73. Производные 1,4 - бензодиазепина в химико-токсикологическом отношении.
Химико-токсикологический анализ производных 1,4-бензодиазепина
2 направления анализа:
1) по аминобензофенонам;
2) по нативным соединениям и их метаболитам;
Определение по 2-аминобензофенону:
1 этап: изолирование – органы, биосубстраты (измельчённые) + 6 н раствор соляной кислоты при нагревании в течение 30 минут и температуре 100 градусов Цельсия. В результате гидролиза кислотного образуется аминобензофенон.
2 этап: очистка и предварительное обнаружение – концентрирование до рН = 9-10 при добавлении натриевой щёлочи + хлороформ = экстракт; подвергают тонкослойной хроматографии (элюент – бензол): определяют аминобензофенон по жёлтой окраске и реакции образования азокрасителя. Азокраситель подвергают элюированию и проводят количественное определение спектрофотометрически: путём определения N-ортонафтилдиэтиленамина (сине-фиолетовое окрашивание по реакции Братова-Маршала).
Данное исследование имеет отрицательное химико-токсикологическое значение. Если первым способом в органах и тканях обнаруживается аминобензофенон, то продолжают исследование на предмет обнаружения нативных препаратов или их метаболитов. Если первая схема не обнаружила в органах трупа аминобензофенона, то вторую схему не применяют.
Вторая схема обнаружения – подтверждающая – на нативные соединения и их метаболиты.
Основные этапы анализа производных 1,4-бензодиазепина на нативные соединения и их метаболиты.
1 этап: изолирование – кровь, моча, ткани.
Если используется для обнаружения кровь, то приводят следующую схему:
2 этап: очистка – предварительное обнаружение; осаждение белков хлорной кислотой; подвергают центрифугированию. Центрифугат подщелачивают до рН = 7-10. Далее подвергают экстракции хлороформом; получают щелочной экстракт; далее - хроматография с 25% раствором гидроксида аммония. Детектор – раствор Дрангендорфа. Получают элюат
3 этап: подтверждающее исследование – химические реакции (реакции диазотирования и азосочетание) – УФ-спектры – количественное определение фотоколориметрически (нитразепам).
Если используется моча:
Проводят прямую экстракцию аликвоты мочи. Аликвоту мочи подщелачивают до рН 7-10. Далее – тоже самое, что и с кровью.
Если используется ткань:
1 этап: изолирование – подкисленной водой щавелевой кислотой. Получают первичную вытяжку. Далее производят подщелачивание и исследование тоже самое.
Производные 1,4-бензодиазепина:
При нагревании в кислой или щелочной среде происходит расщепление цикла по АЗОМЕТИНОВОЙ СВЯЗИ диазепинового кольца с образованием 2-аминобензофенона – это ароматический кетон:
Метаболизм производных 1,4-бензодиазепина:
окисление:
а) эндометилирование: диазепам до дезметилдиазепама;
б) гидроксилирование: диазепам до оксидиазепам;
2) восстановление:
Нитразепам до аминозепама;
гидролиз:
до 2-аминобензофенона;
синтез до образования глюкуронидов, например, образование глюкуронида оксазепама
