Практична робота

Дослід 1. Якісне визначення 17-кетостероїдів у сечі.

17-Кетостероїдами називають всі стероїди, які мають кетонну групу біля 17-го вуглецевого атома, такі як андростерон. Вони утворюються зі стероїдів, які мають ОН-групу в 17-му положенні (кортизол, кортизон тощо).

Принцип методу. Метод базується на реакції 17-кетостероїдів з м-динітробензолом у лужному середовищі з утворенням продуктів конденсації фіолетово-рожевого кольору (максимум поглинання в межах 530 нм). Інтенсивність забарвлення пропорційна кількості 17-кетостероїдів у сечі.

Матеріальне забезпечення: 30 % розчин їдкого натру, розчин м-динітробензолу, сеча.

Хід роботи. У пробірку наливають 5 крапель сечі, 5 крапель 30 % розчину їдкого натру, 5 крапель розчину м-динітробензолу і перемішують. Через 2 – 3 хв з’являється вишнево-червоне забарвлення, характерне для 17-кетостероїдів.

Зробити висновок.

Дослід 2. Якісна реакція на тироксин.

Принцип методу. При руйнуванні молекули тироксину утворюється йодистий калій, з якого йод легко витісняється йодноватим калієм. Йод, який виділився, дає синє забарвлення з крохмалем.

5 КІ + КІО₃ + 3 H₂SO₄  3 І₂ + 3 K₂SO₄ + 3 H₂O

I₂ + крохмаль  синє забарвлення

Матеріальне забезпечення: тироксин, 10 % розчин H₂SO₄, 10 % розчин йодноватого калію, крохмаль, лакмус.

Хід роботи. До 24 крапель охолодженого гідролізату тироксину додають 10 % розчин H₂SO₄ до кислої реакції на лакмус. Після підкиснення додають 3 краплі 10 % розчину йодноватого калію (не потрібно додавати надлишок). Йод, який виділився, дає синє забарвлення з крохмалем.

Зробити висновок.

Клініко-діагностичне значення. Максимальну екскрецію 17-кетостероїдів у чоловіків і жінок спостерігають у 25-річному віці, після чого починається поступове її зниження.

При стресових станах кількість 17-кортикостероїдів у крові та сечі збільшується. При патології вміст в крові 17-кетостероїдів змінюється в залежності від гіпо- чи гіперфункції надниркових залоз. При хворобі Аддісона (гіпофункції) екскреція 17-кетостероїдів низька (1/3 – 1/5 від норми), їх вміст зменшується при гіпертиреозі, тяжких формах хвороб печінки (цироз), зростає – при пухлинах надниркових залоз (синдром Іценка-Кушінга).

Паралельне визначення вільних 17-кетостероїдів у сечі дає можливість повніше оцінити функціональний стан кори надниркових залоз.

Контроль виконання лабораторної роботи

1. У чоловіка 42 років, який довгий час знаходився в стані стресу, в сечі значно збільшився вміст 17-кетостероїдів, що в першу чергу свідчить про підвищення секреції:

А. Кортизолу

В. Адреналіну

С. Альдостерну

D. Норадреналіну

Е. Естрадіолу

2. При руйнуванні йодвмісних гормонів виділяється йодноватий калій, який дає синє забарвлення з крохмалем. Які гормони містять йод у своєму складі?

А Тироксин і трийодтиронін

В. Кортизол і альдостерон

С. Адреналін і норадреналін

D. Естрадіол і прогестерон

Е.Інсулін і глюкагон

2. Про що може свідчити підвищення концентрації 17-кортикостероїдів у крові та сечі?

2. Чим пояснити виникнення синього забарвлення розчину у якісній реакції на тироксин?