Инструкция к практическому занятию Гидролиз нуклеопротеинов. Качественные реакции на составные части нуклеопротеинов
Принцип метода: в результате процесса кислотного гидролиза дрожжей образуется смесь составных компонентов сложных белков - нуклеопротеинов: пентоз, фосфорной кислоты, азотистых оснований и белка.
Материальное обеспечение:гидролизат дрожжей, раствор сульфата меди, раствор гидроксида натрия, пробирки, штативы.
Ход работы.Студенты получают для работы готовый гидролизат.
1. Биуретовая проба на белок.
Принцип метода: В щелочной среде раствор белка при взаимодействии с ионами меди приобретает сине-фиолетовую окраску. Этой реакцией открывают пептидную связь в белках.
Материальное обеспечение:гидролизат дрожжей, раствор сульфата меди, раствор гидроксида натрия, пробирки, штативы.
Ход работы: к 10 каплям гидролизата дрожжей добавляют 10 капель 10% раствора щелочи и 1 каплю 1% раствора сульфата меди (2+). Через 15 минут появляется фиолетовое окрашивание.
2. Реакция Молиша на пентозы.
Принцип метода:При взаимодействии концентрированной серной кислоты с пентозами происходит их дегидратация и образуется фурфурол, дающий с тимолом продукты конденсации красного цвета.
Материальное обеспечение:гидролизат дрожжей, спиртовый раствор тимола, концентрированная серная кислота, пробирки, штативы.
Ход работы:К 10 каплям гидролизата прибавляют 3 капли спиртового раствора тимола и по стенке пробирки осторожно(!) добавляют 10 капель концентрированной серной кислоты. При встряхивании на дне пробирки образуется продукт красного цвета.
3. Реакция на рибозу и дезоксирибозу.
Принцип метода: Дифениламин с дезоксирибозой дает синее окрашивание, а с рибозой – зеленое
Материальное обеспечение:гидролизат дрожжей, раствор дифениламина, пробирки, штативы, водяная баня.
Ход работы.К 5 каплям гидролизата дрожжей добавляют 20 капель 1% раствора дифениламина и кипятят пробирку на водяной бане 15 минут. При этом раствор окрашивается в сине-зеленый цвет.
Молибденовая проба на фосфорную кислоту.
Материальное обеспечение: гидролизат дрожжей, молибденовый реактив, пробирки, штативы, водяная баня.
Ход работы: к 10 каплям гидролизата приливают 20 капель молибденового реактива и кипятят. Жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет. Пробирку охлаждают в холодной воде и на дне появляется кристаллический лимонно-желтый осадок фосфорномолибденовокислого аммония.
ВЫВОДЫ:
Подпись преподавателя:
Приложение 1
Граф логической структуры
Тема 3.3.Исследование репликации днк и транскрипции рнк. Анализ механизмов мутаций и репарации днк
Актуальность темы
Проблема биосинтеза нуклеиновых кислот является предметом внимания многих научных коллективов. До сих пор не раскрыты в деталях механизмы передачи генетической информации, закодированной в ДНК. Генетическая информация в ДНК реализуется путем программированного через мРНК синтеза белков, определяющих в конечном счете фенотипические признаки живых организмов.
Регуляция экспрессии генов - это один из фундаментальных механизмов адаптации живых организмов к условиям внешней среды. Все живые организмы на земле подвергаются постоянному действию мутагенных факторов, что сопровождается нестабильностью ДНК, связанной с постоянными точечными мутациями. В процессе эволюции живых организмов возникли специальные молекулярные механизмы, которые противодействуют постоянным повреждениям молекул ДНК и репарируют изменения в ее строении, которые произошли.
Генная инженерия– научно-практическое направление современной биомедицин-
ской науки. Биотехнологические методы генной инженерии позволяют в будущем создать новые медицинские технологии терапии наследственных заболеваний практически неизлечимых в наше время, а также синтез лекарственных веществ: интерферонов, гормонов, ферментов, иммунобиологических препаратов и т.д.
Знание этого материала позволит Вам осознанно решать вопросы диагностики , лечения, профилактики наследственных болезней.
Теперь ознакомьтесь с целями занятия.
