Заключение

Рассмотренное в настоящем учебном пособии, конечно, не даёт полного представления о современной гистологии, исчерпывающего описания строения различных тканевых систем и протекающих в них процессов. В первую очередь это обусловлено спецификой настоящего издания. Однако особенно досадно, что при существующем огромном многообразии Metazoa их ткани в сравнительном плане до сих пор изучены довольно эпизодично, и потому принципы возникновения этого удивительного многообразия до сих пор малопонятны. И, прежде всего – природа возникновения этого бесконечного многообразия при узко заданных исходных параметрах, заключённых в структуре и метаболизме эукариотической животной клетки.

Однако с помощью изложенного в данном пособии можно приобрести базовые познания, необходимые для целостного понимания процессов жизнедеятельности, протекающих в многоклеточном организме – центрального феномена единой целостной науки – биологии.

Раздел II практикум по гистологии

Полноценное изучение гистологии возможно лишь в комплексе с лабораторными занятиями.

Основу этих занятий составляют исследования тканей с помощью светового микроскопа. Этот метод предъявляет к объекту ряд требований. Прежде всего, объект должен быть: а) проницаем для света; б) окрашен; в) достаточно тонок. Поэтому в большинстве случаев ткани исследуются в виде так называемых гистологических препаратов.

С этой целью чаще всего необходимо изготовить тонкий срез ткани (обычно толщиной 5-20 мкм). Однако в силу практически жидкой консистенции содержимого клеток сделать это без предварительной обработки невозможно. Поэтому, чтобы получить тонкий срез, ткань нужно предварительно либо заморозить (криостатные срезы), либо пропитать плотным, но хорошо режущимся, веществом (целлоидином, парафином).

Последний способ является наиболее универсальным.

1. Изготовление гистологических препаратов

1). Для предотвращения посмертных изменений исследуемой ткани взятый материал сразу подвергают фиксации. При этом происходит коагуляция белков и др. реакции. Способ фиксации зависит от особенностей объекта и задач исследования. В фиксированном состоянии ткани могут храниться достаточно долго.

2). Для изготовления препарата проба ткани подвергается предварительной промывке в проточной воде.

3). Для удаления из объекта воды его последовательно выдерживают в водном растворе этилового спирта возрастающих концентраций (50, 60, 70, 80, 90, 100%).

4). Для заливки кусочки тканей предварительно пропитывают жидкостями, которые служат растворителями парафина (ксилол, хлороформ) или целлоидина (равная смесь 100% этилового спирта с эфиром). Продолжительность заливки в парафин меньше и позволяет делать более тонкие срезы, чем заливка в целлоидин. Однако последняя позволяет получать срезы самых плотных тканей (сухожилий, связок, хрящей, кости и т. п.).

5). Гистологические срезы изготовляют с помощью микротома. (Толщина криостатных и целлоидиновых срезов несколько больше, нежели парафиновых). Полученные срезы наклеивают на предметное стекло.

6). Для окраски срезов парафин (целлоидин) устраняют соответствующими растворителями и возвращают воду посредством проводки через последовательность этилового спирта последовательно понижающейся концентрации (100-50%).

7). Применяемые в гистологии красители и методики окраски весьма разнообразны. Их выбор обуславливается особенностями объекта и задачами исследования.

8). Для долговременного хранения срезы заключают в плотную прозрачную среду, чей коэффициент преломления света близок стеклу (обычно в пихтовый или канадский бальзам посредством его раствора в ксилоле), после чего накрывают покровным стеклом.