Инструкция к практическому занятию Колориметрическое определение билирубина в сыворотке крови по Ван ден Бергу и Мюллеру

Принцип метода.Колориметрический метод определения билирубина основан на способности давать с диазореактивом Эрлиха розовую окраску, интенсивность которой пропорциональна концентрации присутствующего в крови билирубина.

Материальное обеспечение:. центрифужные пробирки, негемолизированной сыворотка, диазореактив, 96% раствор спирта, насыщенный раствор сульфата аммония, ФЭК.

Ход работы: в центрифужную пробирку наливают 2 мл негемолизированной сыворотки, 1 мл диазореактива, 5,8 мл 96% раствора спирта и 1 мл насыщенного раствора сульфата аммония. Хорошо встряхивают и центрифугируют при 4000-5000 об/мин до тех пор пока надосадочная жидкость не станет прозрачной. Надосадочную жидкость осторожно сливают в кювету и калориметрируют на ФЭКе с зеленым светофильтром против спирта. Затем по заранее построенной калибровочной кривой находят содержание общего билирубина в сыворотке крови.

В норме концентрація общего билирубина в плазме (сыворотке) крови составляетбилирубин : 8,5- 20,5 мкмоль/л

75 % его количества приходится на долю свободного билирубина.

Данные, полученные в г/л умножают на 100 и на пересчетный коэффициент 17,104 систему СИ. Норма билирубина в системе СИ 1,7-20,5 мкмоль/л.

Экстинция

Концентрация билирубина

РАСЧЕТ:

Клинико-диагностическое значение исследования пигментного обмена.

Один из важних субъективных признакою нарушения пигментного обмена – появление желтухи, которое отмечается обычно при уровне билирубина в крови 27-34 мкмоль/л и более.

Причины гипербилирубинемий и их классификация:

усиление гемолиза эритроцитов –гемолитическая желтуха (предпеченочная);
нарушение функции печеночных клеток – паренхиматозная (печеночная), может быть вызвана также наследственно обусловленными дефектами в процессах транспорта билирубина и образования диглюкуронида билирубина;
задержка оттока желчи - механическая (или обтурационная, постпеченочная) желтуха. Тяжесть желтухи обычно соответствует уроню билирубинемии.

Принято считать, что желтуха протекает в легкой форме, если содержание билирубина в плазме (сыворотке) не превышает 85 мкмоль/л; уровень его 86-169 мкмоль/л свидетельствует о среднетяжелой, а свыше 170 мкмоль/л – о тяжелой форме желтухи.

ВЫВОДЫ:

Подпись преподавателя: