- •Кожина Ольга Владимировна
- •Раздел 1. Белки
- •Тема 1 аминокислотный состав белка. Классификация и свойства аминокислот. Качественные реакции на белки и аминокислоты
- •Лабораторная работа №1 цветные реакции на белки и аминокислоты
- •1.4 Реакция на серусодержащие аминокислоты (реакция Фоля).
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 2 физико-химические свойства белков. Методы осаждения белков. Высаливание и денатурация
- •Лабораторная работа №2 диализ растворов белков
- •Лабораторная работа №3 осаждение белков высаливанием
- •Лабораторная работа №4 осаждение белков при кипячении
- •Лабораторная работа №5 осаждение белков солями тяжелых металлов
- •Лабораторная работа №6 осаждение белков концентрированными минеральными кислотами
- •Лабораторная работа №7 осаждение белков органическими веществами
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 3 количественное определение белка. Оценка на основании фотометрии продуктов цветной реакции. Построение калибровочных графиков
- •Лабораторная работа №8 количественное определение белка
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 4 гидролиз белка. Характеристика пептидной связи
- •Лабораторная работа №9 кислотный гидролиз простого белка
- •Лабораторная работа №10 формоловое титрование (по Серенсену)
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 5 хроматографическое разделение аминокислот
- •Лабораторная работа №11 хроматографическое разделение аминокислот на бумаге
- •Контрольные вопросы:
- •Раздел 2. Ферменты
- •Тема 6 ферменты как биологические катализаторы. Свойства ферментов
- •Лабораторная работа №12 специфичность действия ферментов
- •Лабораторная работа №13 термолабильность ферментов
- •Лабораторная работа №14 влияние реакции среды на действие ферментов слюны
- •Определение оптимума рН действия амилазы слюны
- •Лабораторная работа №15 влияние активаторов и ингибиторов на действие ферментов
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 7 действие ферментов отдельных классов
- •Лабораторная работа №16 определение активности пепсина
- •Лабораторная работа №17 действие пепсина на белок фибрин
- •Лабораторная работа №18 обнаружение каталазы в крови
- •Лабораторная работа №19 действие липазы на жиры
- •Лабораторная работа №20 действие пероксидазы крови
- •Контрольные вопросы:
- •Тема 8 витамины, как структурные компоненты ферментов
- •Лабораторная работа №21 качественные реакции на жирорастворимые витамины
- •Лабораторная работа №22 качественные реакции на витамины группы в
- •Лабораторная работа №23 качественные реакции на витамин с
- •Лабораторная работа №24 количественное определение витамина с
- •Контрольные вопросы:
- •Раздел 3. Нуклеиновые кислоты и их обмен
- •Тема 9 структура и функции нуклеиновых кислот. Нуклеопротеиды
- •Лабораторная работа №25 выделение дезоксирибонуклеопротеидов (днп) из тканей
- •1. Экстракция и выделение днп из тканей.
- •Лабораторная работа №26 гидролиз нуклеопротеидов
- •2. Качественные реакции на составные части нуклеопротеидов.
- •Контрольные вопросы:
- •Раздел 4. Углеводы и их обмен
- •Тема 10 углеводы. Восстанавливающая способность углеводов
- •Лабораторная работа №27 качественное определение глюкозы
- •Лабораторная работа №28 качественное определение фруктозы
- •Лабораторная работа №29 обнаружение восстанавливающей способности углеводов
- •Контрольные вопросы:
- •Лабораторная работа №31 обнаружение молочной кислоты в мышечной ткани
- •Лабораторная работа №32 количественное определение пировиноградной кислоты
- •Контрольные вопросы:
- •Раздел 5. Липиды и их обмен
- •Тема 12 структура и функции липидов
- •Лабораторная работа № 33 качественное определение липидов сыворотки крови
- •Лабораторная работа №34 сравнение ненасыщенности жиров
- •Лабораторная работа №35 обнаружение стеролов
- •Лабораторная работа №36 качественные реакции на холестерин
- •1. Реакция Либермана-Бурхарда.
- •2. Реакция Сальковского.
