Добавил:
Sekretar
kiopkiopkiop18@yandex.ru
t.me/Prokururor I Вовсе не секретарь, но почту проверяю
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз:
Предмет:
Файл:Ординатура / Хирургия / Библиотека им академика М.И. Перельмана / Книга_2710_Библиотеки_им_академика_М_И_Перельмана
.pdf
160
Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
Глава 1. Общеклинические методы исследования кров и
а
Исследуемая
сыворотка
(неполные
антитела)
Эритроциты донора
(0(1); Rh+)
Рис. 1.109. Схема проведения непрямой пробы Кумбса.
а, б - первый и второй этапы исследования. (Объяснение в тексте.)
Определение антител к эритроцитам
Эритроциты донора 6 Эритроциты,
Эритроциты, Стандартная
юбработанные» антиглобулиновая
исследуемой
сывороткой
сыворотка
(антитела к Ig)
Агглютинация эри'
Антитела к IgI
Неполные антитела к эритроцитам обнаруживаются при помощи прямого и непрямого
ста Кумбса. Непрямая проба Кумбса основана на выявлении агглютинации эритроцит
нагруженных неполными антителами, которая появляется при добавлении антиглобулин
вой сыворотки.
Проба осуществляется в два этапа. Вначале проводится сенсибилизация стандарта
резус-положительных эритроцитов донора О (I) группы. Каплю взвеси эритроцитов внос
в пробирку, наслаивают на них несколько капель исследуемой сыворотки, в которой пре
полагают наличие антител к эритроцитам, и инкубируют 40 мин при 37°С. Эритроц
осторожно отмывают от сыворотки физиологическим раствором. Неполные антитела, ее
они присутствуют в исследуемой сыворотке, фиксируются на эритроцитах, но не могу!
вызвать их агглютинацию (рис. 1.109, а).
На втором этапе пробы на сухую тарелку наносят каплю стандартной антиглобули
вой сыворотки, содержащей антитела к человеческим иммуноглобулинам, и добавля"
туда эритроциты, на которых предположительно фиксированы неполные антитела иссл
дуемой сыворотки. Если на предыдущем этапе исследования на поверхности эритроци
действительно фиксировались противоэритроцитарные антитела, последние взаимод
ствуют с антителами к иммуноглобулину стандартной антисыворотки (рис. 1.109, б). В
зультате происходит агглютинация (склеивание) эритроцитов.
При прямой реакции Кумбса используют собственные эритроциты пациента, котор
предположительно уже были сенсибилизированы аутоантителами. Эритроциты добавля
в антиглобулиновую сыворотку: при наличии на их поверхности фиксированных иммун^
глобулинов (антител к эритроцитам) возникает агглютинация эритроцитов.
Аутоантитела к эритроцитам обнаруживают при:
• аутоиммунных гемолитических анемиях;
• гемолитической болезни новорожденных;
• системных заболеваниях соединительной ткани;
• болезни Шегрена;
• хроническом активном гепатите и других заболеваниях.
Антинуклеарные (антиядерные) факторы
Антинуклеарные факторы (АНФ) - это антитела (чаще иммуноглобулины IgG), связан
с теми или иными структурами клеточного ядра. Для их определения чаще всего испо
зуется метод непрямой иммунофлуоресценции. АНФ нередко обнаруживают при С
системной склеродермии, ревматоидном артрите, полимиозите и других аутоиммун
ревматических болезнях (табл. 1.19). При СКВ антинуклеарные антитела определя
1.5. Иммунологические исследования
161
в 95% случаев. Причем нарастание титра
АНФ является ранним (иногда доклиническим) признаком обострения.
• Тип распределения флуоресцентной
метки имеет дифференциальное диагности-
ческое значение. Диффузное окрашивание
с равномерным распределением метки наименее специфично, но чаще всего встреча-
ется при СКВ, периферическое окрашива-
ние - при волчаночном нефрите, пятнистое
характерно для системной склеродермии,
лекарственного волчаночного синдрома,
смешанного заболевания соединительной
ткани, синдрома Шегрена и т.п.
