Определение кальция в сыворотке крови и слюне комплексометрическим методом

Принцип метода. Метод основан на способности определенных органических соединений (комплексов) избирательно взаимодействовать с ионами кальция. В качестве комплексона используется трилон Б (динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты – ЭДТА). Ионы кальция, предварительно связанные с индикатором – хромовым темно-синим, оттитровывают трилоном Б. При полном связывании кальция с комплексоном происходит изменение цвета индикатора (в комплексе с ионами индикатор имеет фиолетовую окраску, свободный от кальция – синюю). Комплекс кальция с трилоном Б более прочен, чем с индикатором.

Ход работы. В стаканчик Хагедорна наливают 1,0 мл безбелкового фильтрата сыворотки крови. Прибавляют 5 мл аммиачного буфера, 5-6 капель индикатора. Сразу титруют до изменения окраски.

Расчет: концентрация кальция равна:

,

где А – количество трилона Б, пошедшего на титрование (мл),

Б – количество сыворотки, взятое в опыте (мл),

0,05 – нормальность трилона Б,

1000 – коэффициент для пересчета в моль/л,

2 – количество эквивалентов трилона Б, связывающих с 1 эквивалентом кальция,

40 – атомная масса кальция.

Норма: содержание кальция в сыворотке крови здорового человека 2,2 -2,8 ммоль/л, содержание кальция в слюне – 1,2 – 1,5 ммоль/л.

Диагностическое значение. Гиперкальциемия бывает физиологической и патологической. Физиологическая имеет место у новорожденных, а также может быть алиментарной. В патологических условиях гиперкальциемия наблюдается при гиперфункции паращитовидных желез, гипервитаминозе D и ряде других заболеваний.

Гипокальциемия наблюдается в детском возрасте при спазмофилии, при рахите; гипокальциемия развивается при ряде хронических заболеваний почек, при гипопаратиреидизме, поносах, бронхопневмонии.

Определение неорганического фосфата в сыворотке крови

Принцип метода. В безбелковом фильтрате сыворотки крови неорганический фосфат при взаимодействии с молибденовым реактивом:

H₃PO₄ + 12(NH₄)₂MoO₄ +21HNO₃(NH₄)₃PO₄12 MoO₃ + 21 NH₄NO₃+ 12H₂O.

Под действием сильных восстановителей из аскорбиновой кислоты образуется молибденовая синь Mo₂O₅H₂O, интенсивность окраски которой пропорциональна концентрации неорганического фосфата. Интенсивность окраски измеряется на фотоэлектрокалориметре.

Ход работы. В 3 пробирки отмеряют по 1 мл сыворотки крови, 1 мл Н₂О и 1 мл эталона. Туда прибавляют 1,2 мл молибденового реактива и 1 мл 0,15% раствора аскорбиновой кислоты и доводят водой до 10 мл, тщательно перемешивают и оставляют стоять на 10 мин для развития окраски. Измеряют светопоглощение при 600 нм (красный фильтр № 8) в кювете с толщиной слоя 1,0 см против контроля (с Н₂О).

Расчет. Е_{эталона} - 1 ммоль/л

Е₀ - Х

Х =

Норма: содержание неорганического фосфата в сыворотке крови здорового человека составляет обычно 1,0 -1,6 ммоль/л

Диагностическое значение. Гиперфосфатемия встречается при почечной недостаточности, гипопаратиреодизме, при приеме больших доз витамина D и ряде других состояний. Гипофосфатемия наблюдается при рахите, при остеомаляции, пеллагре, но может быть и алиментарного происхождения – из-за нарушения всасывания фосфатов в кишечнике.

Для диагностики различных патологических состояний важное значение имеет определение количественного соотношения между содержанием кальция и неорганического фосфата в крови: в норме коэффициент Са/Р 1,9–2.