Открытие дегидрогеназы янтарной кислоты в мышцах

Дегидрогеназа янтарной кислоты относится к анаэробным дегидрогеназам. Анаэробные дегидрогеназы переносят водород от окисляемого вещества на другое, но не на кислород. В состав простейшей группировки дегидрогеназ нередко входят витамины. Дегидрогеназа янтарной кислоты имеет название сукцинатдегидрогеназа.

Ход работы. В 2 пробирки приливают по 1 мл дистиллированной воды и в каждую помещают по 100 мг мышечной кашицы, предварительно промытой водой. В первую пробирку приливают 2 мл 0,1 Н раствора янтарной кислоты, во вторую 2 мл дистиллированной воды. В каждую пробирку добавляют по 2 капли 0,02% раствора метиленовой сини, перемешивают содержимое и заливают 3-5 каплями растительного масла. Обе пробирки помещают в термостат или водяную баню на 30 минут, после чего наблюдают окрашивание.

Определение молочной кислоты в мышцах

Ход работы. Мышцу животного 1г растирают в ступке с толченым песком, добавляют 2-3 мл дистиллированной воды, фильтруют. С фильтратом проделывают качественную реакцию на молочную кислоту с реактивом Уфельмана (10 капель 1% раствора FeCl₃ и 10 капель фенола), наблюдают переход окраски от фиолетовой к желто-зеленой, что говорит о присутствии промежуточного продукта расщепления глюкозы - молочной кислоты.

Клинико-диагностическое значение: реакция Уфельмана позволяет обнаружить присутствие лактата в любой биологической жидкости (например, в желудочном соке).

Нитропруссидная реакция (реакция Вейля) на креатинин

При добавлении нитропруссида натрия (Na₂Fe(CN)₅NO) к щелочному раствору креатинина жидкость приобретает красную окраску, быстро исчезающую, особенно после добавления уксусной кислоты. Реакция обусловлена образованием нестойкого нитрозокреатинина.

Ход работы. К 10 каплям мочи прибавляют 1 каплю 5%-го свежеприготовленного раствора нитропруссида натрия и 1 каплю 10%-го раствора гидроксида натрия. Моча окрашивается в красный цвет, быстро переходящий в желтый.

Количественное определение креатинина в моче

При нагревании в мышцах из креатинфосфата образуется его альдегид – креатинин. Наибольшее количество креатинина образуется в мышцах при дефосфорилировании креатинфосфата.

В основе обнаружения и количественного определения креатинина положена цветная реакция креатинина в щелочной среде с пикриновой кислотой, в результате которой образуется окрашенный в оранжевый цвет пикрат креатинина.

По интенсивности окрашивания, определяемой колориметрически, контрольно (стандартный раствор бихромата калия) и иcследуемой смеси проб, можно расcчитать массовую концентрацию креатинина в исследуемой смеси.

Ход работы. В пробирку наливают 0,1 мл исследуемой мочи, прибавляют 0,1мл 10% раствора гидроксида натрия и оставляют стоять на 5 минут. Затем добавляют 0,15 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты, взбалтывают и оставляют стоять 5 минут. Затем доводят объем до 10 мл дистиллированной водой и тщательно перемешивают. Измеряют светопоглощение опытной пробы против контрольной на ФЭК-е при 490 нм (зеленый светофильтр №5) в кювете с толщиной слоя 0,3. Контрольную пробу готовят как опытную, только вместо мочи берут равный объем дистиллированной воды.

Расчет: С₁ = Д₁Q/Д₂V,

где Д₁ и Д₂ – значение оптических плотностей стандартного раствора бихромата калия и соответственно исследуемого раствора; Q - масса креатинина в 250 мл раствора, эквивалентная по окраске 1% стандартному р-ру бихромата калия (2,5); V – объем мочи, взятой для анализа.

10 мл раствора – 0,1 мг соответственно креатинина, норма – 9-18 ммоль/сутки.