- •Контрольные вопросы:
- •Лабораторная работа №38 качественные реакции на желчные кислоты
- •Контрольные вопросы:
- •Раздел 6. Гормоны
- •Тема 14 регуляция обмена веществ. Гормоны
- •Лабораторная работа №39 качественные реакции на инсулин
- •Лабораторная работа №39 качественное определение адреналина
- •Контрольные вопросы:
- •Раздел 7. Энергетический обмен
- •Лабораторная работа №42 обнаружение над в дрожжах
- •Контрольные вопросы:
- •Список литературы
- •Содержание
Лабораторная работа №13 термолабильность ферментов
Ферменты при нагревании до 60-80 оС утрачивают свои свойства биологических катализаторов. Степень инактивирования зависит и от длительности теплового воздействия. При низких температурах ферменты хорошо сохраняются, но скорость ферментативного катализа резко снижается. В термолабильности ферментов можно убедиться на примере действия фермента слюны – амилазы и мальтазы.
ПРИНЦИП РАБОТЫ:
Амилаза катализирует гидролиз крахмала и гликогена до дисахарида мальтозы. Мальтаза расщепляет мальтозу до глюкозы. Крахмал дает с йодом синее окрашивание, амилодекстрины (наиболее сложные) – фиолетовое, эритродекстрины – краснобурое, ахродекстрины – желтое (цвет йода в воде). Мальтоза и глюкоза имеют свободные альдегидные группы и дают реакцию Троммера, которая основана на способности углеводов при нагревании восстанавливать гидрат окиси меди (голубого цвета) в гидрат закиси желтого цвета. При дальнейшем нагревании гидрат закиси переходит в красную закись меди.
РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:
1) слюна в разведении 1:5; 2) крахмал, 1 % раствор; 3) NaOH, 10 %; 4) CuSO4, 1 %; 5) 0,1 % раствора йода в 0,2 % йодистом калии; 6) мерные цилиндры на 10 или 25 мл; 7) пипетки на 1 и 5 мл; 8) термостат или водяная баня (температура 38о); 9) пипетки глазные; 10) стакан со льдом или холодильник; 11) предметные стекла; 12) карандаши по стеклу.
ХОД РАБОТЫ:
Готовят разведение слюны 1:5. В чистую пробирку отливают небольшое количество слюны разведенной 1:5 (2 или 3 мл) и кипятят ее в течение 5-8 минут, после чего охлаждают.
В четыре чистые пронумерованные пробирки приливают по 10 капель 1 % раствора крахмала.
В пробирку №1 и в пробирку №2 добавляют по 10 капель слюны, разведенной 1:5. В пробирку №3 добавляют 10 капель прокипяченной слюны. В пробирку №4 (контрольная) добавляют 10 капель дистиллированной воды.
Пробирку №1 помещают на 10 минут в термостат или водяную баню при 38оС.
Пробирку №2 помещают на 10 минут в стакан со льдом.
Пробирки №3 и №4 оставляют на 10 минут при комнатной температуре.
Затем с содержимым каждой пробирки проделывают качественные реакции на крахмал (реакция с йодом) и продукты его расщепления (реакция Троммера), для чего содержимое каждой пробирки делят на две части.
Реакция на крахмал: к 5 каплям исследуемого раствора приливают 1 каплю раствора йода в йодистом калии. В присутствии крахмала появляется синее окрашивание.
Реакция Троммера: к 5 каплям исследуемой жидкости прибавляют 5 капель 10 % раствора NaOH и 5 капель 1 % раствора CuSO4, нагревают. В присутствии глюкозы и мальтозы выпадает желтый осадок гидрата закиси меди или красный осадок закиси меди.
Результаты занести в таблицу 7. Сделать вывод об оптимальной температуре для действия исследуемого фермента.
Таблица 7
№ |
Субстрат |
Фермент |
Температура |
Реакция на крахмал с йодом |
Реакция Троммера |
ВЫВОД |
1. |
|
|
|
|
|
|
2. |
|
|
|
|
|
|
3. |
|
|
|
|
|
|
4. |
|
|
|
|
|
|