Лабораторная работа №32 количественное определение пировиноградной кислоты

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Пировиноградная кислота при взаимодействии с 2,4-динитрофенилгидразоном в щелочной среде образуется 2,4-динитрофенилгидразоны пировиноградной кислоты желто-оранжевого цвета, интенсивность окраски которых пропорциональна концентрации пировиноградной кислоты.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) кровь; 2) трихлоруксусная кислота (ТХУ), 100 г/л; 3) 2,4-динитрофенилгидразин, 1 г/л (в 2 н растворе соляной кислоты); 4) NaOH, 120 г/л; 5) стандартные растворы пировиноградной кислоты или пирувата натрия, 40, 80, 120 и 160 мкмоль/л; 6) центрифужные пробирки; 7) пробирки; 8) центрифуга; 9) КФК или ФЭК.

ХОД РАБОТЫ:

0,3 мл крови смешивают в центрифужной пробирке с 0,7 мл дистиллированной воды. К гемолизату приливают 1 мл раствора ТХУ, перемешивают палочкой и через 2-3 мин центрифугируют в течение 15 мин при 1500 об/мин. надосадочную жидкость полностью сливают в пробирку, к ней приливают 0,4 мл раствора 2,4-динитрофенилгидразина. Содержимое пробирки смешивают и на 20 мин помещают в темное место при комнатной температуре.

По истечении этого срока в пробирку приливают 1 мл раствора NaOH и через 5 мин определяют на КФК оптическую плотность окрашенного про­дукта. Измерение ведут против дистиллированной воды. Определение оптической плотности производится при синем светофильтре в кювете шириной 5 мм.

Количество пировиноградной кислоты в исследуемой пробе рассчитывают по калибровочному гра­фику, построенному по стандартным растворам пирувата. Из каждой концентрации стандартного раствора берут три пробы по 0,3 мл и об­рабатывают так же, как опытные. Средние значения оптических плотностей для каждой концентрации стандартного раствора пиру­вата используют для построения калибровочного графика.

Содержание пировиноградной кислоты в крови здоровых людей — 45,6-114 мкмоль/л.

Содержание пирувата в крови увеличивается при недостатке в пище тиамина, заболеваниях печени, сахарном диабете, гиперфункции гипофизарно-адреналовой системы, а также при больших физических нагрузках (в 10 раз и более).

РЕЗУЛЬТАТЫ и ВЫВОД:

Контрольные вопросы:

Охарактеризуйте процесс гликолиза. Реакции. Энергетика. Ферменты.

Напишите реакции процесса образования пировиноградной кислоты из глюкозы.

Во что превращается пировиноградная кислота в результате окислительного декарбоксилирования?

В каких органах протекает анаэробный процесс распада углеводов?

В чем сходство и различие процессов гликолиза и дрожжевого брожения.

Раздел 5. Липиды и их обмен

Тема 12 структура и функции липидов

Липиды – разнообразные по химическому строению вещества, проявляющие ряд общих физических, физико-химических и биологических свойств. Они характеризуются способностью растворяться в эфире, хлороформе, других жировых растворителях и только незначительно (и не всегда) – в воде, а также формировать вместе с белками и углеводами основной структурный компонент живых клеток.

• ЗАДАНИЕ: заполнить таблицу 25.

Таблица 25

Класс липидов	Основные представители	Особенности строения	Формула

Обязательными компонентами липидов являются спирты и жирные кислоты, соединенные друг с другом сложноэфирной или амидной связью.

В качестве спиртового компонента в большинстве липидов присутствует трехатомный спирт глицерин или высокомолекулярный аминоспирт сфингозин; в меньших количествах в липидах присутствуют диольные спирты и производные сфингозина – дигидросфингозин и сфинганин.

Липиды делят на две группы: неомыляемые (не содержат жирных кислот) и омыляемые (содержат жирные кислоты). К неомыляемым относятся стероиды, каротиноиды и терпеноиды (построены из изопреновых остатков). Омыляемые липиды делят на простые и сложные. К простым относятся: триацилглицериды (резерв энергии) и воски. Сложные липиды: фосфолипиды и гликолипиды.

Жирные кислоты, входящие в состав липидов (в частности, триацилглицеридов), определяют их физико-химические свойства. Чем больше в липидах остатков короткоцепочечных и ненасыщенных кислот, тем ниже температура плавления и выше растворимость. Жиры, в состав которых входит много ненасыщенных кислот, при комнатной температуре будут жидкими; их называют маслами. Животные жиры, содержащие значительное количество насыщенных жирных кислот, при этих условиях остаются твердыми.

Для характеристики свойств жира используют константы, или жировые числа, - кислотное число, число омыления, йодное число.

Кислотное число – это масса гидроксида калия (мг), необходимая для нейтрализации свободных жирных кислот, содержащихся в 1 г жира.

Число омыления – это масса гидроксида калия (мг), необходимая для гидролиза нейтральных липидов (омыления) и нейтрализации всех жирных кислот (в том числе свободных), содержащихся в 1 г жира.

Йодное число – это масса йода (г), связываемая 100 г жира. Поскольку связывание йода происходит по месту двойных связей ненасыщенных кислот, йодное число характеризует степень ненасыщенности жира.

Функции липидов:

1) пластическая - липиды входят в состав мембран и определяют их свойства (проницаемость, жидкостность, передача нервного импульса и др.);

2) энергетическая - липиды служат энергетическим материалом для организма; при окислении 1 г жира выделяется 39 кДж/моль энергии, что в 2 раза больше, чем при окислении 1 г белков или углеводов;

3) защитная - липиды предохраняют тело и органы от механического повреждения и сохраняют тепло (подкожный жир, жировая капсула почек, сальник в брюшной полости);

4) регуляторная (эйкозаноиды, стероидные гормоны);

5) эмульгирование жиров (пищеварение), стабилизация липидсодержащих жидкостей (желчь) и транспорт гидрофобных молекул (мицеллы, липопротеины).