Обнаружение повышенного титра АНФ
требует дальнейшего исследования специфичности антинуклеарных антител.
Антитела к ДНК
Для определения антител к нативной двуспиральной ДНК используют различные
I иммунологические методы, в том числе
I реакцию связывания комплемента, реак-
цию пассивной гемагглютинации, метод
иммунодиффузии. Более точные результаты
получают с помощью связывания антител
С ДНК, меченной
125
1.
Повышенный уровень антител к натив-
ной ДНК более специфичен для СКВ и волчаночного нефрита, чем определение АНФ.
Антифосфолипидные антитела
Заболевания, сопровождающиеся появлением
АНФ (Lawlor G.J., Fisyer T.J., Adelman D.C., 1995)
Аутоиммунные заболевания
Системная красная волчанка
Дискоидная красная волчанка
Смешанное заболевание соединительной ткани
Первичный антифосфолипидный синдром
Ревматоидный артрит
Ювенильный ревматоидный артрит
Системная склеродермия
Полимиозит
Синдром Шегрена
Хронический активный гепатит
Хронический лимфоцитарный тиреоидит
Гемобластозы и другие злокачественные забо-
левания
Заболевания легких
Идиопатический фиброзирующий альвеолит
Хронический бронхит
Туберкулез
Гистоплазмоз
Другие заболевания и состояния
Хронический аутоиммунный гастрит
Неспецифический язвенный колит
Мембранозная нефропатия
Лепра
Миастения
Инфекционный мононуклеоз
Иммунная гемолитическая анемия
Применение некоторых лекарственных средств
Пожилой возраст
Аутоиммунные заболевания в семейном анамнезе
Таблица 1.19
нтитела к фосфолипидам (АФЛ) — это ге-
югенная группа аутоантител, связывающихся с отрицательно заряженными и нейтраль-
ми фосфолипидами. Увеличение содержания АФЛ используется для диагностики антифосфолипидного синдрома, для которого характерны склонность к артериальным и венозным тромбозам и тромбоэмболическим осложнениям. Их причиной являются повышение
ртываемости крови, а также взаимодействие АФЛ с фосфолипидами эндотелиальной
ики и тромбоцитов, что приводит к выраженной эндотелиальной дисфункции и агрега-
ции тромбоцитов.
Антифосфолипидные антитела часто выявляются при СКВ и первичном антифосфо-
[пидном синдроме. К числу АФЛ, имеющих наибольшее диагностическое значение, относятся волчаночный антикоагулянт и антитела к кардиолипину. Волчаночный антикоагу-
тт (ВА), представляющий собой иммуноглобулины IgG и/или IgM, подавляет несколько
юфолипид-зависимых коагуляционных реакций и ассоциируется с увеличением АЧТВ,
поддающимся коррекции после добавления фосфолипидов или смешивания исследуемой плазмы с нормальной. Антитела к кардиолипину (АКЛ), определяемые с помощью
твердофазного иммуноферментного анализа или путем реакции преципитации с кардиолипиновым антигеном, особенно АКЛ класса IgG, также свидетельствуют о развитии анти-
[фосфолипидного синдрома, в том числе у пациентов с СКВ.
162
Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
Антинейтрофильные цитоплазматические антитела
Глава 1. Общеклинические методы исследования кров и
Антинейтрофильные цитоплазматические антитела (АНЦА) - это антитела к цитоплазме
нейтрофилов. Для их определения используют метод иммунофлуоресценции с применен
ем в качестве клеточного субстрата фиксированных этанолом нейтрофилов. Повышеннь
уровень АНЦА наиболее часто выявляют при гранулематозе Вегенера, узелковом пер
артериите с поражением мелких сосудов, идиопатическом некротизирующем гломерул
нефрите, синдроме Чарга-Стросса, при других васкулитах, протекающих с поражение
легких и почек, а также при аутоиммунных заболеваниях кишечника (язвенном колит
болезни Крона) и первичном склерозирующем холангите.
