6. Практичні роботи, які виконуються на занятті

6.1 З агарової культури стафілокока та завису культури кишкової палички у фізіологічному розчині хлориду натрію готують мазки і фарбують простим методом.

Методика виготовлення мазків.

Якщо мазок готують з культури, вирощеної на щільному середовищі в пробірці, забір її проводять наступним чином. Пробірку з культурою беруть великим та вказівним пальцем лівої руки. Правою рукою беруть бактеріологічну петлю та стерилізують її в полум’ї пальника. Ватну пробку затискують мізинцем правої руки, витягають її з пробірки та залишають в такому положенні. Краї пробірки стерилізують, обпалюючи їх в полум’ї пальника, потім в пробірку через полум’я вводять петлю. Охолоджують петлю, торкаючись до внутрішньої стінки пробірки, потім торкаються до біомаси бактерій на поверхні середовища. Петлю витягають, швидко обпалюють краї пробірки та закривають пробкою, проводячи через полум’я. Пробірку ставлять в штатив. Петлю з культурою вносять в попередньо підготовлену краплю води, яку нанесли на середину чистого, знежиреного предметного скла і емульгують, поки крапля рідини не стане мутною. Надлишок мікробного матеріалу на петлі спалюють в полум’ї пальника, петлю охолоджують на повітрі. Потім культуру розмішують петлею, готуючи круглий мазок діаметром 2 см.

При виготовленні мазка з рідкого середовища його краплю петлею або піпеткою наносять безпосередньо на скло. Мазок готують петлею діаметром 2 см.

Висушування та фіксування мазків. Мазки висушують на повітрі до повного зникнення вологи. Фіксують мазки за допомогою фізичної або хімічної фіксації. Фіксація закріплює матеріал на поверхні скла, знищує живі мікроорганізми, сприяє кращому сприйняттю барвників.

Фізична фіксація здійснюється в полум’ї пальника. Для цього скло з мазком беруть пінцетом або першим і другим пальцями за ребра предметного скла мазком до верхівки та плавно проводять 2-3 рази над верхівкою полум’я. Процес фіксації повинен займати 2 сек. При правильній експозиції скло повинно бути гарячим.

Хімічна фіксація здійснюється в розчинах хімічних речовин або сполук:

• Безводний метиловий спирт – 5 хв.

• 96° етиловий спирт – 10-15 хв.

• Суміш Нікіфорова ( спирт та ефір в співвідношенні 1:1) - 10-15 хв.

Для цього предметне скло з мазком занурюють в склянку з фіксатором на вказаний час. Забарвлення фіксованих мазків простим методом. Простий метод фарбування передбачає використання одного барвника. Найчастіше застосовують водний розчин метиленового синього або водно-спиртовий розчин фуксину. На фіксований мазок наносять фарбу так, щоб мазок був повністю покритий нею, та витримують 3-5 хв. Після фарбування фарбу зливають, мазок промивають водою, висушують, мікроскопують, виявляють морфологічні форми бактерій.

Мікроскопічну картину замальовують в протоколі та роблять висновки, які морфологічні ознаки мікроорганізмів виявлені в препараті.

7. Рекомендована література.

7а. Основна:

1. Медична мікробіологія, вірусологія та імунологія. За редакцією академіка НАН та член.-кор. НАМН України В.П. Широбокова. Вінниця, Нова Книга, 2011. ст. 61-65.

2. С.І. Климнюк і співавт. Практична мікробіологія. Тернопіль, "Укрмедкнига", 2004, ст. 19-27

3. В.Д. Тимаков и соавт. Микробиология. М., Медицина, 1993, стр. 21-28

4. К.Д. Пяткін, Ю.С. Кривошеїн. Мікробіологія. В.Ш. 1992, ст. 20-27

7б. Додаткова

1. Крок-1. Загальна лікарська підготовка. Київ, Медицина, 2005.

2. Г.К. Палій і співавт. Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби. Київ «Здоровя». 2004.

3. А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург. Спецлит., 2002, стр. 18-33.

4. И.Л. Дикий и соавт. Микробиология. Харьков, изд. Укр ФА, 1999, стр. 18-19, 26-27.

5. Л.Б. Борисов и соавт. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М. Медицина, 1994, стр. 25-31.

6. Л.Б. Борисов и др. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М., 1984, стр. 20-24.