Елімінація материнських антитіл.

Таблиця1

Вік дитини	Відносна кількість дітей з перінатальним контактом по ВІЛ інфекції, які не мають материнських антитіл.
9 місяців	40%
12 місяців	93%
18 місяців	100%

Зустрічаються поодинокі випадки затримки стандартних темпів елімінації материнських антитіл до 2-х - 2.5 років.

Визначення р24-антигену.

Високо специфічний метод. Визначення р24-антигену в сироватці крові означає присутність ВІЛ в організмі. В початковий період хвороби та в стадії СНІДу р24-антиген не пов’язаний з антитілами, тому виявляється в крові, як на ранніх стадіях, так і при прогресуванні ВІЛ-інфекції.

Особливість методу: низька чутливість у дітей раннього віку, особливо новонароджених.

Знаходження р24-антигену при народжені вказує на ризик розвитку раннього СНІДу.

Молекулярно- генетичні та вірусологічні методи дослідження.

ПЛР ДНК ВІЛ – найбільш чутливий, якісний метод визначення генетичного матеріалу вірусу в клітинах крові.

Чутливість методу:

• 29-46% - в перші 48 годин після народження;

• 93% - на другому тижні життя;

• 96-98% - в 28-30 днів;

• 99-100% - в 3-5 місяців.

Особливості застосування методу ПЛР ДНК ВІЛ та інтерпретація результатів:

• пуповина кров не використовується для визначення ВІЛ статусу дитини!

• позитивний результат ПЛР ДНК ВІЛ при народжені вказує на антенатальне інфікування дитини

• якщо дитина інфікована підчас пологів, результат ПЛР ДНК ВІЛ стає позитивним після 2-3 тижнів життя

• чутливість методу зростає з віком дитини і стає максимальною в 3-5 місяців

• застосування антиретровірусних препаратів і схем ВААРТ у жінок з метою профілактики вертикальної передачі ВІЛ - не стримує позитивність тесту і не впливає на його чутливість в дитини

• застосування антиретровірусних препаратів в дитини з метою профілактики вертикальної передачі ВІЛ не стримує позитивність тесту і не впливає на його чутливість

• чутливість ПЛР ДНК тесту залежить від субтипу вірусу, тому в Україні використовуються адаптовані до превалентного субтипу (субтипів) тест системи

• найбільш доцільно перше дослідження проводити у віці 1-2, друге в 3-5 місяців

Враховуючи значення преданалітичного етапу дослідження, як важливої складової отримання якісних результатів, важливо дотримуватись порядку забору крові для постановки тесту ПЛР ДНК ВІЛ. Для дослідження використовується венозна кров дитини. Кров забирається стерильним способом в спеціальні пробірки (вакутайнери, моновети, т.щ.), після чого обережно розмішується шляхом перевертання пробірки до 8 - 10 разів. В якості антикоагулянту використовується речовина – К3-ЕДТА. Зберігання та транспортування зразків крові проводиться при температурі 2 – 8 градусів С протягом часу - не більше 48 годин. Для попередження гемолізу слід уникати контакту замороженого хладоагенту з пробірками. Важливо знати, що гепарин пригнічує ПЛР, тому не використовується в якості антикоагулянту при заборі, зберіганні та транспортуванні зразків крові. Транспортування зразків крові в лабораторію проводиться в контейнерах.

ПЛР РНК ВІЛ – якісний метод визначення РНК ВІЛ в крові.

Особливості тесту:

• чутливість подібна до методу ПЛР ДНК;

• порівняльний аналіз ефективності методів ПЛР ДНК і ПЛР РНК показав більшу чутливість ПЛР ДНК, особливо у випадках вірусного навантаження менше ніж 10 000 копій/ мл;

На відміну від якісної ПЛР РНК ВІЛ, кількісний метод (визначення вірусного навантаження) для діагностики ВІЛ-інфекції використовувати не доцільно, враховуючи високу вартість дослідження. Визначення вірусного навантаження є необхідним для уточнення активності інфекційного процесу, темпів його розвитку, дозволяє спрогнозувати перебіг хвороби, обрати тактику ведення дитини, оцінити ефективність лікування.

Отримання культури ВІЛ.

Чутливість: висока, подібна до ПЛР ДНК тесту. Коштовний та технологічно складний метод, який потребує тривалого часу дослідження (в середньому 2-4 тижні). В новонароджених дітей частота хибно-негативних результатів сягає 50-70%.

Характеристика і значення стандартних методів діагностики ВІЛ інфекції у дітей (Афоніна Л.Ю., 2002)

Таблиця 2

Серологічні методи діагностики.	Методи визначення вірусу.
ІФА, імуноблот- діагностичні у дітей після 18 місяців	Визначають інфекційний статус дитини у віці 1-4 місяці
Відображають моніторинг материнських антитіл	Дозволяють своєчасно розпочати лікування ВІЛ-інфекції
Основні методи для зняття дитини з обліку після 18 місяців	Дозволяють проводити раціональну первинну профілактику пневмоцистної пневмонії у дітей

Розглянемо критерії діагнозу ВІЛ-інфекції у дітей в залежності від віку та результатів проведених обстежень.

Діагноз „ ВІЛ-інфікована дитина до 18 місяців „- встановлюється дітям за наявності наступних критеріїв:

• вік – до 18 місяців +

• в сироватці крові визначені антитіла до ВІЛ (методом ІФА та імуноблот) або відомо, що дитина, народжена ВІЛ-інфікованою жінкою +

• дитина має два позитивних результати дослідження, які проведено одним з наступних методів:

• ПЛР ДНК

• отримання культури ВІЛ

• визначення р24 антигену.

Діагноз „ ВІЛ-інфікована дитина старше 18 місяців„ - встановлюється дітям за наявності наступних критеріїв:

• вік – 18 місяців і старше +

• в сироватці крові визначені антитіла до ВІЛ (методом ІФА та імуноблот) +

• відомо, що дитина, народжена ВІЛ-інфікованою жінкою або

встановлено, що дитина отримала кров (препарати крові) або

встановлено, що дитина отримала вірус іншим шляхом (в

т.ч. статевим).

Діагноз „Дитина з перінатальним контактом по ВІЛ (невизначений статус)„ - встановлюється дітям за наявності наступних критеріїв:

• вік – до 18 місяців +

• в сироватці крові визначені антитіла до ВІЛ (методом ІФА та імуноблот) або відомо, що дитина, народжена ВІЛ-інфікованою жінкою.

Шифр по МКБ – Z20.6. У відповідності до чинних в Україні можливостей, діагноз встановлюється тимчасово, лише дітям до 5-6 місяців, яким не проведено ПЛР ДНК діагностику.

Діагноз „Дитина з перінатальним контактом по ВІЛ - сероконверсія „ - встановлюється дітям за наявності наступних критеріїв:

• вік – до 18 місяців +

• відомо, що дитина, народжена ВІЛ-інфікованою жінкою +

• в сироватці крові визначались антитіла до ВІЛ (методом ІФА та імуноблот), але у віці 9 -18 місяців отримано 2 негативні результати ІФА

• відсутні інші лабораторні ознаки ВІЛ-інфекції

• відсутні СНІД індикаторні захворювання.

або

• вік – старше 18 місяців +

• відомо, що дитина, народжена ВІЛ-інфікованою жінкою +

• в сироватці крові визначались антитіла до ВІЛ (методом ІФА та імуноблот), але у віці після 18 місяців отримано 1 негативний результат ІФА

• відсутні інші лабораторні ознаки ВІЛ-інфекції

• відсутні СНІД індикаторні захворювання.