- •Предмет, содержание, задачи токсикологической химии.
- •Краткий исторический очерк развития токсикологической химии.
- •Связь токсикологической химии с другими химическими, фармацевтическими и биологическими науками.
- •Вклад отечественных учёных в развитие токсикологической химии.
- •Организация судебно-медицинской и химико-токсикологической (судебно-химической) экспертизы в России.
- •Объекты химико-токсикологического исследования и вопросы, решаемые химико-токсикологическим анализом. Понятие «яд», «ядовитое вещество». Классификация ядов и отравлений.
- •Специфические особенности химико-токсикологического анализа.
- •Пути поступления чужеродных соединений в организм. Основные факторы, оказывающие влияние на всасываемость и распределение веществ в тканях и биологических средах организма.
- •Превращение и выделение чужеродных веществ из организма. Общая характеристика.
- •Общая характеристика методов исследования, применяемых в токсикологической химии (методы изолирования, очистки, качественного и количественного анализа).
- •11. Судебная химия – основной раздел токсикологической химии.
- •Документация химико-токсикологических экспертиз и правила её
- •Источники ошибок на основных этапах химико-токсикологического анализа.
- •Правила приёма вещественных (химических) доказательств на экспертизу.
- •Значение данных дознания, истории болезни и результатов судебно-медицинского исследования трупов для судебно-химической экспертизы.
- •Микрокристаллоскопия и кристаллооптика в токсикологической химии.
- •Методы количественного определения. Значение этих определений для оценки результатов исследования (показать на примере «металлических ядов»).
- •Реакции отрицательного судебно-химического значения.
- •Классификация ядовитых и сильнодействующих веществ в токсикологической химии.
- •Охрана окружающей среды и перспективы развития токсикологической химии на современном этапе.
- •Классификация наркотических и психотропных веществ. Основные особенности их химико-токсикологического анализа.
- •Современные физико-химические методы, применяемые в анализе наркотических и психотропных веществ. Основные требования к ним.
- •Фармакокинетика, метаболизм, особенности химико-токсикологического анализа опиатов.
- •Фармакокинетика, метаболизм, особенности химико-токсикологического анализа каннабиноидов.
- •Перспективы развития и совершенствования методов судебно-химических исследований вещественных доказательств.
- •26. Теоретические основы изолирования ядовитых и сильнодействующих веществ из биологического материала дистилляцией водяным паром.
- •27.Синильная кислота. Качественное обнаружение и количественное определение.
- •28. Химико-токсикологическое значение синильной кислоты и её производных.
- •29. Ядовитые галогенпроизводные (хлороформ, хлоралгидрат). Изолирование.
- •30. Ядовитые галогенпроизводные (четыреххлористый углерод, 1,2-дихлорэтан).
- •31. Альдегиды (формалин, формальдегид). Изолирование, качественное обнаружение и количественное определение. Токсикологическое значение и метаболизм.
- •32. Ацетон. Изолирование, качественное обнаружение и количественное
- •33. Метиловый спирт. Изолирование, качественное обнаружение и количественное
- •34. Этиловый спирт. Изолирование. Качественное обнаружение и количественное
- •35. Физико-химические методы количественного определения этилового спирта, применение в судебно-химическом анализе.
- •36. Значение этапа количественного определения этилового спирта при химико-токсикологическом исследовании биологических объектов.
- •37. Реакции отличия метилового и этилового спирта. Методы экспресс-анализа спирта. Пробы Раппопорта и Шинкаренко.
- •38.Спирты (амиловый, этиленгликоль). Качественное обнаружение. Токсикологическое значение. Метаболизм.
- •39. Уксусная кислота. Изолирование. Качественное обнаружение и количественное определение. Токсикологическое значение и метаболизм.
- •40. Нитробензол в химико-токсикологическом отношении.
- •41. Фенолы (фенол, трикрезол) в химико-токсикологическом отношении.
- •42. Анилин в химико-токсикологическом отношении.
- •43. Метод изолирования подкисленным спиртом. Его достоинства и недостатки.
- •44. Метод изолирования подкисленной водой. Вклад отечественных учёных в разработку этого метода, его достоинства и недостатки.
- •45. Частный метод изолирования подкисленной водой в.Ф. Крамаренко. Влияние рН среды и др. Факторов на изолирование и экстрагирование алкалоидов.
- •46. Метод изолирования подщелоченной водой, его достоинства и недостатки.
- •47. Салициловая кислота. Изолирование, качественное обнаружение и количественное обнаружение. Токсикологическое значение и метаболизм.
- •48. Химико-токсикологическое значение производных барбитуровой кислоты. Методы изолирования, очистки барбитуратов.
- •49. Качественное обнаружение барбитуратов в судебно-химическом анализе.
