- •Биохимия печени
- •Особенности обмена аминокислот, белков и других азотсодержащих веществ в печени
- •Особенности обмена углеводов в печени
- •Особенности обмена липидов в печени
- •Дифференциальная диагностика наследственных желтух
- •Определение общего билирубина сыворотки крови
- •Определение прямого билирубина сыворотки крови
- •Диагностика желтух
- •Проба Гмелина на желчные пигменты
- •Проба Богомолова на уробилин
- •Контрольные вопросы к теме биохимия печени
- •Контрольные задачи
- •Ситуационные задачи
- •Литература
- •Биохимия крови
- •Синтез гема и гемоглобина
- •Регуляция синтеза гема и гемоглобина
- •Нарушения биосинтеза гема. Порфирии
- •Обмен железа
- •Дыхательная функция крови
- •Буферные системы крови
- •Определение гемоглобина крови
- •Определение протромбинового времени
- •Определение времени свертывания крови
- •Тимоловая проба
- •Контрольные вопросы
- •Контрольные задачи
- •Рекомендуемая литература
- •Функции и состав плазмы крови
- •Белковые фракции крови
- •Строение молекулы иммуноглобулина. Фибриноген. Белки-ферменты плазмы крови
- •Главнейшие протеолитические системы крови
- •Система свертывания крови и фибринолиза
- •Система регуляции сосудистого тонуса
- •Антикоагулянты. Функциональные особенности системы свертывания крови и фибринолиза
- •Определение содержания общего белка биуретовым методом
- •Определение белковых фракций сыворотки крови турбидиметрическим методом
- •Контрольные вопросы
- •Рекомендуемая литература
- •Определение кальция в сыворотке крови и слюне комплексометрическим методом
- •Определение неорганического фосфата в сыворотке крови
- •Контрольные вопросы
- •Рекомендуемая литература
- •Биохимия мочеобразования и мочи Особенности метаболизма почечной ткани
- •Мочеобразование
- •Свойства мочи
- •Компоненты мочи
- •Цвет мочи
- •Основные симптомы опн и хпн
- •Реакция рН
- •Определение титруемой кислотности и аммиака мочи по методу Мальфатти
- •Качественные реакции на патологические составные части мочи
- •5. Кетоновые тела.
- •Экспресс методы обнаружения «сахара» и кетоновых тел в моче
- •Экспресс-метод определения «сахара» в моче
- •Экспесс-метод определения кетоновых тел в моче
- •Органические компоненты мочи
- •Типы органической протеинурии
- •Рекомендуемая литература
- •Биохимия соединительной ткани Состав соединительной ткани
- •Клетки Коллагеновые Межуточное соединительной эластические вещество ткани волокна
- •3 Главных молекулярных компонента
- •Коллагеновое волокно
- •Проколлаген
- •Проколлагенпептидаза
- •Тропоколлаген
- •Турбидиметрический метод определения уровня серогликоидов в сыворотке крови
- •Контрольные вопросы
- •Контрольные задачи
- •Ситуационные задачи
- •Ответы на контрольные задачи
- •Ответы на ситуационные задачи
- •Рекомендуемая литература
- •Биохимия нервной ткани Структура и функции нервной ткани. Особенности ее состава и метаболизма
- •Функции нервной ткани
- •Особенности химического состава
- •Особенности метаболизма нервной ткани
- •Функции липидов нервной ткани:
- •Метаболизм и особенности энергетического обеспечения нервной ткани
- •Метаболизм аминокислот и белков
- •Функции глутамата в нервной ткани
- •Биохимические основы возникновения и проведения нервного импульса
- •Понятие о синапсах. Нейромедиаторы. Пептиды
- •Классификация пептидов:
- •Биохимические основы возникновения некоторых заболеваний нервной системы
- •Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови колориметрическим методом
- •Контрольные вопросы
- •Литература
- •Особенности строения мышечного волокна
- •Химический состав поперечно-полосатых и гладких мышц
- •Химизм мышечного сокращения
- •Метаболизм в мышечной ткани
- •Цнс - - - → возбуждение - - → синапс
- •Креатинофосфат
- •Время работы c
- •Утомление и тренировка
- •Окоченение мышц
- •Инфаркт миокарда
- •Открытие дегидрогеназы янтарной кислоты в мышцах
- •Определение молочной кислоты в мышцах
- •Нитропруссидная реакция (реакция Вейля) на креатинин
- •Количественное определение креатинина в моче
- •Контрольные вопросы
- •Задачи и упражнения
- •Литература
Антикоагулянты. Функциональные особенности системы свертывания крови и фибринолиза
Антикоагулянты — вещества, предотвращающие свертывание крови.