Общая цель. Уметь интерпретировать информацию о биосинтезе и функционировании нуклеиновых кислот для объяснения адаптации организма к изменяющимся условиям среды, решения вопросов диагностики, лечения и профилактики наследственных и других болезней.
Конкретные цели : Цели исходного уровня:
Уметь:
|
1. Интерпретировать информацию о потоке генетической информации - экспрессии генов. |
1.Использовать знания о комплементарности азотистых оснований для понимания вторичной структуры ДНК (каф. медицинской и фармацевтической химии). |
|
2. Интерпретировать информацию о матричных синтезах ДНК и РНК и их регуляции. |
2. Интерпретировать первичную, вторичную структуру ДНК и всех видов РНК (каф. медицинской и фармацевтической химии). |
|
3.Применять знания о молекулярных механизмах наследственности и реализации генетической информации для диагностики, лечения и профилактики наследственных и других болезней. |
3. Анализировать структуру соединений, являющихся антагонистами азотистых оснований и нарушающих синтез нуклеиновых кислот (каф. медицинской и фармацевтической химии). |
Для проверки исходного уровня Вам предлагается выполнить ряд заданий.
Задания для самопроверки и самокоррекции исходного уровня .
Задание 1.При анализе состава очищенной ДНК было обнаружено, что количество аденина и цитозина равно
А. Количеству аденина и гуанина
В. Количеству аденина и тимина
С. Количеству гуанина и тимина
Д. Количеству гуанина и цитозина
Е. Количеству тимина и цитозина
Задание 2.При анализе состава очищенной ДНК было обнаружено, что количество аденина и гуанина равно:
А.Количеству аденина и тимина
В. Количеству цитозина и тимина
С.Количеству гуанина и тимина
Д.Количеству аденина и цитозина
Е.Количеству цитозина и гуанина.
Задание 3. Фрагмент одной цепи ДНК имеет следующую нуклеодидную последовательность – ААЦГТ. Каким образом выглядит комплементарный фрагмент другой цепи ДНК ?
А. ГТГЦА
В. ТГГЦЦ
С. ААЦГТ
Д. ТТГАЦ
Е. ТТГЦА
Задание 4.Фрагмент одной из цепей ДНК имеет следующую нуклеотидную последовательность ГЦАГТТ. Каким образом выглядит комплементарный фрагмент другой цепи ДНК?
А. ГТЦАГЦ
В.ЦГТЦАА
С.ГГТЦАГ
Д. ТТТГАА
Е. ЦТТЦАА.
Задание 5. При изучении вторичной структуры РНК было установлено , что она имеет форму «клеверного листа».Что это за вид РНК?
А. мРНК
В.гяРНК
С. рРНК
Д. тРНК
Е.мяРНК
Задание 6.При изучении первичной структуры РНК обнаружены минорные азотистые основания: дигидроурацил, метилированные гуанозин и инозин. В какой РНК они содержаться?
А. мРНК
В.гя РНК
С.рРНК
Д.тРНК
Е.мяРНК.
Задание 7. В качестве противоопухолевого препарата больному был назначен 5-фторурацил . В роли антагониста какого азотистого основания он выступает?
А.Гипоксантина
В.Цитозина
С.Аденина
Д.Тимина
Е.Гуанина
Задание 8. В качестве противоопухолевого препарата было предложено вещество 6-меркаптопурин. В роли антагониста какого азотистого основания он выступает?
А.Гипоксантина
В.Цитозина
С.Аденина
Д.Тимина
Е.Гуанина.
Правильность решения проверьте, сопоставив их с эталонами ответов.
Эталоны ответов к решению заданий для самопроверки и самоконтроля исходного уровня :
1.- С; 3.- Е; 5.- Д; 7.- Д.
Информацию для восполнения исходного уровня можно найти в следующих учебниках:
1. Тюкавкина Н.А., Бауков Ю.И. Биоорганическая химия. М., “Медицина”, 1991. - С.431-448.
2. Лекции по биоорганической химии.
Содержание обучения.
Содержание обучения должно обеспечить достижения целей обучения, чему способствует граф-логической структуры изучаемой темы (Приложение 1).