Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

Бактериофаги. Учебно-методическое пособие

.pdf
Скачиваний:
0
Добавлен:
06.09.2026
Размер:
2 Мб
Скачать
Ульяновский государственный аграрный университет
им. П.А. Столыпина
Кафедра «Микробиология, вирусология, эпизоотология и ветеринарно-
санитарная экспертиза»
Н.А. Феоктистова, А.В. Летаров, П.С. Майоров
БАКТЕРИОФАГИ
УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ
Ульяновск – 2022
Бактериофаги. Учебно-методическое пособие / Н.А. Феоктистова, А.В.
Летаров, П.С. Майоров - Ульяновск, Ульяновский ГАУ, 2022. – 233 с.
Предлагаемое учебно-методическое пособие издается кафедрой
микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы согласно ее плану, целью которого является оперативный выпуск отдельных учебных изданий. Это позволяет дать студенту либо новую научную или инструктивную информацию, либо более подробно разъяснить ключевые положения разделов учебных дисциплин, преподаваемых на кафедре. Предлагается общий список литературы, использованный при написании данного лекционного материала.
Рекомендовано Методическим советом факультета ветеринарной
медицины и биотехнологии ФГБОУ ВО Ульяновский ГАУ (протокол № 8 от
25.04.2022 г.)
Составители: Феоктистова Н.А. – кандидат биологических наук, доцент
кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ
Летаров А.В. – доктор биологических наук, доцент кафедры
микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ
Майоров П.С. - кандидат биологических наук, ст. преподаватель
кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ
Рецензент: Молофеева Н.И., кандидат биологических наук, доцент
кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ.
Феоктистова Н.А., Летаров А.В., Майоров П.С. © ФГБОУ ВО Ульяновский ГАУ, 2022
3
ОГЛАВЛЕНИЕ
БИОЛОГИЯ БАКТЕРИОФАГОВ. ОБЩАЯ БИОЛОГИЯ,
КЛАССИФИКАЦИЯ И ЭКОЛОГИЯ БАКТЕРИОФАГОВ ................................ 4
МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ФАГОВОЙ ИНФЕКЦИИ ....................... 71
ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ФАГОВ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ
ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ ............................................................................. 127
КОНТРОЛЬ НАД БАКТЕРИОФАГАМИ В ПИЩЕВОЙ
ПРОМЫШЛЕННОСТИ ...................................................................................... 144
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ БАКТЕРИОФАГОВ В ЦЕПИ ПРОИЗВОДСТВА
ПРОДУКТОВ ПИТАНИЯ .................................................................................. 154
Применение фагов для снижения контаминации пищевыми патогенами
домашнего скота и гидробионтов .................................................................. 154
Применение фагов для снижения контаминации пищевыми патогенами
сырых продуктов ............................................................................................. 186
Применение фагов для снижения контаминации пищевыми патогенами
готовых к употреблению продуктов ............................................................. 207
РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ БАКТЕРИОФАГОВ В ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЕ
............................................................................................................................... 225
ПОРЧА ПРОДУКТОВ И БАКТЕРИОФАГИ ................................................... 231
4
БИОЛОГИЯ БАКТЕРИОФАГОВ. ОБЩАЯ БИОЛОГИЯ,
КЛАССИФИКАЦИЯ И ЭКОЛОГИЯ БАКТЕРИОФАГОВ
Фаги - паразиты на молекулярном уровне.
Бактериофаги, обычно сокращенно называемые фагами, могут рассматриваться, по выражению С. Лурии, как облигатные «паразиты на молекулярном уровне». Эти вирусы получили свое название в соответствии с тем, что они «нападают» на бактерии-хозяева и «пожирают» их клетки. Фаги обнаруживаются везде, где обитают бактерии: в почве, в пресных и соленых водах и даже в экстремальных местообитаниях, например в горячих источниках. Организмами в прямом смысле слова фаги считать нельзя, так как сами по себе они не являются живыми, но полностью зависят от жизнедеятельности хозяев и существуют за их счет. Как любые паразиты, фаги «эгоистичны» и используют белки, ферменты и химические компоненты клеток-хозяев для своего размножения (т. е. репликации генома и образования новых фаговых частиц). Высвобождение последних обычно сопровождается гибелью или, по меньшей мере, крайним ослаблением клетки-хозяина. Фаги обладают многими свойствами, присущими другим автономным генетическим элементам, и на уровне ДНК их лучше всего можно описать как плазмиды, которые приобрели дополнительные способности к выживанию вне своих хозяев.
Во второй половине девятнадцатого века учеными-микробиологами было открыто большинство бактерий, вызывающих заболевания человека, животных и растений. Были разработаны методы выделения этих бактерий и размножения их на искусственных питательных средах.
В то же время микробиологи обратили внимание на ряд инфекционных заболеваний человека и животных (оспа, бешенство, корь, краснуха и др.), а также растений, при которых бактериальные методы выяснения их возбудителей оказались непригодными.