- •50. Количественное определение барбитуратов в судебно-химическом анализе.
- •51. Спектрофотометрическое определение производных барбитуровой кислоты в химико-токсикологическом анализе.
- •52. Токсикологическое значение и метаболизм барбитуратов.
- •53. Фенацетин. Качественное обнаружение и количественное определение.
- •54. Предварительные химико-токсикологические исследования при наличии алкалоидов (общеалкалоидные реакции).
- •55. Методы изолирования, очистки и обнаружение алкалоидов.
- •56. Алкалоиды, производные пиридина и пиперидина (кониин, ареколин). Изолирование, качественное обнаружение и количественное определение. Токсикологическое значение и метаболизм.
- •57. Алкалоиды, производные пиридина и пиперидина (никотин, анабазин) в химико-токсикологическом отношении.
- •58. Пахикарпин в химико-токсикологическом отношении.
- •59. Алкалоиды, производные тропана (атропин, гиосциамин) в химико-токсикологическом отношении.
- •60. Алкалоиды, производные тропана (кокаин) в химико-токсикологическом отношении.
- •61. Производные аминокислот ароматического ряда (новокаин, дикаин) в химико-токсикологическом отношении.
- •62. Алкалоиды, производные хинолина (хинин и его соли). Изолирование, качественное обнаружение и количественное определение. Токсикологическое значение и метаболизм.
- •63. Алкалоиды, производные изохинолина (морфин). Изолирование. Качественное обнаружение и количественное определение. Токсикологическое значение и метаболизм.
- •64. Заменители морфина (кодеин, этилморфина гидрохлорид, апоморфин) в химико-токсикологическом отношении.
- •65. Доказательства отравления опием.
- •66. Алкалоиды, производные бензилизохинолина (папаверин, наркотин) в химико-токсикологическом отношении.
- •67. Алкалоиды, производные индола (резерпин, секуренин) в химико-токсикологическом отношении.
- •69. Алкалоиды, производные пирролизидина (платифиллин) в химико-токсикологическом отношении.
- •70. Алкалоиды, производные пиримидина (кофеин, теобромин, теофиллин) в химико-токсикологическом отношении.
- •71. Ациклические алкалоиды (эфедрин). Изолирование, обнаружение, определение, значение, метаболизм.
- •72. Производные пиразола (антипирин, амидопирин) в химико-токсикологическом отношении.
- •73. Производные 1,4 - бензодиазепина в химико-токсикологическом отношении.
- •74. Производные фенотиазина в химико-токсикологическом отношении.
- •75. Общая характеристика пестицидов (ядохимикатов) в химико-токсикологическом отношении. Классификация.
- •76. Пестициды из группы галогенпроизводных (ддт, гхцг, гептахлор) в химико-токсикологическом отношении.
- •77. Пестициды из класса фенолов (днок, диносеб, зоокумарин). Качественное обнаружение и количественное определение. Токсикологическое значение и метаболизм.
- •78. Пестициды класса фосфорорганических соединений (хлорофос, карбофос) в химико-токсикологическом отношении.
- •79. Пестициды, производные карбаминовой кислоты (севин) в химико-токсикологическом отношении.
- •80. Пестициды, производные тиокарбаминовой, дитиокарбаминовой кислот (крысид, тмтд) в химико-токсикологическом отношении.
- •81. Металлоорганические пестициды (гранозан, меркуран, меркургексан) в химико-токсикологическом отношении.
- •82. Неорганические ядохимикаты (фосфид цинка, фторид натрия) в химико-токсикологическом отношении.
- •83. Общая характеристика сероводородного и дробного методов анализа «металлических» ядов.
- •84. Вклад отечественных учёных в разработку химико-токсикологического анализа «металлических ядов».
- •85. Теоретические и методологические основы дробного метода анализа «металлических» ядов, разработанные а.Н. Крыловой.
- •86. Органические реагенты, предложенные а.Н. Крыловой для анализа «металлических» ядов дробным методом.
- •87. Последовательность проведения дробного метода анализа на «металлические» яды.
- •88. Частые методы минерализации органических веществ.
- •89. Минерализация серной и азотной кислотами органических веществ. Достоинства и недостатки.
- •90. Минерализация органических веществ азотной, серной, хлорной кислотами. Достоинства и недостатки метода.
- •91. Методы удаления окислителей из минерализата.
- •92. Исследование осадка после минерализации азотной, серной кислотами (свинец, барий).
- •93. Свинец и тетраэтилсвинец. Качественное обнаружение и количественное определение. Токсикологическое значение.
- •94. Барий в химико-токсикологическом отношении.
- •95. Марганец в химико-токсикологическом отношении.
- •96. Хром в химико-токсикологическом отношении.
