Контрольные вопросы:

При каких оптимальных условиях следует определять активность ферментов?

Как влияет рН на активность ферментов?

Как можно оценить специфичность ферментов?

Как можно воздействовать на скорость ферментативной реакции?

Как зависит скорость ферментативной реакции от концентрации субстрата?

Как влияют активаторы и ингибиторы на действие ферментов?

Конкурентные и неконкурентные ингибиторы. Механизм их действия.

Ингибиторы необратимого действия.

Регуляция активности ферментов. Единица активности.

Напишите уравнение реакции гидролиза крахмала до глюкозы под влиянием ферментов слюны.

Напишите уравнение химической реакции Троммера с глюкозой.

Тема 7 действие ферментов отдельных классов

Катализируемая химическая реакция является тем признаком, по которому можно отличить один фермент от другого. Этот принцип был положен в основу классификации ферментов, согласно которой все известные ферменты подразделяют на шесть классов.

• ЗАДАНИЕ: заполнить таблицу 11.

Таблица 11

№	Класс	Реакции, катализируемые ферментом	Важнейшие подклассы	Примеры
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Лабораторная работа №16 определение активности пепсина

Ферменты пищеварительного тракта, ускоряющие переваривание белков, жиров и углеводов пищи, относятся к классу гидролаз. Ферменты, принимающие участие в расщеплении белков в желудочно-кишечном тракте, относятся к подклассу пептид-гидролаз. Особенностью пепсина является то, что он максимально активен в резко кислой среде (оптимум рН 1,0-2,0).

ПРИНЦИП РАБОТЫ:

Створаживание молочно-ацетатной смеси при рН 4,9 и температуре 25 ºС пепсином происходит в соответствии с его способностью переваривать белки. За единицу активности пепсина принимают такое его количество, которое при указанных условиях створаживает 5 мл молочно-ацетатной смеси за 1 мин (эта условная единица соответствует 0,01 мг кристаллического пепсина). В норме желудочный сок человека содержит в 1 мл 40-60 ед. пепсина.

РЕАКТИВЫ и ОБОРУДОВАНИЕ:

1) ацетатный буфер с рН 4,9; 2) молочно-ацетатная смесь; 3) раствор пепсина или желудочный сок; 4) пробирки, пипетки, секундомер.

ХОД РАБОТЫ:

В пробирку №1 помещают 1 мл желудочного сока (или раствора пепсина).

В пробирку №2 – 3 мл молочно-ацетатной смеси и прогревают 5 минут при 25 ºС. Затем быстро переливают молочно-ацетатную смесь в первую пробирку и включают секундомер. Как только на стенках пробирки появятся первые хлопья казеина, останавливают секундомер. Для расчета активности пепсина в 1 мл число 60 делят на количество секунд – получают количество единиц пепсина в 1 мл желудочного сока.

Например, 40 ед. соответствует 0,4 мг кристаллического пепсина.

Результат занести в таблицу 12.

Таблица 12

№	Фермент	Субстрат	Реакция, катализируемая ферментом	Время действия	Количество пепсина в 1мл