Инструкция к практическому занятию Определение остаточного азота крови гипобромидным методом
.
Принцип метода : при действии на азотистое соединение щелочного раствора гипобромида азот вытесняется в виде газа. Остаток гипобромида определяется йодометрически.
Материальное обеспечение:. раствор гипобромида, 0,5 мл 10% раствора йодистого калия, 18% раствор соляной кислоты, 1 % раствор крахмала, 0,005 н.раствор гипосульфита натрия ,осадитель, пробирки.
Ход работы: к 1 мл центрифугата (кровь, лишенная белка) добавляют 2 мл раствора гипобромида, взбалтывают. Через 2 минуты добавляют 0,5 мл 10% раствора йодистого калия, 2 мл 18% раствора соляной кислоты, взбалтывают. Прилив 2-3 капли 1 % раствора крахмала, титруют 0,005 н.раствором гипосульфита натрия до обесцвечивания раствора. Одновременно с опытом ставят контроль: 1 мл осадителя, 2 мл гипобромида, 0,5 мл 10% йодистого калия, 2 мл 18% соляной кислоты, 2-3 капли 1% раствора крахмала и титруют 0,005 н раствором гипосульфита натрия до обесцвечивания.
Расчет: разность в количестве гипосульфита, пошедшего на титрования контроля и опыта умножают на 25 и дают ответ в мг %.Содержание остаточного азота в крови в норме составляет 20-24 мг%. Коэффициент пересчета в систему СИ равен 0,714. В норме содержание остаточного азота составляет 14,3-28,6 ммоль/л.
ВЫВОДЫ:
Подпись преподавателя:
Приложение 1
Граф логической структуры
|
ПАТОЛОГИЧЕСКИЕ СОСТОЯНИЯ, ПРИВОДЯЩИЕ К ИЗМЕ- НЕНИЮ ВЕЛИЧИНЫ ОСТАТОЧНОГО АЗОТА КРОВИ И ЕГО ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА |
Приложение 3
Тема 3.12. Исследование свертывающей, противосвертывающей и фибринолитической систем крови
Актуальность темы:
Ионы кальция регулируют в организме ряд важнейших физиологических и биохимических процессов, в частности нейромышечное возбуждение, свертывание крови, поддержание целостности мембран и транспорт через мембраны, многие ферментативные реакции, являются посредниками ряда гормонов и т.д. Многообразие физиологических функций клеток активируемых ионами кальция позволило образно назвать этот макроэлемент " королем мессенджеров”. Для минерализации костей необходимо поддержание определенной концентрации ионов кальция и фосфат-ионов во внеклеточной жидкости и надкостнице. Аномальные концентрации ионов кальция в организме могут служить причиной множества патологий и даже гибели, поэтому знание биологической роли Са+2и механизмов, поддерживающих его нормальную концентрацию в крови, необходимо студенту-медику. Лечение больных, страдающих геморрагиями и тромбозами, требует ясного понимания процессов свертывания крови и фибринолиза.
Теперь ознакомьтесь с целями занятия, продумайте их, усвойте необходимость их изучения
Общая цель
Уметь интерпретировать результаты количественного определения ионов кальция в сыворотке крови в норме и при патологиях для последующего использования этих данных в клинической практике.
Конкретные цели: Цели исходного уровня:
Уметь:
|
1. Интерпретировать роль кальция в свертывании крови и других физиоло-гических и биохимических процессах в организме. |
1. Провести осаждение ионов кальция из сыворотки крови (каф.биоорганической химии). |
|
2. Интерпретировать гормональную регуляцию уровня Са+2в плазме крови. |
2. Интерпретировать различную растворимость солей кальция для обоснования изменений его концентрации в биологических жидкостях (каф.биоорганической химии). |
|
3. Анализировать данные о содержании кальция в сыворотке крови в норме и при нарушении гомеостаза. |
3. Интерпретировать роль -СООН групп белков и других соединений как мест связывания Са 2+ (каф.биоорганической химии).
|
Для проверки исходного уровня Вам предлагается выполнить ряд заданий.
Задания для самопроверки и самокоррекции исходного уровня.
Задание 1. К сыворотке крови добавили щавелевокислый аммоний. Выпал осадок. О наличии каких ионов в крови это свидетельствует?
А. Ионов натрия
В. Ионов калия
С. SO3Н-
Д. Ионов кальция
Е. Ионов хлора.
Задание 2. При добавлении неизвестного вещества к раствору хлорида кальция выпал осадок. Выберите это вещество из предложенных:
А. Иодид калия
В. Щавелевая кислота
С. Цитрат натрия
Д. Мочевина
Е. Глюкоза.
Задание 3. Какими свойствами солей кальция можно объяснить кальцификацию (отложение кальция) стенок кровеносных сосудов, образование камней в желчном пузыре, почечных лоханках или канальцах?