- •97. Серебро. Изолирование, качественное обнаружение и количественное определение, поступление, распределение, выведение из организма, токсикологическое значение.
- •98. Медь в химико-токсикологическом отношении.
- •99. Висмут в химико-токсикологическом отношении.
- •100. Сурьма и таллий в химико-токсикологическом отношении.
- •101. Кадмий в химико-токсикологическом отношении.
- •102. Цинк в химико-токсикологическом отношении.
- •103. Ртуть, деструктивные методы изолирования. Качественное и количественное значение. Органические препараты ртути (этилмеркурхлорид).
- •104. Мышьяк в химико-токсикологическом отношении. Общая схема анализа.
- •105. Определение мышьяка в аппарате Марша.
- •106. Определение мышьяка в аппарате Зангер-Блека.
- •107. Изолирование веществ из биологического материала диализом (серная, азотная, соляная кислоты). Качественное обнаружение и количественное определение, токсикологическое значение.
- •108. Изолирование веществ из биологического материала диализом (аммиак, едкий натр, щелочные соли). Качественное обнаружение и количественное определение, токсикологическое значение.
49. Качественное обнаружение барбитуратов в судебно-химическом анализе.
Исследование биологического материала на наличие производных барбитуровой кислоты состоит из этапов:
1) изолирование из объекта;
2) очистка полученного извлечения;
3) идентификация;
4) количественное определение;
1 Этап Выбор метода изолирования определяется характером объекта исследования и поставленными перед химиком задачами
Для целей клинического исследования в случае острых отравлений, а также в судебно-химической лаборатории, когда объектами исследования являются промывные воды желудка, диализат небольшое количество крови и мочи, извлечение барбитуратов проводится непосредственно экстракцией органическим растворителем. В качестве экстрагентов используются эфир, хлороформ, дихлорэтан и др. Количество извлеченных барбитуратов составляет 70-90%. Однако, непосредственная экстракция, как правило, дает извлечения загрязненные соэкстрактивными веществами (жирами, белками, пигментами) и требует последующей дополнительной очистки.
При исследовании трупного материала (внутренних органов)
а) при общем (ненаправленном) судебно-химическом анализе изолирование барбитуратов проводится подкисленным спиртом и подкисленной водой. Последующая экстракция их из кислого водного раствора осуществляется органическим растворителем, чаще эфиром или хлороформом. Максимальные количества барбитуратов извлекаются в интервале рН 1-3, т. к. при данном значении рН барбитураты существуют в молекулярной форме, которая хорошо растворяется в органических растворителях и ограниченно в воде. Изолирование подкисленной водой и подкисленным спиртом обеспечивает выход барбитуратов порядка 25-30% (некоторые барбитураты изолируются этанолом на 50% -барбамил, этаминал-Na, фенобарбитал).
б) При специальном (частном, направленном) исследовании на производные барбитуровой кислоты проводят извлечение подщелочной водой по методу Валова. Выход барбитуратов > 50% при достаточной чистоте выделенных веществ. Существует ряд методов, основанных на изолировании барбитуратов органическими растворителями (ацетонитрилом, ацетоном, хлороформом, смесью спирта и хлороформа) с последующей очисткой выделенных веществ.
2 Этап Очистка извлеченных барбитуратов от балластных веществ.
Как правило, барбитураты, выделенные из биологического материала содержат примеси посторонних веществ, которые извлекаются совместно с барбитуратами и являются нормальными компонентами организма (жиры, белки, пигменты, дубильные, смолобразные вещества и др). Соэкстрактивные (балластные) вещества мешают дальнейшей идентификации и определению барбитурата.
Выбор метода очистки зависит, в основном, от количества изолированного вещества и до некоторой степени от его химического строения. При больших количествах барбитуратов чаще используют экстракционный метод очистки и микросублимацию (возгонку).
Экстракционная очистка основана на способности барбитуратов к имидо-имидольной таутомерии и на различной растворимости имидной и имидольной форм в воде и органических растворителях. Используя реэкстракцию барбитурата раствором гидроксида натрия из органической фазы, тем самым освобождаются от сопутствующих веществ, не растворимых в воде (натриевые соли хорошо растворимы в воде и извлекаются ею). Последующее выделение барбитурата из водной фазы проводят после подкисления водного раствора (рН 2) экстрагированием органическим растворителем. При этом барбитурат в
молекулярной форме извлекается органическим растворителем, а в водной фазе остаются балластные вещества, не растворимые в органическом растворителе.
Микросублимация основана на способности барбитуратов возгоняться без разложения при нагревании. Возгонка проводится в нагревательной камере прибора Кофлера, либо, в упрощенном виде, с одного предметного стекла на другое, верхнее из которых охлаждается, а нижнее (с исследуемым остатком) нагревается.