Криоглобулины
Криоглобулины - это иммуноглобулины сыворотки крови, которые обратимо преципитир
ют при температуре ниже 37°С. Когда кровь попадает в участки тела, температура которы
ниже 37°С, например в кожу нижних и верхних конечностей, температура которой мож
достигать 30-32°С, криоглобулины преципитируют, что приводит к нарушению микр
циркуляции, микротромбозам, геморрагиям, развитию васкулитов и нарушению трофи
тканей, что и является основным клиническим проявлением криоглобулинемии. К хара
терным проявлениям криоглобулинемии относятся синдром Рейно, акроцианоз, сухая га
грена пальцев, геморрагическая сыпь, которая обычно локализуется на ногах, особенн
в области голеностопных суставов, где могут образовываться язвы. При переохлаждени
наблюдаются артралгии и ограничение подвижности суставов. Если криоглобулины обл
дают свойствами холодовых агглютининов, возможен внутрисосудистый гемолиз. К поз
ним осложнениям данного синдрома относится ХПН.
В зависимости от состава различают: 1) моноклональные криоглобулины, состоящие
из иммуноглобулинов какого-либо одного класса (IgG, IgM или IgA); 2) поликлональные
криоглобулины, в состав которых входят иммуноглобулины IgG, IgM и IgA; 3) смешанные
криоглобулины (моноклональные + поликлональные IgG, IgM и IgA).
В таблице 1.20 представлены наиболее частые причины развития вторичных криогл
булинемий. Смешанная криоглобулинемия очень характерна для аутоиммунных забол
ваний и обычно проявляется васкулитами кожи. Гепатиты А, В, С всегда сопровождаютс
криоглобулинемией. Эссенциальная (первичная) смешанная криоглобулинемия по свои;
клиническим проявлениям нередко напоминает геморрагический васкулит и СКВ. У мг
гих больных развивается гломерулонефрит и ХПН.
Заболевания, сопровождающиеся вторичной криоглобулинемией
Таблица 1.20
Состав криоглобулинов Заболевания
Моноклональные иммуноглобулины Миеломная болезнь
Макроглобулинемия Вальденстрема
Поликлональные иммуноглобулины IgG, IgM и IgA Гемобластозы
Коллагенозы
Инфекции, особенно гепатит С
Смешанные криоглобулины СКВ
Узелковый периартериит
Синдром Шегрена
Болезнь Кавасаки
Гемобластозы
Хронические инфекции
Гепатиты А, В, С
1.5. Иммунологические исследования
163
I Для обнаружения криоглобулинов кровь забирают предварительно нагретым шприцем
и инкубируют при 37°С до образования сгустка. Отделившуюся сыворотку охлаждают до
4°С и через 3 сут. определяют преципитаты. Более точный метод обнаружения криоглобулинов основан на спектрофотометрическом определении белка в отмытом преципитате,
полученном из фиксированного объема сыворотки.
В норме сыворотка содержит не более 80 мкг/мл криоглобулинов, а при криоглобулине-
мии их концентрация может достигать 500-5000 мкг/мл.
Ревматоидный фактор
Ревматоидный фактор (РФ) - это аутоантитела к Fc-фрагменту иммуноглобулина класса
IgG. Сам ревматоидный фактор чаще представлен иммуноглобулином IgM, хотя доказано
существование РФ, относящихся к классу G или А. Наибольшее распространение получили два метода определения РФ: 1) реакция агглютинации эритроцитов барана (реакция
Ваалера-Роуза); 2) латекс-тест. Оба метода основаны на способности РФ агглютинировать эритроциты барана или преципитировать мелкие (0,8 мкм) синтетические латексные
частицы, на которых предварительно адсорбирован IgG. С этой целью эритроциты барана
ели латексные частицы вначале обрабатывают гамма-глобулином, содержащим IgG, а затем добавляют исследуемую сыворотку. Реакция Ваалера-Роуза считается положительной
при разведении исследуемой сыворотки 1:40, а латекс-тест - 1:20 и выше,
i Для более точного определения РФ используют также метод непрямой иммунофлуорес-
ценции и радиоиммунный анализ.
