Лабораторная работа №14 влияние реакции среды на действие ферментов слюны

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Каждый фермент наиболее активен в пределах довольно узкой зоны рН (оптимум рН). При изменении рН в любую сторону от оптимального значения активность фермента уменьшается. Отклонение рН от оптимума может нарушать связь между белковой частью ферментов и их простетическими группами, может влиять на связывание субстрата с ферментов. Оптимум рН для амилазы слюны равен 6,9.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) слюна в разведении 1:100 (1:50); 2) крахмал, 0,5 % раствор; 3) Na₂HPO₄, 0,2 М раствор; 4) лимонная кислота, 0,1 М раствор; 5) раствор 0,1 % йода в 0,2 % йодистом калии; 6) NaCl, 1 % раствор; 7) микробюретки; 8) водяная баня или термостат (температура 38^о); 9) пипетки на 1 мл.

ХОД РАБОТЫ:

В 7 пронумерованных пробирок наливают 0,2 М раствор Na₂HPO₄ и 0,1 М раствор лимонной кислоты в соотношениях, указанных в таблице 9. Получают буферные растворы с рН от 5,6 до 8,0. В каждую пробирку добавляют по 10 капель 1 % раствора NaCl и 0,5 % раствора крахмала, по 10 капель слюны, разведенной в 50 или 100 раз (согласно таблице 8).

Таблица 8

Определение оптимума рН действия амилазы слюны

№	Кол-во 0,2 М Na2HPO4 (мл)	Кол-во 0,1 М лимонной кислоты	рН	Кол-во 0,5 % р-ра крахмала (капли)	Кол-во слюны 1:100 (1:50), капли
1.	0,58	0,42	5,6	10	10
2.	0,63	0,37	6,0	10	10
3.	0,69	0,31	6,4	10	10
4.	0,77	0,23	6,8	10	10
5.	0,87	0,13	7,2	10	10
6.	0,94	0,06	7,6	10	10
7.	0,97	0,03	8,0	10	10

Содержимое пробирок перемешивают и помещают их в водяную баню или термостат при температуре 38^о на 8 минут.

Затем во все пробирки добавляют по 1 капле раствора йода в йодистом калии, перемешивают, наблюдают окраску и определяют рН, при котором амилаза действует наиболее активно (оптимальную рН).

Результат занести в таблицу 9. Сделать вывод об оптимуме рН действия амилазы слюны.

Таблица 9

№	рН	Окраска с йодом	ВЫВОД
1
2
3
4
5
6
7

Лабораторная работа №15 влияние активаторов и ингибиторов на действие ферментов

Вещества, усиливающие действие ферментов, называются активаторами. Активаторы стимулируют действие ферментов, но в отличие от коферментов не принимают участия в реакции.

Ингибиторами (парализаторами) называются вещества, снижающие скорость ферментативных реакций. Ингибирование действия ферментов может происходить в том случае, если с активным центром фермента вместо специфического субстрата соединяется близкий структурный аналог субстрата, т.е. вещество, близкое по строению к субстрату (конкурентное торможение). Ингибиторами нередко являются продукты промежуточных или конечных реакций какого-либо биохимического процесса.

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Активность амилазы слюны усиливается в присутствии хлористого натрия – специфического активатора амилазы. Сернокислая медь оказывается тормозящее действие на активность амилазы. Крахмал и декстрины открывают реакцией с раствором йода.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) слюна в разведении 1:5; 2) крахмал, 1 %; 3) NaCl, 1 %; 4) CuSO₄, 1 %; 5) 0,1 % раствора йода в 0,2 % йодистом калии; 6) пробирки.

ХОД РАБОТЫ:

В 3 пронумерованные пробирки приливают по 3 мл слюны, разведенной 1:5.

В пробирку №1 добавляют 2 капли 1 % раствора NaCl.

В пробирку №2 добавляют 2 капли 1 % раствора CuSO₄.

В пробирку №3 (контрольная) добавляют 2 капли дистиллированной воды.

Затем во все три пробирки приливают по 5 капель 1 % раствора крахмала.

Оставляют на 2 минуты при комнатной температуре. После чего проделывают реакцию на крахмал, приливая по 1 капле раствора йода в йодистом калии.

Результат занести в таблицу 10. Сделать вывод о том, какое из добавленных веществ является активатором, а какое – ингибитором.

Таблица 10

№	Субстрат	Фермент	Добавленное вещество	Окраска с йодом	ВЫВОД
1.
2.
3.