А. Плохой растворимостью солей кальция
В. Способностью ионов кальция связываться с белками.
С. Хорошей растворимостью солей кальция
Д. Способностью связываться с углеводами
Е. Связыванием ионов кальция с цитратом.
Задание 4. При некоторых заболеваниях наблюдается изменение рН плазмы крови в кислую (ацидоз) или в щелочную сторону (алкалоз).
1. Как эти изменения могут отразиться на содержании в крови ионов кальция? 2.
1. 1. Ацидоз увеличивает содержание Са 2+
1. 2.. Ацидоз уменьшает уровень Са 2+.
1. 3. Алкалоз увеличивает содержание Са 2+.
1. 4. Алкалоз снижает уровень Са 2+.
1. 5. Изменение рН не влияет на содержание Са 2+.
2. Чем это можно объяснить?
2. 1. В щелочной среде уменьшается связывание Са 2+с белками.
2. 2. В щелочной среде связывание Са 2+с белками возрастает.
2. 3. В кислой среде возрастает переход кальция в ионизированную форму.
2..4. В щелочной среде возрастает переход кальция в ионизированную форму.
2. 5. В кислой среде снижается переход кальция в ионизированную форму.
Задание 5. Установлено, что связывание Са 2+с белками плазмы крови предотвращает возможность образования осадка. Какие функциональные группы этих биополимеров связываются с ионами кальция?
А. -NН3+
В. –СН3
С. –ОН
Д. –СОО-
Е. -SН
Правильность решения задач проверьте, сопоставив их с эталонами ответов.
Эталоны ответов к решению заданий для самопроверки и самокоррекции исходного уровня:
1. - Д, 3. - A, 5. - Д.
Информацию для восполнения исходного уровня можно найти в следующей литературе:
1. Тюкавкина Н.А.,Бауков Ю.И. Биоорганическая химия. -М.: “Медицина”, 1991. – С.322.
2. Лекции по биоорганической и биофизической химии.
Содержание обучения.
Содержание обучения должно обеспечивать достижение целей обучения, чему способствует граф логической структуру изучаемой темы (Приложение 1).
Основные теоретические вопросы, позволяющие выполнить целевые виды деятельности:
1.. Гемостаз: определение, структурно-функциональные компоненты, сосудисто-тромбоцитарный и коагуляционный гемостаз.
2. Свертывающая система крови: факторы, их характеристика, механизмы активации.
3. Включение процесса тромбообразования: внешний и внутренний механизмы свертывания крови, их взаимосвязь.
4. Механизм превращения фибриногена в фибрин.
5.Роль витамина К: химическая природа, природные источники,роль в гемокоагуляции.
6. Роль Са2+ в процессе свертывания крови. Биологическая роль Са2+в организме. Гормональная регуляция концентрации Са2+ в крови.
7. Образование и стабилизация тромба, роль трансглутаминазы в этом процессе.
8. Противосвертывающая система, её физиологическое значение. Природные и искусственные антикоагулянты ( прямого и непрямого действия).
9. Фибринолиз.
10. Наследственные нарушения процесса свертывания крови.
11. Принцип метода и ход определения содержания кальция в сыворотке крови.
Найти материал для освоения этих вопросов можно в одном из следующих источников.
Обязательная литература.
1. Губський Ю.Г. Біологічна хімія.- Київ-Тернопіль.:”Укрмедкнига”, 2000.-С.112, 376-381, 432-438.
2. Тестовые задания по биологической химии/ Под ред.Б.Г.Борзенко.-Донецк,2000.-С.252-280.
3. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия.-М.: “Медицина”,1998.-С.599-607.
4. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия.-М.: “Медицина”,1990.-С.464-472.
5. Николаев А.Я. Биологическая химия. -М.:”Высшая школа”, 1989, 1998 - С 439 –448.
6. Пустовалова Л.М. Практикум по биохимии.- Ростов-на-Дону.: “Феникс”, 1999.-С.356-357.
7. Лекции по биохимии.
8. Граф логической структуры (Приложение 1).
9. Инструкция к практическому занятию.
Дополнительная литература
1. Маршалл В. Дж. Клиническая биохимия.- М.-С-П.: “Издательство БИНОМ-Невский Диалект”, 1999. -368 с.
2.Марри Р. и др. Биохимия человека.- М.: “Мир” 1993. т.2.-С. 166-168, 193-204, 325-330.
После изучения вышеперечисленных вопросов для самопроверки усвоения материала по данной теме предлагается решить следующие целевые обучающие задачи.
Целевые обучающие задачи.
Задача 1.Известно, что некоторые реакции, в которых участвуют факторы свертывания крови, активируются ионами кальция. Какой фактор свертывания крови обладает центрами связывания кальция?