Положительный ревматоидный фактор наиболее часто обнаруживают при ревматоид-
ном артрите (от 60 до 80%), причем латекс-тест оказывается более чувствительным, чем
реакция агглютинации эритроцитов барана. Величина титра разведения сыворотки обычно
хорошо коррелирует с активностью патологического процесса. В то же время отсутствие
ревматоидного фактора не исключает наличие ревматоидного артрита (так называемые
серонегативные формы заболевания). Следует также помнить, что ревматоидный фактор
может быть выявлен и при других заболеваниях внутренних органов:
1 Синдром Шегрена (РФ выявляется в 90% случаев).
2; Полимиозит (50% случаев).
3 СКВ (35% случаев). "
4 Эссенциальная смешанная криоглобулинемия (30% случаев).
5( Анкилозирующий спондилит (5-10% случаев).
6, Артриты при хронических воспалительных заболеваниях кишечника (5-10% случаев).
I Псориатический артрит (5-10% случаев).
& Идиопатический фиброзирующий альвеолит (60% случаев).
Инфекционный эндокардит (40% случаев).
10. Хронический активный гепатит (25% случаев).
П. Цирроз печени (25% случаев).
12,Саркоидоз (15% случаев).
13.Здоровые лица старше 80 лет (низкий титр РФ <1:80 в 30% случаев),
в Возможно также обнаружение РФ в низких титрах при ревматизме, хотя в большинстве
случаев характерно его отсутствие.
:
И-клетки
LE-клетки
(Lupus Erythematosus cells - «клетки красной волчанки») - это нейтрофилы или
йоноциты с фагоцитированными ядрами разрушенных клеток, покрытых антинуклеарными антителами класса IgG. LE-клетки обнаруживают у 60-70% больных СКВ и лекарственным волчаночным синдромом, у 10-20% больных дискоидной волчанкой, у 10-15%
больных хроническим активным гепатитом, у 5-10% больных ревматоидным артритом и
164
Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
Глава 1. Общеклинические методы исследования кров и
синдромом Шегрена и еще реже - при системной склеродермии и других диффузных з
болеваниях соединительной ткани.
Определение LE-клеток - первый метод лабораторной диагностики СКВ, который бь
разработан в 1948 г. Однако в настоящее время он редко применяется для диагноста
этого заболевания в связи с его относительно низкой чувствительностью и трудоемкость
выявления LE-клеток.
Циркулирующие иммунные комплексы
В последние годы большое диагностическое значение придают определению в сыворо
крови циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). Они представляют собой раствор
мые комплексы антиген-антитело, которые в норме фагоцитируются макрофагами и р
рушаются.
Для определения ЦИК используют метод осаждения (преципитации) ЦИК раст
ром полиэтиленгликоля. После инкубации и центрифугирования выпавшие в осадок Щ
растворяют раствором едкого натра и определяют их содержание в растворе на спек~
фотометре, выражая количество иммунных комплексов в единицах оптической плотно
Определение ЦИК в сыворотке крови возможно также с помощью метода иммунофлуоресценции.
Увеличение концентрации ЦИК может иметь два важных в практическом отношен
следствия. Во-первых, ЦИК могут приводить к повреждению мембран и способство
развитию иммунопатологического процесса в органах. Особенно часто это наблюдает!
при снижении функциональной активности тканевых макрофагов. Во-вторых, ЦИК об/
дают способностью активировать систему комплемента, хемотаксическим действием по
отношению к лимфоцитам и нейтрофилам, активируют систему свертывания крови,
ниновую систему, выделение гранулоцитами и макрофагами биологически активных
ществ и т.д. Эти эффекты ЦИК сопровождаются развитием воспачения тканей.
Повышение концентрации ЦИК обнаруживают при многих заболеваниях, в основе к>
торых лежат нарушения клеточного иммунитета, в первую очередь при различных ауто
мунных заболеваниях.
Определение антистрептолизина-0
Антистрептолизин-0 представляет собой антитела к антигену стрептококка - стрепто
зину-О. Последний, как известно, обладает свойством гемолизировать эритроциты. С'
воротка, содержащая антитела к стрептолизину-О, инактивирует это свойство благод
образованию иммунных комплексов антиген-антитело.
К исследуемой сыворотке различных разведений добавляют антиген - стрептолизин
а затем эритроциты. Если сыворотка содержит в достаточном количестве соответств
щие антитела, которые связывают стрептолизин-О, гемолиза эритроцитов не происхо)
Если же антител мало или они отсутствуют, стрептолизин-О проявляет свои гемолизир
щие свойства.
При оценке результатов теста учитывают максимальное разведение сыворотки, кото
еще инактивирует действие стрептолизина-О. В норме титр антистрептолизина-0 не
вышает 1:50-1:200 (250 AEST-0 в 1 мл). Более высокие концентрации указывают нап
несенную стрептококковую инфекцию и характерны для таких заболеваний, как анг
хронический тонзиллит, скарлатина, гломерулонефрит, ревматизм и др. Наиболее высо
титры антистрептолизина-0 (500 AEST-0 в 1 мл и выше) наблюдаются при ревматизм^
гломерулонефрите.
Следует помнить, что при ревматоидном артрите (в отличие от ревматизма) обнар
ваются низкие титры антистрептолизина-О, что может быть использовано для диффе
циальной диагностики этих двух заболеваний.
1.5. Иммунологические исследования
Определение антигенов
165
•акции гуморального иммунитета в последние годы все чаще используют для определения опухолевых, вирусных, бактериальных и прочих антигенов, что нередко имеет решающее значение в диагностике. Наиболее информативны методы иммунологического определения следующих антигенов:
• антигенов вирусных гепатитов (HBsAg, HbeAg, HbcAg);
• а-фетопротеина;
• ракового эмбрионального антигена (РЭА);
• других опухолевых антигенов;
• антигенов вирусов, бактерий, грибов, микоплазмы и т.п.;
• антигена IgE и др.
Кроме того, современные методы клинической иммунологии позволяют обнаруживать
в биологических средах ничтожно малые количества некоторых органических и неорганических веществ (гормонов, ферментов, витаминов, биологически активных веществ,
антител к определенным тканям и органам, лекарств и т.п.), которые не выявляются клас-
сическими биохимическими и иммунологическими методами. Наиболее чувствительными
шяются радиоиммунный и иммуноферментный методы исследования.
Радиоиммунный метод, являющийся наиболее информативным, основан на исследо-
гаи характера взаимодействия антитела с антигеном с образованием иммунного комплекса, в один из компонентов которого (антиген или антитело) введена радиоактивная
метка. Наибольшее распространение получил метод конкуренции за специфические анти-
тела
меченного радиоактивным изотопом антигена и такого же антигена, но свободного
ог радиоактивной метки, количество которого необходимо определить в исследуемой биологической среде.
• С этой целью в исследуемую жидкость, в которой предполагается наличие антигена,
добавляют известное количество такого же меченого антигена и стандартное количество
ангисыворотки с соответствующими антителами (см. рис. 1.110, а). Если в исследуемой
адкости отсутствует искомый специфический антиген, то около 70-80% меченого антигена связывается с антителами, обусловливая высокую радиоактивность образующегося
преципитата (см. рис. 1.110, а). Если же в биологической среде присутствует искомый
антиген, он конкурирует с меченым антигеном и связывает часть антител. В результате
радиоактивность преципитата падает по сравнению с контролем (см. рис. 1.110, б). На этом
принципе основано количественное определение антигенов или антител.
Ь Иммуноферментный метод также основан на учете реакции антиген-антитело, при-
чем в качестве метки, позволяющей обнаружить иммунный комплекс, используют ферменты, например пероксидазу.
Ь Вначале на стенках полистироловых пробирок сорбируют антитела против опреде-
ленного антигена (рис. 1.111, а). В эту же пробирку вносят исследуемую сыворотку (или
другой биологический субстрат). Если там содержатся искомые антигены, они взаимодей-
ствуют с антителами и вместе с ними фиксируются на стенках пробирки (рис. 1.111, б).
