Определение гемоглобина крови

Цель: знать разные методы определения гемоглобина в крови и уметь использовать полученную величину для диагностики анемий.

Принцип метода: гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием (красная кровяная соль) окисляется в метгемоглобин.

Образующий с ацетонциангидрином окрашенный гемоглобинцианид, интенсивность которого пропорциональна количеству гемоглобина.

Ход работы: В 1-ю пробирку наливают 0,02 мл крови, во 2-ю 0,02 стандартного раствора с содержанием Нb -120 г/л, приливают по 5 мл ацетонциангидридного реактива (содержит ацетонцианингидрин и красную кровяную соль) и хорошо перемешивают. Через 20 мин на ФЭКе измеряют светопоглощение при 540 нм (зеленый светофильтр № 6); определяют экстинцию полученного раствора, фотометрируя против ацетонциангидридного реактива.

Содержание Нв в крови рассчитывают по формуле =

В норме: содержание гемоглобина у мужчин – 130 - 160 г/л;

у женщин – 120 – 140 г/л.

Диагностическое значение анализа: повышение уровня гемоглобина наблюдается при полицитемии, чрезмерной физической нагрузке, при подъеме на большие высоты. Снижается уровень гемоглобина при различных формах анемии.

Следующие опыты относятся ко 2-му занятию по биохимии крови, однако работа в первом опыте предполагает взятие пробы крови из пальца, то их целесообразно выполнять на этом занятии.

Определение протромбинового времени

При избытке тромбопластина и оптимальном содержании кальция время образования сгустка в плазме зависти от активности II, VII, IX и Х факторов.

Ход работы: к 0,1 мл плазмы добавляют 0,1 мл 1% раствора тромбопластина, инкубируют 1 мин и добавляют 0,1 мл 0,025 М раствора хлорида кальция и включают секундомер до образования плотного сгустка. Время выражают в секундах.

ПИ(%) = ,

где А – протромбиновое время здорового человека (20 сек),

В – протромбиновое время больного человека.

В норме 90 -105%.

Клинико-диагностическое значение: удлинение протромбинового времени (уменьшение ПИ) наблюдается при врожденной или приобретенной недостаточности факторов, отражающих внешний механизм образования протромбиназы, ее действие на протромбин и последующее образование фибрина (факторов X, VI, V, II, I). Обычно оно отмечается у больных, принимающих антикоагулянты (неодикумарин, финилин, синкумар, омефин), при тяжелых поражениях паренхимы печени и недостаточности витамина К.

Определение времени свертывания крови

Ход работы. Четвертый палец протирают спиртом, вытирают насухо, укол наносят иглой Франка. Укол не должен быть поверхностным, выдавливание крови из пальца не рекомендуется. Стекающую каплю опустить на предметное стекло, сразу засечь время. Через 2 минуты иглой проверить, не образуется ли первая нить фибрина. Свертывание закончено, если образуется сгусток.

В норме проходит 5-10 минут.

Клинико-диагностическое значение. Увеличение времени свертывания наблюдается при тяжелой недостаточности факторов, участвующих во внутреннем пути образования протромбиназы, дефиците протромбина и фибриногена, а также при наличии в крови ингибиторов свертывания, в частности гепарина.