5
Выходом из тупика, в котором очутилась микробиологическая наука, послужило открытие, сделанное русским ученым Д. И. Ивановским. В 1887 г. он, будучи еще студентом Петербургского университета, поехал на Украину и в Молдавию, где изучал причины мозаичной болезни табака, которая причиняла большой ущерб табачным плантациям южных районов. Свои исследования он проводил в течение нескольких лет и после окончания университета. В результате тщательного изучения этого заболевания Д. И. Ивановский показал, что оно вызывается специфическим возбудителем, состоящим из мельчайших частиц, или корпускул, которые по своим размерам значительно меньше бактерий.
Листья табака, пораженного мозаикой, он растирал в ступке и затем полученную массу фильтровал через специальные бактериальные фильтры, не пропускающие бактерий. Полученная после фильтрации прозрачная жидкость не содержала видимых в обычном микроскопе частиц. Но при нанесении ее на царапины, сделанные на поверхности здоровых листьев табака, растение заболевало мозаичной болезнью. Этот прием можно было повторять много раз.
Результаты исследований Д. И. Ивановского были опубликованы в 1892 г. в книге «О двух болезнях табака». В этой работе впервые в истории микробиологии было показано, что в природе существует особый мир мельчайших возбудителей инфекционных заболеваний. Эти возбудители проходят через бактериальные фильтры, невидимы в обычном микроскопе, не растут на тех средах, которые применяются для выращивания бактерий, и способны размножаться только в организме человека, животных и растений.
Эти мельчайшие организмы получили название фильтрующихся вирусов или вирусов.
Блестящее открытие Д. И. Ивановского ознаменовало новую эпоху в развитии микробиологии и заложило основы новой науки - вирусологии. Открытие первого вируса - возбудителя мозаики табака - было толчком к проведению широких исследований в области вирусологии.
6
Пользуясь предложенным Д. И. Ивановским методом, ученые стали открывать один за другим вирусы, вызывающие различные заболевания человека, животных и растений. В конце XIX - начале XX в. стало известно, что в природе существуют также вирусы, которые поражают бактерии и при этом вызывают распад (лизис) их клеток. Эти вирусы получили название бактериофагов - «пожирателей бактерий».
Явление лизиса, или распада, микробной клетки было известно давно. Оно может быть вызвано различными физическими и химическими факторами. В ряде случаев распад может происходить на определенном этапе развития микробной клетки как нормальный физиологический процесс ее старения. Однако имеется принципиальное различие между распадом клетки, вызванным бактериофагами, и химическими факторами. В первом случае происходит размножение бактериофага, вызывающего лизис, что не происходит при распаде клетки под влиянием физических и химических факторов.
Помните пословицу: «Враг твоего врага - твой друг»? Если врагами человека считать болезнетворные микробы, то, оказывается, у каждого из видов бактерий есть свой враг - фаг (его ещё называют вирусом бактерий, поскольку он на них паразитирует). Он атакует бактерию, прикрепляется к ней, прокалывает её оболочку и впускает внутрь свой генетический материал
- действует, как всем знакомый шприц. Однако изучение под микроскопом строения одной из разновидностей фага, известного в медицине как Т2 кишечной палочки, показало, насколько природная конструкция превосходит шприц, созданный инженерами.
7
Форма фагов очень разнообразна ­округлые, палочковидные, нитеподобные. Типичный фаг напоминает головастика. Но всех их объединяет суть воздействия на бактерию: ДНК фага, оказавшись в бактериальной клетке, подавляет её ДНК. Происходит разрушение организма микроба, и из этих обломков фаг строит по плану, заложенному в его ДНК, своё потомство. Цикл размножения фагов внутри бактерии длится 30–40 минут. Таким образом умерший микроорганизм превращается в фабрику, производящую фаги, и на месте возбудителя болезни возникает сотня защитников заболевшего организма. Их присутствие в крови человека совершенно безвредно.
Первое. Шприц вводится в тело с помощью длинной иглы. Фаг самостоятельно прикрепляется к бактерии множеством нитей и острыми зубцами, находящимися на его конце. Там же, на конце, расположена так называемая базальная пластинка, обеспечивающая плотное примыкание фага к бактерии S.
Второе. У фага нет поршня, как у шприца, с помощью которого выдавливалось бы его содержимое в тело бактерии. Это делают белковые нити, подобные мышечным волокнам: сокращаясь, как пружинки, они заставляют молекулы ДНК покидать тело фага. Всё это устройство укладывается в миллионные доли миллиметра.
Рисунок 1 - Схема
строения одного из видов бактериофага, поражающего кишечную палочку. Диаметр его головки - от 45 до 140 миллиардной части метра, длина - 100–200 этих же долей. ДНК скручена в спираль и спрятана в головке, её длина достигает 60–70 микрон. Некоторые бактериофаги содержат в головке только РНК - рибонуклеиновую кислоту.
8
Микробиология познакомилась с фагами в конце XIX века. В 1898 году русский ученый Н.Ф. Гамалея открыл вещества, вызывающие разрушение бактерий, - бактериолизины. Он и его сотрудники ставили опыты с носителями «сибирской язвы». Несомненно, Н.Ф. Гамалея имел дело с лизисом - распадом бактерий при действии на них веществ, содержащихся в цитоплазме бактериофага. Но у учёного тогда не было технического оснащения для детального раскрытия этого явления.
