Лабораторная работа №17 действие пепсина на белок фибрин

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Протеолитическую активность пепсина наблюдают, добавив к его подкисленному раствору небольшое количество фибрина. Фибрин, нерастворимый в воде, под действием пепсина гидролизуется до растворимых в воде пептидов.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) 1 % раствор препарата пепсина в 0,2 % растворе HCl; 2) фибрин; 3) водяная баня; 4) пробирки; 5) пипетки; 5) термометр.

ХОД РАБОТЫ:

В пробирку №1 приливают 15 капель или 0,5 мл раствора пепсина, в пробирку №2 – такое же количество предварительно прокипяченного раствора пепсина. В каждую пробирку опускают небольшой кусочек фибрина. Обе пробирки помещают в водяную баню при температуре 38 ^оС на 60 минут. Наблюдают растворение фибрина.

Результаты занести в таблицу 13.

Таблица 13

№	Фермент	Субстрат	Изменение субстрата	ВЫВОД

Лабораторная работа №18 обнаружение каталазы в крови

По химической природе каталаза является геминферментом. Каталаза катализирует разложение перекиси водорода на молекулярный кислород и воду: 2Н₂О₂ → О₂↑ + 2Н₂О

Биологическая роль каталазы заключается в обезвреживании перекиси водорода, образующейся в организме во время течения окислительно-восстановительных процессов.

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Об активности каталазы крови судят по бурному выделению пузырьков кислорода при добавлении перекиси водорода к капле крови.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) кровь; 2) Н₂О₂, 1 % раствор; 3) штатив с пробирками; 4) капельницы.

ХОД РАБОТЫ:

В пробирку наливают 10-15 капель 1 % раствора Н₂О₂ и добавляют каплю крови. Жидкость вспенивается, так как происходит бурное выделение пузырьков кислорода.

Результат занести в таблицу 14.

Таблица 14

№	Фермент	Субстрат	Реакция, катализируемая ферментом	Выявление действия фермента

Лабораторная работа №19 действие липазы на жиры

Липаза ускоряет гидролиз нейтрального жира. У человека она содержится в небольшом количестве в желудке; главным же образом липаза входит в состав сока поджелудочной железы. Желудочная липаза может действовать только на предварительно эмульгированные жиры, например на жир молока.

В кишечнике желчные кислоты и белки способствуют эмульгированию липидов и тем самым активируют действие липазы поджелудочной железы.

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Липазу открывают, добавив ее раствор к молоку, подщелоченному раствором карбоната натрия до бледно-розовой окраски на фенолфталеин. В присутствии липазы происходит гидролитическое расщепление жира молока на глицерин и жирные кислоты, реакция среды сдвигается в кислую сторону, розовая окраска исчезает.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) вытяжка из препарата поджелудочной железы или 5 % раствор панкреатина; 2) сухие сливки, 5 % раствор; 3) фенолфталеин, 1 % спиртовой раствор; 4) карбонат натрия, 1 % раствор; 5) бюретки; 6) пробирки; 7) пипетки; 8) водяная баня; 9) термометры.

ХОД РАБОТЫ:

В 2 пронумерованные пробирки наливают по 10 капель 5 % раствора сухих сливок. В пробирку №1 добавляют 5 капель вытяжки из поджелудочной железы или раствор панкреатина, содержащий липазу. В пробирку №2 добавляют такое же количество воды. В обе пробирки приливают по 1 капле 1 % раствора фенолфталеина и по каплям 1 % раствор карбоната натрия до появления бледно-розовой окраски (нельзя добавлять избыток раствора карбоната натрия). Пробирки помещают в водяную баню или термостат при температуре 38 ^оС на 30 минут. Наблюдают изменение окраски.

Результаты занести в таблицу 15.

Таблица 15

№	Фермент	Субстрат	Окраска на фенолфталеин		ВЫВОД
			исходная	конечная