Естественные антикоагулянты синтезируются в тканях и поступают в кровь, где препятствуют активации факторов свертывания крови. К ним относятся гепарин, антитромбин - III и α2 - макроглобулин.
Гепарин предотвращает активацию некоторых факторов, но непосредственно на них не действует. Гепарин способен активировать антитромбин- III. Являясь гетерополисахаридом, с больгшим содержанием карбоксильных и сульфогрупп, обладая высоким отрицательным зарядом, гепарин связывается с катионными участками антитромбина- III. В результате изменяется конформация антитромбина- III, и он приобретает способность инактивировать сериновые протеиназы.
α2-макроглобулин — эндогенный ингибитор протеаз, в том числе многих ферментов, участвующих в работе системы свертывания крови и фибринолиза (тромбин, плазмин).
Он содержит участки полипептидной цепи, гидролизуемые протеиназами, при этом меняется его конформация и 2-макроглобулин захватывает протеазы подобно капкану. Образующийся комплекс быстро удаляется из крови.
Работа параферментов контролируется системой протеина С. Протеин С — гликопротеин, содержащий карбоксиглутаминовую кислоту, его синтез зависит от витамина К. Существует в крови в виде профермента, активируется тромбином. В этой системе участвует и интегральный белок мембран – тромбомодулин, только в присутствии которого тромбин активирует протеин С. В свою очередь специальный комплекс с протеином С частичным протеолизом инактивирует (в течение 3 мин) на 80% факторы свертывания Va и VIIIа. Ослабление этой системы приводит к тромбогенезу.
ЛАБОРАТОРНЫЕ ЗАНЯТИЯ
Определение содержания общего белка биуретовым методом
Студент должен знать молекулярные механизмы свертывающей противосвертывающей систем крови, роль печени в этом процессе, молекулярную структуру коагуляторов, механизм гемофилий различного генеза, уметь определять биохимические показатели состояния свертывающей системы и давать им медикобиологическую оценку, знать нарушения вo фракционном составе белков плазмы крови.
Содержание общего белка в сыворотке (плазме) крови является показателем состояния человеческого организма в норме (нормопротеинемия) или нарушения белкового обмена (гипо- и редко гиперпротеинемия) при различных заболеваниях желудочно-кишечного тракта, печени, сосудистой системы.
Самым распространенным химическим методом количественного определения белков является колориметрический метод, основанный на биуретовой реакции. В щелочной среде пептидные связи белка переходят в енольную форму и образуют с Cu2+ комплексное соединение, окрашенное в фиолетовый цвет.
Окраска растворов при проведении биуретовой реакции варьирует от синей до красной с преобладанием фиолетовой и зависит от количества азота, участвующего в образовании комплекса. Чтобы рассчитать концентрацию белка, строят предварительно калибровочный график зависимости интенсивности окрашивания, измеряемой на ФЭКе от заведомого содержания белка в растворе.
Оборудование и реактивы: фотоэлектрокалориметр, пробирки, пипетки, мерные колбы, раствор альбумина плацентарного 10%, сегнетова соль, медный купорос, калий иодистый, натрий хлористый, гидроксид натрия.
Готовят биуретовый реактив, растворяя в мерной колбе на 250 мл 0,375г CuSO4Н2О и 1,5г сегнетовой соли в 150мл воды, приливая медленно 75мл 10% NaOH, и доводят содержимое до 250мл водой. Рабочий раствор биуретового реактива готовят, смешав 200 мл биуретового реактива с 800мл 0,5% раствора иодистого калия.
Построение калибровочного графика
Из калибровочного раствора плацентарного альбумина готовят рабочие калибровочные растворы, как указано в таблице:
№ п/п |
Калибровочный р-р белка (мл) |
0,9% р-р NaCl (мл) |
Концентрация белка в г/л |
1 |
0,4 |
0,6 |
40 |
2 |
0,6 |
0,4 |
60 |
3 |
0,8 |
0,2 |
80 |
4 |
1,0 |
- |
100 |
Из каждого разведения берут 0,1 мл рабочего раствора и прибавляют по 5,0 мл рабочего биуретового реактива. Через 30 – 60 мин измеряют на ФЭКе оптическую плотность в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 540 - 560 нм (зеленый светофильтр) против контроля (к 5 мл рабочего биуретового реактива прибавляют 0,1 мл 0,9% раствора хлористого натрия). По полученным данным строят калибровочный график.
Ход работы. К 0,1мл сыворотки прибавляют 5,0 мл рабочего биуретового реактива и смешивают, избегая образования пены. Через 30 мин (и не позднее, чем через 1 час) измеряют оптическую плотность на ФЭКе, как при построении калибровочного графика против контроля (биуретового реактива).
По калибровочному графику определяют содержание белка в пробе и выражают его далее с учетом разведения в процентах в целом препарате.