При малых количествах выделенных веществ чаще используют хроматографические методы очистки (ионообменную и гель-хроматографию на колонке, ТСХ, ВЭТСХ, ВЭЖХ).
С точки зрения простоты, доступности и разрешающей способности наибольшего внимания заслуживают ТСХ, ВЭТСХ. Они позволяют не только очистить выделенные вещества от примесей, но и разделить целый ряд барбитуратов при их совместном присутствии, а также отделить барбитураты от их метаболитов и провести предварительную идентификацию по величине рН.
3 Этап Для идентификации барбитуратов используют химические, физические и физико-химические методы анализа
К химическим методом можно отнести реакции окрашивания барбитуратов. Наиболее известны реакции барбитуратов:
1) С солями кобальта в щелочной среде.
В результате реакции образуется комплекс состава Со(NH3)6ОН Вагb2, окрашенный в красно-фиолетовый цвет. Чувствительность реакции 30 мкг. Реакция неспецифична для барбитуратов. Ее могут давать и другие соединения, по химическому строению сходные с барбитуратами (теобромин, теофиллин, биурет, некоторые сульфаниламиды).
2) С солями меди в присутствии пиридина образуется комплекс состава СuРуг2Barb2) красно-фиолетового цвета (тиобарбитураты - зеленого цвета);
3) С солями ртути в присутствии дифенилкарбазона (ДФК) барбитураты образуют комплексные соединения, окрашенные в сине-фиолетовый цвет. Реакция широко используется для обнаружения барбитуратов на хроматограмме. Чувствительность ее достигает 0,5 мкг. Реакция неспецифична для барбитуратов.
4) Мурексидная проба (дают также пуриновые алкалоиды);
В микрокристаллоскопическом анализе барбитуратов использована их способность давать характерные кристаллические осадки при взаимодействии с солями тяжелых металлов (хлорцинкйодом, железо - и меднойодидным комплексами, меднопиридиновым реактивом) и выпадать в осадок из растворов концентрированной серной кислоты при понижении ее концентрации (выделение кислотной формы барбитурата).
Формы образующихся кристаллов характерны для каждого отдельного барбитурата. Чувствительность реакций достигает мкг и даже десятых долей мкг.
Обладая высокой чувствительность, доказательностью и специфичностью, микрокристаллические реакции не лишены и ряда недостатков:
-их проведение требует высокой степени чистоты исследуемого вещества,
-наличие примесей снижает чувствительность реакции, а также мешает правильной кристаллизации,
-производные барбитуровой кислоты склонны к полиморфизму образующихся кристаллов;
В зависимости от ряда факторов - концентрации вещества, скорости кристаллизации, температуры, наличия посторонних примесей - барбитураты способны образовывать кристаллы различной формы, что затрудняет идентификацию отдельных веществ по форме кристаллов.
Из физических и физико-химических методов анализа применение нашли ТСХ, ВЭТСХ, ВЭЖХ, спектроскопия в УФ и ИК областях спектра.
Хроматография в тонком слое и ВЭТСХ используются в качестве предварительного испытания на наличие производных барбитуровой кислоты. Они дают возможность разделить несколько барбитуратов при их совместном присутствии и идентифицировать каждый барбитурат в случае комбинированного отравления ТСХ позволяет также отделить барбитураты от их метаболитов и провести очистку полученного извлечения от балластных веществ. Хроматографирование ведут на закрепленном слое силикагеля в системах растворителей:
1) хлороформ-ацетон (9:1) -для разделения N - замещенных и 5,5-замещенных производных, система является общей в скрининге лекарственных веществ кислого и нейтрального характера;
2) толуол - ацетон - этанол - 25% раствор аммиака (45:45:7,5:2,5) (применяется в экспресс- анализе интоксикаций);
3) хлороформ - н-бутанол - 25% раствор аммиака (70:40:5) - в качестве частной системы для разделения 5,5 -замещенный барбитуратов;
Детектирование веществ на хроматограмме проводится двумя реагентами дифенилкарбазоном (ДФК) и HgSО4. При этом в местах расположения барбитуратов возникают красно- или сине-фиолетовые пятна. Идентификация проводится по величине Rf (отношение длины пробега вещества к длине пробега растворителя) Хроматографирование ведут параллельно метчикам (А), в качестве которых используют хлороформные растворы барбитуратов с известной концентрацией.
Применение метчиков наряду с расчетом Rf обусловлено невоспроизводимостью Rf из-за трудности соблюдения стандартных условий при хроматографировании Чувствительность реакции барбитуратов с ДФК и HgS04 достигает 0,5мкг, однако, она неспецифична, поэтому дальнейшее подтверждение присутствия барбитурата производится микрокристаллическими реакциями и исследованием в УФ области спектра после элюирования вещества с хроматограммы подходящим растворителем.