После этого в пробирку вводят антитела к данному антигену, меченные ферментом, которые также присоединяются к образовавшемуся иммунному комплексу и остаются на стен-
ках пробирки (рис. 1.111, в). Для обнаружения и количественной оценки этих комплексов
в пробирку добавляют перекись водорода (Н202) и хромогены. Фиксированный к стенке
пробирки фермент (пероксидаза) разлагает Н202 с выделением кислорода. Последний
окисляет хромоген, который приобретает желтый цвет (рис. 1.111, в). Интенсивность окра-
шивания и, соответственно, количество искомого антигена оценивают фотометрически.
! I Следует добавить, что в последние годы для количественного радиоиммунного и им-
муноферментного определения различных антигенов и антител в биологических средах
все чаще используют так называемые моноклональные антитела. Последние получают
н« путем иммунизации животных, а искусственно, путем синтеза так называемым моно-
цоном, т.е. культурой клеток, происходящих из одного сенсибилизированного лимфоцита.
166
Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
Рис. 1.110. Принцип радиоиммунного метода. Образование радиоактивных преципитатов при |
отсутствии в исследуемой жидкости искомого антигена (б) и при его наличии (в), а - добавле-
ние в исследуемую жидкость стандартной антисыворотки с антителами и антигена, меченного
радиоактивным изотопом.
Глава 1. Общеклинические методы исследования кров и
н2о
Антитела
Исследуемая
сывооотка Антигены
Антитела, меченные
ферментом
2
и хромогены
•ГУ,
Антитело
Рис. 1.111. Схема проведения иммуноферментного анализа.
а - антитела против антигена сорбированы на стенках пробирки; б - добавление исследуемой сыворотки
к искомым антигенам, которые взаимодействуют с антителами и фиксируются на стенках пробирки; в - вве-1
дение антител к данному антигену, меченных ферментом (пероксидазой), которые также фиксируются на
стенках пробирки; г - добавление перекиси водорода и хромогена, который под действием кислорода,
выделяющегося при разложении Н202 пероксидазой, изменяет свой цвет на желтый.
Фермент
(пероксидаза)
Изменение цвет
хромогена (жея
1.5. Иммунологические исследования
167
Моноклональные антитела отличаются от обычных антител, полученных с помощью классической иммунизации животных, очень высокой специфичностью и реагируют только на
определенный антиген.
К числу наиболее чувствительных и высокоспецифичных иммунологических методов
обнаружения антигенов относится метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), который
позволяет обнаруживать в исследуемом материале присутствие нескольких молекул искомого антигена или единичных возбудителей.
В отличие от серологических методов диагностики, анализ проводится на генетиче-
ском уровне. Благодаря применению ПЦР-технологии удается выявить и воспроизвести
огромное количество копий того участка ДНК, который принадлежит, например, внедрившемуся в организм чужеродному агенту. С помощью ДНК-полимеразы происходит многократное удлинение цепи с комплиментарной последовательностью азотистых оснований,
свойственной этому агенту. Для этого достаточно, чтобы в исследуемой пробе содержался
участок его ДНК с 200 парами оснований.
Окончательная оценка результатов ПЦР проводится с помощью иммуноферментного
ализа, электрофореза в полиакриламидном, плоском агаровом геле.
Основными преимуществами ПЦР являются быстрота выполнения анализа, высокая
вствительность и специфичность диагностики.
[Запомните: 1. Практически все методы исследования гуморального иммунитета основаны
I на учете реакции антиген-антитело, причем при постановке теста один из участников этой
реакции известен, а наличие другого предполагается.
2. Для идентификации иммунных комплексов часто используют их свойства образовывать
преципитаты (выпадать в осадок) или агглютинировать различные клетки или частицы
(например, эритроциты, частицы латекса и т.д.).
3. Наибольшей точностью обладают методы, основанные на обнаружении и клинической
оценке меток (маркеров), располагающихся на участвующих в иммунной реакции антителах (радиоактивные вещества, изотопы, ферменты, флуорохром): радиоиммунный, имму-
ноферментный и метод иммунофлуоресценции.