А. Фибриноген
В. Фактор Хагемана
С. Фактор Розенталя
Д. Протромбин
Е. Тканевой тромбопластин
Задача 2. Больному с повышенной свертываемостью крови для предупреждения тромбозов назначили синкумар - антивитамин К. Каков механизм действия данного препарата?
А. Образование неактивных комплексов с факторами свертывания крови
В. Связывание ионов кальция
С. Нарушение синтеза I, V, VIII, XII факторов свертывания крови
Д. Активация фибринолитической системы
Е. Нарушение образования -карбоксиглутаминовой кислоты в белках свертыва
ния крови
Задача 3. В сыворотке крови больного содержание общего кальция составляет 3,4 ммоль/л. Для какого заболевания характерно такое изменение содержания кальция?
А. Гипопаратиреоза
В. Рахита
С. Стеаторреи
Д. Панкреонекроза
Е. Гиперпаратиреоза
Задача 4. В сыворотке крови больного содержание общего кальция составляет 1,6 ммоль/л. Для какого заболевания характерно такое изменение содержания кальция?
А. Гиперпаратиреоза
В. Гипопаратиреоза
С. Гипервитаминоза Д
Д. Гипертиреоза
Е. Множественной миеломы
Задача 5. У больного, страдающего кровоточивостью, выявлена невозможность образования стабильного фибринового сгустка. С недостаточностью какого фактора свертывания крови это связано?
А. Фактора ХШ
В. Фактора ХП
С. Фактора ХI
Д. Фактора Х
Е. Протромбина
Задача 6. При проведении некоторых анализов крови важно, чтобы она не сворачивалась. Для этого к ней добавляют ЭДТА или цитрат натрия. Каков механизм антикоагулянтного действия этих соединений?
А. Связывают белковые факторы свертывания
В. Инактивируют факторы тромбоцитов
С. Связывают ионы кальция
Д. Блокируют превращение фибриногена в фибрин
Е. Активируют антитромбин III.
Правильность решения задач проверьте, сопоставив с эталонами ответов.
Эталоны ответов к решению целевых обучающих задач.
1.– Д, 3.- Е, 6.- С.
Краткие методические рекомендации к прведению занятия
На занятии проводится тестовый контроль исходного уровня знаний студентов и его коррекция, проверяется выполнение домашнего задания. После этого студенты приступают к выполнению практической части, используя инструкцию к лабораторной работе.
После выполнения лабораторной работы, необходимо оформить протокол, сделать выводы к работе, которые проверяет и корректирует преподаватель. В конце занятия проводится итоговый тестовый контроль усвоения материала, подводятся итоги работы.
Инструкция к практическому занятию
Принцип метода.: кальций осаждается из сыворотки в виде оксалата. После растворения осадка в серной кислоте, освобождающуюся щавелевую кислоту титруют раствором марг анцевокислого калия. Количество КМnО4 , пошедшее на титрование, эквивалентно количеству Са2+.
Материальное обеспечение:.сыворотка крови, дист. вода, раствор оксалата аммония, 1% раствор серной кислоты, 0,01н. раствор марганцево-кислого калия, стеклянная палочка, пробирки, водяная баня.
Ход работы: В одну центрифужную пробирку (опыт) наливают 1мл сыворотки крови, а в другую (контроль) – 1 мл. дист. воды. В обе пробирки приливают по 1 мл раствора оксалата аммония и центрифугируют в течение 10 минут. Перед центрифугированием необходимо попарно уравновесить пробирки! После центрифугирования осторожно сливают жидкость, чтобы не взмутить осадок. Затем добавляют 2мл 1% раствора серной кислоты. Размешивают осадок стеклянной палочкой и, не вынимая ее, помещают пробирку в кипящую водяную баню на 1 минуту. Титруют, помешивая палочкой, горячее содержимое пробирок 0,01н. раствором марганцево-кислого калия до появления бледно-розовой окраски. По разности количества марганцево-кислого калия, пошедшего на титрование опытной и контрольной проб, судят о содержании кальция в исследуемой сыворотке крови.
Расчетпроизводят по формуле:
Х = 0,2 (А-В) 100, Х=
где:
Х – содержание кальция в сыворотке крови в мг%,
А - результат титрования опытной пробы (мл), В – результат титрования контроля (мл).
0,2 – титр марганцево-кислого калия по кальцию.
Для расчета в системе «СИ» в ммоль/л результат умножают на коэффициент 0,2495.
Норма – общий кальций в сыворотке крови 9-11 мг% или 2,25-2,8 ммоль/л.
Данные титрования заносят в таблицу:
|
К-во 0,01н.раствора КмnО4, пошедшего на титрование |
Содержание кальция в сыворотке крови: 1. В мг% 2. В ммоль/л |
|
Опытная Контрольная Проба проба |
Опытная проба Норма 1. 2. |
ВЫВОДЫ:
Подпись преподавателя:
Приложение 1
Граф логической структуры