Во времена Первой мировой войны канадскому исследователю Ф. Д’Эрелле и англичанину Ф. Туорту впервые удалось увидеть под микроскопом бактериофаги. Но детально изучать этих обитателей невидимого мира тогдашними методами было практически невозможно. Однако главную их особенность - „пожирать“, а вернее - разрушать бактерии, учёные заметили. Именно поэтому в публикации об открытии Д’Эрелле дал им название «бактериофаги» - пожиратели бактерий. К тому же времени относятся и первые попытки применить их в медицине.
Применение фагов в качестве лекарств врачи встретили с большим интересом. В тридцатых годах прошлого века американский концерн «Эли Лилли» основал даже клинику, где начали лечить фагами. Пропагандисты нового метода сулили исцеление от всех болезней. Однако действительность оставляла желать лучшего: научные основы такой терапии были ещё так скудны, что новое средство применяли практически вслепую. Считалось, что все фаги одинаковы и побеждают любую бактерию. Одним и тем же бактериофагом начинали лечить разные заболевания, а болезнь всё не уходила
- так метод был серьёзно скомпрометирован. Мнение о малой эффективности фагов задержалось в кругах медиков на многие годы, живёт оно ещё и сегодня.
В годы Первой мировой войны врачом на Трапезундский фронт (северо­восток Турции) попал грузинский биолог Г. Элиава. До него дошла информация об открытии Ф. Д’Эрелле, и он увлекся возможностями бактериофага как мощного оружия медицины. Г. Элиава и Ф. Д’Эрелле встречались после войны и вместе отстаивали взгляд на бактериофаг как на
9
живое существо. Им противостояли сторонники неживой, кристаллический природы этих обитателей микромира - к неживым они относили и все вирусы. Этот спор учёных имел принципиальное, мировоззренческое значение. В нём решался вопрос: где наука должна провести границу между живой и неживой материей?
В 1923 году Г. Элиава основал в Тбилиси Институт для изучения бактериофагов, благодаря которому нить исследования этих микроорганизмов, оборвавшаяся в западных лабораториях, здесь, на Кавказе, протянулась до наших дней. Усилиями энтузиастов, работающих в институте и сегодня, многое прояснилось в биологии фагов. Теперь новейшими исследованиями подтверждено, что фаги, уничтожающие бактерии, ближе к живому миру, нежели к неживому. Установлено, что разновидность фагов в микромире огромна и каждый из них способен умерщвлять только определённые виды бактерий. Для большинства микробов найдены «свои» бактериофаги, в том числе и для возбудителей болезней, сопротивляющихся антибиотикам.
По сравнению с антибиотиками у фагов есть к тому же и определённые преимущества. Известно, что применение антибиотиков часто вызывает нежелательные побочные воздействия на организм человека, - иногда такие серьёзные, как аллергия. Или другое осложнение: попадая в кишечник больного, антибиотики зачастую губят там всю микрофлору, вредную и
Рисунок 2 - Этапы внедрения фага в бактериальную клетку и её разрушения
10
полезную, тем самым открывая дорогу вредоносным микробам (недаром в последнее время такое распространение получил дисбактериоз). Фаги же убивают только определённые виды бактерий, не затрагивая жизнь нужной человеку микрофлоры.
Второе достоинство фагов. Их действия в организме точно укладываются в тот срок, который необходим для уничтожения вторгшейся в него инфекции. С антибиотиками сложнее: врач должен сам определять курс приёма лекарства, что не всегда просто. А фаги делают это автоматически. Они размножаются в организме больного за счёт материала, взятого из тела бактерии (см. рис. 2), которая ими атакована. Если в крови растёт число возбудителей болезни, то и растёт число фагов. Когда же такие бактерии уничтожены, воспроизводство фагов прекращается само по себе.
С исследованиями, вот уже 70 лет ведущимися в тбилисском Институте имени Элиавы, сегодня знакомы и учёные на Западе. Американский микробиолог К. Мерилл в 1996 году ставил опыты на мышах, которым в лабораторных условиях вводилась смертельная доза сальмонеллы ­распространённого и опасного вида бактерий. С помощью фагов животные были спасены. Учёный и сегодня продолжает работать с фагами. В берлинском Институте имени Р. Коха в последние годы стали исследовать влияние фагов на ход излечения некоторых заболеваний внутренних органов человека. Руководитель этого направления Б. Аппель уверен, что именно фаги дадут «новую опору для лечения инфекционных болезней».
Результаты, накопленные за десятилетия усилиями 250 преданных делу специалистов, дают грузинским микробиологам возможность продолжать работу, несмотря на сложности нынешнего существования института: государство прекратило финансирование, оборудование частью изношено, частью уже бездействует, штат сотрудников сократился в несколько раз.
И, тем не менее, разработана композиция из пяти разновидностей штаммов фагов. Это «пожиратели» тех бактерий, которые, как правило, поселяются на обожжённой коже. В отделениях больниц, где исцеляют ожоги,
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]