К В таблице 1.21 представлено диагностическое значение выявления некоторых маркеров
опухолей, определяемых биохимическими и иммунологическими методами.
При интерпретации результатов определения ПСА следует помнить, что небольшое повышение антигена в крови до 10-15 нг/мл возможно при простатите и доброкачествен-
ной аденоме предстательной железы. Кроме того, важно помнить, что тест с определением
ПСА проводится не ранее чем через 7-10 дней после пальцевого ректального исследования. цистоскопии, трансректального УЗИ, биопсии простаты и тепловых процедур. Необходимо за 2-3 дня до исследования избегать эякуляции.
к Повышение содержания СА 19-9 иногда может наблюдаться не только при раке под-
желудочной железы, но и при механической желтухе, обусловленной внепеченочным хо-
лестазом.
1.5.4. Клеточный специфический иммунитет
Клеточный специфический иммунитет обеспечивается сенсибилизированными Т-лимфошггами (Т-киллерами), а также некоторыми представителями О-лимфоцитов (NK-клетки,
естественные клетки-киллеры). Т-лимфоциты (киллеры), реагируя с антигеном, выделяют лимфокины, обладающие цитотоксическим действием. Они нарушают проницаемость
клеток-мишеней и вызывают их гибель. Кроме того, лимфокины повышают проницаемость
капилляров, усиливают кровоток и способствуют развитию воспаления. Благодаря своим
хемотаксическим свойствам лимфокины привлекают в очаг образующегося воспаления
168
Рекомендовано к покупке и изучению сайтом МедУнивер - https://meduniver.com/
Глава 1. Общеклинические методы исследования кров и
иагностическое значение некоторых онкомаркеров
д
Онкомаркеры
а-фетопротеин (АФП)
Простатспецифический
антиген (ПСА)
Раково-эмбриональный
антиген (РЭА)
СА 125
СА 15-3
СА 19-9
СА 72-4
Нейронспецифическая
енолаза (НСЕ)
Нормальная концентрация
О-ЮМЕ/мл
0-4,0 нг/мл Рак предстательной железы
0-4,0 нг/мл Рак толстой кишки
<35 МЕ/мл
<26 МЕ/мл Рак молочной железы
<10 МЕ/мл
0-4,0 МЕ/мл Рак желудка
0-15 нг/мл
Гепатомы
Метастазы в печень (только в 15-20% случаев)
Рак поджелудочной железы
Рак прямой кишки
Рак печени
Рак молочной железы
Рак матки
Рак яичников
Рак желудка
Рак легких (РЭА в плевральном выпоте)
Рак яичников
Рак поджелудочной железы
Рак яичников
Рак легких
Мелкоклеточная карцинома легких
Нейробластома
Нейроэндокринные опухоли
Заболевания
нейтрофилы, макрофаги и новое количество лимфоцитов, стимулируя функциональну
активность этих клеток. Таким образом, цитотоксический эффект Т-лимфоцитов связа
как с действием самих Т-киллеров, так и макрофагов (фагоцитоз).
Таблица 1.)
Запомните: Специфический клеточный иммунитет наибольшее значение имеет в форми-
ровании местных реакций замедленного типа (например, при отторжении трансплантата
или возникновении контактного дерматита), а также в осуществлении защиты организма
при туберкулезе, опухолях, вирусных и грибковых заболеваниях.
Следует помнить, что у новорожденных специфический иммунитет обеспечивает!
только клеточной системой и лишь через несколько месяцев у грудных детей появлякш
плазматические клетки и возможность формирования собственных иммуноглобулинов.
Отличительными особенностями Т-лимфоцитов являются: 1) их способность к так HI
зываемой бластной трансформации; 2) наличие на их мембранах рецепторов к эритрош
там барана, а также рецепторов к Fc-учаеткам иммуноглобулинов, причем Т-супрессор
имеют рецепторы к Fc-фрагменту IgG и так называемые теофиллинчувствительные р(
цепторы, а Т-хелперы - только рецепторы к IgM. Эти особенности легли в основу колич<
ственных методов оценки как всей популяции Т-лимфоцитов, так и отдельных субпопул
ций (Т-хелперы, Т-супрессоры, Т-киллеры).
