Диагностика моногенных болезней.

Могут использоваться следующие методы:

1). Портретная диагностика – для диагностики моногенных синдромов, проявляющихся пороками развития.

2). Биохимические методы – для диагностики наследственных нарушений обмена веществ.

3). ДНК- диагностика для ферментопатий и др.

4). Цитогенетические методы – для диагностики синдрома фрагильной Х-хромосомы.

Если моногенное заболевание проявляется пороками развития (ахондроплазия, эктродактилия и т.д.), то проводится портретная диагностика – синдромологический диагноз (анализ фенотипа больного). Патологический генотип проявляется одинаковым фенотипом у всех больных. Больные с моногенными заболеваниями из разных семей больше похожи друг на друга, чем на своих родителей.

Для моногенных болезней -ферментопатий разработаны биохимические методы диагностики.

Биохимические методы диагностики многоступенчатые. Объектами биохими­ческой диагностики могут быть моча, пот, плазма и сыворотка крови, ферменты крови, культуры клеток (фибробласты, лимфоциты).

Выделяют два этапа биохимической диагностики:

1) Первичный (скрининг) и 2) уточнение диагноза.

Основная цель скрининга заключается в отборе индивидов для последующего уточнения диагноза. Скрининг может быть селективным и массовым.

Селективный биохимический скрининг проводится среди групп детей и взрослых с подозрением на наследственный дефект обмена веществ. Иными словами, речь идет о “просеивании” специальных контингентов детей или взрослых, среди которых можно ожидать значительное увеличение частоты больных с наследственными болезнями обмена.

Показания для селективного скрининга:

1) задержка психомоторного равития у детей раннего возраста , умственная отсталость у детей старшего возраста;

2) неврологические нарушения (судороги, снижение мышечного тонуса, спастические парезы);

3) диспепсические явления, непереносимость отдельных продуктов и лекарств, нарушение вскармливания;

4) нарушение физического равития детей (задержка в прибавке массы тела, неправильный рост, деформация костей туловища и конечностей);

5) другие симптомы ферментопатий (катаракта, нарушение слуха, зрения, специфический цвет и запах мочи, кожные проявления и др. ).

В селективных программах могут использоваться качественные и полуколичественные методы. В целом одна порция мочи или крови исследуется с помощью приблизительно 30 различных реакций. Они позволяют обнаружить большие группы отклонений (например, тонкослойная хроматография –ТСХ- мочи и крови позволяет диагностировать наследственные нарушения обмена аминокислот, олигосахаридов, мукополисахаридов). Для уточнения диагноза часто необходим второй этап, на котором используются более точные методы диагностики.

Массовый скрининг – это массовое обследование всех новорожденных с целью раннего выявления на доклинической стадии заболевания, которое можно лечить. Раннее лечение предупреждает развитие клинических признаков болезни.

Основные требования к скрининговым программам для массового скрининга.

1. Частота в популяции 1:10000 (иногда скринируются менее распространенные заболевания).

2. Заболевание без своевременного лечения приводит к тяжелым нарушениям здоровья, ранней инвалидизации.

3. Должны существовать способы профилактического лечения.

4. Методы диагностики должны быть высоко чувствительными, не должны давать ложно отрицательных результатов.

5. Затраты на скрининг должны быть меньше затрат на лечение и содержание больных – инвалидов.

Программа обязательно включает в себя следующие этапы: I) взятие биологического материала для исследования у всех новорожденных и доставка материала в диагностическую лабораторию; 2) лабо­раторная просеивающая диагностика; 3) уточняющая диагностика всех слу­чаев с положительными результатами при просеивании; 4) лечение больных и их диспансеризация с контролем за ходом лечения; 5) медико-генетичес­кое консультирование семьи.

Таким образом, программы массового скрининга на наследственные болезни, поддающиеся профилактическому лечению, могут учреждаться только в рамках государственного или регионального здравоохранения. Разработаны программы массового скрининга фенилкетонурии, галактоземии, гипотиреоза, адрено - генитального синдрома, муковисцидоза.

Скрининг на фенилкетонурию.

На 3-5 сутки новорожденных берут из пятки кровь на специальную фильтровальную бумагу (карточки Гатри). Кровь высушивают, образец пересылают в лабораторию, занимающуюся скрининговыми исследованиями.

Для скрининга могут использовать 3 методики: 1) тест Гатри, 2) тонкослойная хроматография аминокислот крови, 3) флюориметрический метод. Тест Гатри микробиологический. В планшеты высевают бактерии Bacillus subtilis на среду с антиметаболитом фениланина. На этой среде бактерии не растут. Из пятна высушенной крови вырезают кружки (диски) диаметром 2 мм. Кружки раскладывают на питательную среду. В крови есть фенилаланин, поэтому вокруг пятна с кровью появляется рост бактерий. Интенсивность роста зависит от количества фенилаланина. Метод Гатри качественно-полуколичественный. Позволяет определить концентрацию ФА выше 4 мг %.

Метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) также качественно-полуколичественный, определяет концентрацию ФА выше 4 мг%, технически относительно прост и дешев, позволяет диагностировать не только ФКУ, но и другие аминоацидурии.В Одесском ММГЦ метод ТСХ аминокислот крови используют не только для диагностики ФКУ и других аминоацидурий, но и для контроля эффективности лечения.

Флюориметрический метод – бумагу с кровью помещают в специальный раствор и добавляют краситель нингидрин. Нингидрин с фенилаланином дает сиреневую окраску. Интенсивность окраски зависит от количества фенилаланина и определяется с помощью специального прибора – флюороскана. Если не осуществляется массовый скрининг в роддоме, то можно использовать тест с треххлорным железом (FeCl₃). Его проводят на 2-3 месяце жизни. К моче добавляют HCl и FeCl_3. При наличии фенилаланина моча имеет зеленную окраску. Этот метод является количественым, наиболее точным, позволяет определить концентрацию ФА.

Скрининг гипотиреоза и адреногенитального синдрома (АГС) основан на определении уровня гормонов в крови.

Для скрининга галактоземии используется микробиологический или биохимический тесты, определяющие содержание галактозы в крови.

Скрининг муковисцидоза основан на определении активности трипсина в крови или содержание альбумина в меконии.

Необходимо помнить о том, что процедура скрининга не обеспечивает окончательного диагноза, так как для скрининга используются высокочувствительные реакции, которые в ряде случаев могут давать ложноположительные реакции. Необходим второй этап - повторное обследование и подтверждение диагноза.