Определение белковых фракций сыворотки крови турбидиметрическим методом

Принцип метода: основан на том, что фосфатные растворы определенной концентрации осаждают с образованием очень мелкой взвеси различные белковые фракции крови. По степени мутности растворов (установленной с помощью фотоэлектрокалориметра) судят о концентрации различных фракций белков в исследуемом материале.

Ход работы. Фосфатные буферные растворы различных концентраций от 0,5 до 3,0 М разливают в 7 пробирок по схеме:

0	1	2	3	4	5	6
10 мл воды	5мл буф.1	5мл буф.2	5мл буф.3	5мл буф.4	5мл буф.5	4,5мл буф.1

Затем в 6-ю пробирку добавляют 0,5 мл сыворотки, содержимое перемешивают. В пробирки 1, 2, 3, 4 и 5 переносят из пробирки 6 по 0,5 мл полученной смеси, в пробирку 0 – 1 мл той же смеси. Содержимое пробирок осторожно перемешивают, через 15 мин вновь осторожно перемешивают и измеряют светопоглощение растворов 1-5. Светофильтр № 8 (красный), при длине волны 600 нм, в кювете с толщиной слоя 1,0 см. Фотометрируют против раствора пробирки 0. Одновременно определяют общий белок сыворотки крови биуретовым методом. Расчет и результаты : Е₁, Е₂, Е₃, Е₄, Е₅, Е_{общ. белок.}

белковые фракции	% фракции по отношению к общему белку	норма	Эксперименталь-ные данные	Абсолютное содержание белка фракции
Общий белок	100%	100% (60-80 г/л
Альбумины		56,6 – 66,8
1 глобулины		3,0 – 5,6
2 глобулины		6,9 – 10,5
 глобулины		7,3 -12,5
 глобулины		12,8 -19,0

Диагностическое значение анализа: при различных патологических состояниях, как правило, изменяется не общий белок крови, а состояние между белковыми фракциями.

Общий белок сыворотки. Уменьшение белка имеется у новорожденных и при беременности. Увеличивается при длительном пребывании в горах, употреблении пищи, богатой белками.

Гипопротеинемия наблюдается при недостаточном поступлении белка в пищу (недоедание, голодание, опухоли, стеноз пищевода, привратника, нарушение функции желудочно-кишечного тракта), при снижении процессов биосинтеза белка (хронические гепатиты, циррозы печени).

Содержимое альбуминов уменьшается при недостатке белка в пище, нефрозе, воспалительных процессах, циррозе печени, злокачественных новообразованиях, кровотечениях.

Белки острой фазы (₁, ₂ глобулины) повышаются при острых инфекциях, острых нефрозах, остром ревматизме.

Концентрация -глобулинов увеличивается при злокачественных новообразованиях, нефрозах, застойной желтухе.

-глобулины увеличиваются при хронических воспалительных процессах – хроническом полиартрите, циррозах печени.