Методы исследования
Определение количества Т-лимфоцитов
Тест розеткообразования - классический метод определения количества Т-лимфоцито
в периферической крови - основан на наличии на мембране Т-лимфоцитов всех субщ
пуляций рецепторов к эритроцитам барана и способности Т-лимфоцитов образовыват
с ними прочные комплексы (так называемые розетки) (рис. 1.112).
Кровь обследуемого пациента в количестве 10 мл вносят в пробирку с раствором геп;
рина и осторожно наслаивают на смесь фиколл-гипака, который способствует выделени
1.5. Иммунологические исследования
169
лимфоцитов, и центрифугируют. После
центрифугирования эритроциты оседают
на дно пробирки, а лимфоциты располагаются тонким слоем на границе раствора
фиколл-гипака и плазмы. Взвесь лимфоцитов осторожно извлекают из этого слоя (интерфазы), доводят до концентрации 2—4• 106/
мд(2-4Т09/л) и смешивают с взвесью эритроцитов барана в соотношении 1:1.
Полученную смесь инкубируют при 37°С
в течении 10 мин и снова центрифугируют,
-i.n2.TecT розеткообразования для
Рис
после чего выдерживают в холодильнике определения числа Т-лимфоцитов (схема),
при температуре 4°С в течение нескольких
часов. Подсчет клеток производят в камере Горяева при люминесцентной микроскопии.
Подсчитывают число розеток на 100 лимфоцитов и определяют процентное содержание
Т-лимфоцитов. Для определения абсолютного количества Т-лимфоцитов в день исследования производят общий клинический анализ крови.
В норме содержание Т-лимфоцитов в периферической крови колеблется от 50 до 70%
от общего количества лимфоцитов (в среднем 54,3±1,0%).
Определение активных Т-лимфоцитов
Активные Т-лимфоциты - это клетки, способные к спонтанному розеткообразованию без
,:дварительной инкубации. Ход исследования тот же, что и при определении общего чис-
ла Т-лимфоцитов, за исключением этапа инкубации. В норме в периферической крови со-
держится от 23 до 40% активных Т-лимфоцитов (в среднем 34,6±1,9%).
Определение субпопуляций Т-лимфоцитов
Определение субпопуляций Т-лимфоцитов основано на выявлении так называемых тео-
филлинчувствительных и теофиллинрезистентных лимфоцитов. Клеточные мембраны
Т-супрессоров, как было сказано выше, имеют рецепторы к теофиллину, который при взаимодействии с клеткой ингибирует реакцию спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана. Т-хелперы таких рецепторов не содержат, поэтому при взаимодействии с эритроцитами барана даже при добавлении теофиллина образуются розетки.
• Методика количественного определения Т-супрессоров и Т-хелперов мало отличается
от описанного выше теста розеткообразования, за исключением добавления в инкубационную среду раствора теофиллина. При этом Т-супрессоры (теофиллинчувствительные
гаетки) теряют способность розеткообразования с эритроцитами барана, а Т-хелперы (теофиллинрезистентные клетки) такую способность сохраняют (рис. 1.113).
; В норме соотношение Т-супрессоров и Т-хелперов составляет 1:3.
В последние годы для определения субпопуляций Т-лимфоцитов используют добавление к взвеси лимфоцитов моноклональных антител и комплемента, что приводит к лизису соответствующей фракции лимфоцитов. С помощью моноклональных антител можно
выявить все известные субпопуляции Т-, В- и О-лимфоцитов, в том числе так называемые
ственные клетки-киллеры.
Определение количества В-лимфоцитов
Методы определения количества В-лимфоцитов основаны на наличии на поверхности
этих клеток специфических рецепторов к иммуноглобулинам и комплементу (С3). Наиболее простым способом количественной оценки В-лимфоцитов является модифициро-
Соседние файлы в папке Библиотека им академика М.И. Перельмана