робочий розчин резазурину готують розведенням основного розчину прокип'яченою і охолодженою до 25 °С дистильованою водою у співвідношенні 1:2,5 (наприклад, до 10 мл основного розчину додають 25 мл води). Масова частка резазурину в робочому розчині становить 0,014%.

При використанні резазурину в таблетках для приготування робочо­го розчину одну таблетку розчиняють у 50 мл прокип'яченої і охоло­дженої до 25°С дистильованої води. Масова частка резазурину в робо­чому розчині становить 0,01 %. Строк зберігання робочого розчину ре­зазурину – не більше 3 діб при температурі 0-5°С. Основний і робочий розчини зберігають у склянках, захищених від світла.

Хід визначення. Пробу з резазурином слід проводити не ра­ніше як через 2 год. після доїння. У пробірки наливають по 1 мл робочо­го розчину резазурину і по 10 мл досліджуваного молока, закривають гумовими корками і змішують повільним триразовим перевертанням пробірок. Останні переносять у редуктазник з температурою води 37°С. Вода в редуктазнику або водяній бані після занурення пробірок із молоком повинна бути на рівні або трохи вище рівня рідини в пробір­ках. Початком аналізу вважають час занурення пробірок у редуктазник. По­казники враховують через 1 і 1,5 год. Пробірки з молоком, які через 1 год. мають забарвлення від сіро-бузкового до бузкового з сірим відтінком, залишають ще на 30 хв.

Залежно від тривалості знебарвлення або зміни кольору, визначають клас молока згідно з вимогами, наведеними в таблиці 5.

Таблиця 5

Кількість бактерій у молоці за редуктазною пробою з резазурином

Клас молока	Тривалість знебарвлення або зміни кольору, год.	Забарвлення молока	Орієнтовна кількість бактерій в 1 мл молока
Вищий	1,5	Сіро-бузкове до бузкового з сірим відтінком	до 300 тис.
Перший	1	Сіро-бузкове до бузкового з світло-сірим відтінком	від 300 тис. до 500 тис.
Другий	1	Бузкове з рожевим відтінком або яск­раво-рожеве	від 500 тис. до 4 млн.
Третій	1	Світло-рожеве або біле	від 4 млн. до 20 млн.