Литература

1. Зинчук В.В., Балбатун О.А., Зинчук Н.В. Возможность фармакологической коррекции кислородтранспортной функции крови // Вестник Смоленской медицинской академии. - 2005. - № 3. - С. 23-25.

2. Матвейчик А.И. Кислородтранспортная функция крови у пациентов с артериальной гипертензией в сочетании с бронхиальной астмой в зависимости от степени контроля над ней // Журнал Гродненского государственного медицинского университета. - 2013. - № 4. - С. 32-36.

3. Преображенский Д.В. Клиническое применение антагонистов кальция. М., 1993.

Структура клеток купфера у пациентов с ко-инфекцией вич/вгс Матиевская н.В., Цыркунов в.М., Андреев в.П., Кравчук р.И.

Гродненский государственный медицинский университет, Гродно

Введение.В настоящее время патология печени при ВИЧ- инфекции является одной из ведущих причин летальности в данной группе пациентов. Доказана восприимчивость к ВИЧ практически всех клеток печени. Клетки Купфера (КК) относятся к синусоидальным клеткам печени, составляя в их структуре около 20% [1]. КК инфицируются на ранних стадиях ВИЧ- инфекции. Существует два варианта инфицирования КК: продуктивная и латентная ВИЧ-инфекция. При латентной инфекции КК инфицирована ВИЧ, однако вирус не размножается. При продуктивной инфекции, благодаря активности протеинаNef, который предотвращает деструкцию компонентов ВИЧ-1 в фагосомах, происходит размножение и накопление ВИЧ в цитоплазме КК, в мультивезикулярных тельцах. При продуктивной инфекции КК высокоустойчивы к цитопатическому действию ВИЧ. Таким образом, цитоплазматические мультивезикулярные тельца КК являются своеобразным «инкубатором» для ВИЧ, при этом долгоживущие КК продуцируют и распространяют ВИЧ, инфицируя клетки печени, «активируют» различные сигнальные пути, оказывают паракринные эффекты на другие клетки печени [1, 2].

Цель:изучить особенности структуры КК у пациентов с ко­инфекцией ВИЧ/ВГС в зависимости от стадии ВИЧ-инфекции.

Методы исследования.Под наблюдением находились 2 группы пациентов: 1 группа - 8 пациентов с ко-инфекцей ВИЧ/ВГС (4 мужчины, 4 женщины, средний возраст - 36,5±7,0 лет), 2 группа - 8 пациентов с хроническим гепатитом С (ХГС) (4 мужчины, 4 женщины, средний возраст - 38,2±5,6 лет). Всем пациентам были проведены биопсии печени. Фиксация биоптатов печени для цитологичекого исследования полутонких срезов препаратов печени проводилась в специально разработанной фиксирующей смеси на основании фиксатора поSatoTaizanс последующим заключением в метакрилат [3]. Из блоков ткани, залитой в смесь бутил-метилметакрилатов, готовили полутонкие срезы толщиной 0,5-1 мкм и окрашивали азуром II, метиленовым синим, основным фуксином. Изучение полученных препаратов производилось под световым микроскопом (увеличение 100, 200, 400) в 6 случайных полях зрения. Для проведения электонномикроскопических исследований препараты печени изучали в световом микроскопе и выбирали однотипный участок из интермедиальной области дольки для детального изучения ультраструктурных изменений. Ультратонкие срезы (35 нм) контрастировали 2% раствором уранилацетата на 50% метаноле и цитратом свинца поE.S.Reynolds. Электронно­микроскопические препараты изучали в электронном микроскопеJEM-1011 (Япония) при увеличениях 5000-20000 при ускоряющем напряжении 80 кВт. Для получения снимков использовался комплекс из вмонтированной цифровой камерыOlympusMegaViewIII (Германия) и программыiTEMдля обработки изображений.

Результаты и их обсуждение.При изучении структуры КК у всех пациентов с ко-инфекцией ВИЧ/ВГС по данным световой микроскопии полутонких срезов печени в синусоидах печени определялись активированные КК. При этом КК характеризовались большим размером тела клетки, а их ядра содержали разреженный (не концентрированный) хроматин. У пациентов 1 группы в цитоплазме части КК были обнаружены характерные множественные везикулярные включения (МВВ) - рисунок 1 А. При микроскопии полутонких срезов препаратов печени пациентов 2 группы ни в одном случае в цитоплазме КК не были обнаружены МВВ, подобные таковым у пациентов с ВИЧ-инфекцией.

Электронно-микроскопическое исследование КК также выявляло существенную активацию КК, что проявлялось в виде гиперплазии и гипертрофии клеток, содержащих многочисленные лизосомы, фагосомы и мелкие электронно­плотные гранулы. Как правило, макрофаги тесно взаимодействовали с гепатоцитами, в которых отмечались глубокие деструктивные изменения внутри клеток и в окружающем микрососудистом русле. Ядра большинства КК характеризовались глубокими инвагинациями кариолеммы, вплоть до фрагментации. Часто определялись КК, у которых исчезали выросты и складки, наблюдался распад плазматической мембраны и, как следствие, выход внутриклеточного содержимого в окружающее пространство.

А - клетки Купфера (стрелки) с множественными включениями в цитоплазме (полутонкие срезы, окраска азур II) Об. 100, ок. 10.; D- контакт клетки Купфера (стрелка) с агрессивным лимфоцитом - х10000; ПС - просвет синусоида печени, ГЦ - гепатоцит, ПК - плазматические клетки

Рисунок 1 - Структура клеток Купфера у пациентов с ко-инфекцией

ВИЧ/ВГС

Нередко КК и другие синусоидальные клетки находились в тесном топографическом контакте с плазматическими клетками. Кроме того, наблюдался контакт макрофагов с агрессивными лимфоцитами (рисунок 1 D) - один из морфологических признаков активации иммунных реакций в печени.

При сопоставлении клинико-лабораторных данных пациентов с количественным показателем выявления КК на 1000 гепатоцитов установлено, что при наличии показателя более 2 клеток у пациента имела место активная стадия ВИЧ-инфекции, при которой определялись клинико-иммунологические признаки прогрессирования ВИЧ-инфекции: наличие иммуносупрессии, уровень вирусной нагрузки ВИЧ (более 500 копий/мл), манифестация оппортунистических инфекций (таблица 1), что требовало назначения или изменения схемы антиретровирусной терапии ВИЧ-инфекции.

Таблица 1 - Количество клеток Купфера с наличием МВВ в биоптатах печени ВИЧ-инфицированных пациентов

Пациент	Количество КК с МВВ на 1000 гепатоцитов, n	ВН1 ВИЧ	СD4+ТЛ (кл/мкл)	Стадия ВИЧ-инфекции2
Ю.	16	54200	267	3
Л.	12,5	6700	367	3
Р.	7	201641	127	3
Щ.	5	1829	235	2
Л.	2	НТ4	435	1
Я.	2	НТ	290	1
Н.	1	НТ	330	1
С.	0,8	НТ	252	1

Примечание: ¹ВН - вирусная нагрузка ВИЧ;²клиническая классификация ВИЧ, ВОЗ, 2006;³нет - отсутствие АРТ, + - получение АРТ;⁴НТ - нетестируемый уровень вирусной нагрузки ВИЧ в плазме крови; МВВ - множественные везикулярные включения

Выводы.Наличие в синусоидах печени ВИЧ-инфицированных пациентов КК с МВВ более 2 клеток на 1000 гепатоцитов является морфологическим критерием активной стадии ВИЧ-инфекции, указывает на необходимость назначения или модификации проводимой противовирусной терапии ВИЧ-инфекции.