Лабораторные работы для выполнения на практических занятиях

Раздел VII. Биохимия тканей и жидкостей полости рта

Биохимия соединительной ткани

Соединительная ткань составляет около 50% общей массы тела человека. Изучение обмена веществ соединительной ткани важно в познании молекулярных механизмов патологических про­цессов, протекающих преимущественно в этой ткани: воспале­ния, заживления ран, консолидации переломов костей, дегене­ративно-дистрофических поражений скелета, диффузных систем­ных заболеваний соединительной ткани.

Работа. Качественная проба на сульфатированные гликозаминогликаны в моче

Повышенное выделение с мочой гликозаминогликанов харак­терно для мукополисахаридозов (наследственно обусловленных нарушениях обмена гликозаминогликанов). Поскольку дифферен­циальная диагностика мукополисахаридозов только на основании клинической картины трудна, анализ мочи может помочь поста­новке диагноза.

Здоровый человек за сутки выделяет около 10 мг гликозами­ногликанов. Величина экскреции этих биополимеров может по­вышаться при ревматизме, полиартритах, хирургических травмах, а также при наследственной патологии — мукополисахаридозах. При некоторых формах мукополисахаридозов у детей в сутки с мочой выделяется до 500 мг и выше сульфатированных гликоз­аминогликанов.

Принцип метода. Метод основан на способности сульфа­тированных гликозаминогликанов при рН=5,5-6,5 количественно взаимодействовать с риванолом, что сопровождается помутне­нием раствора.

Ход определения. В две пробирки вносят по 1-1,5 мл про­фильтрованной мочи и по 5 капель ацетатного буфера. В одну из пробирок (опыт) добавляют 5-6 капель 0,1% раствора риванола. Содержимое пробирок сравнивают на темном фоне. Моча, со­держащая гликозаминогликаны выше нормы, мутнеет.

К методическим рекомендациям

Лабораторные работы для выполнения на практических занятиях

Раздел VII. Биохимия тканей и жидкостей полости рта

Минерализованная соединительная ткань

Костная ткань является высокоспециализированным видом соединительной ткани, отличается большой твердостью, механической прочностью, наличием большого количества межклеточ­ного вещества при сравнительно небольшом количестве костных клеток, В межклеточном веществе костной ткани преобладают неорганические соединения. Отличительной особенностью кост­ной ткани является способность ее органического матрикса ми­нерализоваться.

Работа. Изучение химического состава костной ткани

Костная ткань состоит из минеральных веществ (50-60% ее веса), органического вещества (30%) и воды (10-20%). Скелет — главное депо кальция и фосфора. У взрослого человека в нем сосредоточено около 1 200 г кальция, 530 г фосфора, 11 г маг­ния. Органическое вещество на 95% состоит из коллагена.

1. Обнаружение неорганических составных частей костной ткани.

Неорганические вещества извлекают из костной ткани рас­твором серной кислоты. С этой целью в колбу помещают 5 г кост­ной ткани, 25 мл 0,5% раствора серной кислоты и оставляют сто­ять 24 часа.

а) Открытие солей кальция.

К 1 мл сернокислотной вытяжки прибавить 1-2 капли насы­щенного раствора щавелевокислого аммония. Выпадает нерас­творимый осадок щавелевокислого кальция.

б) Открытие солей магния.

Жидкость, полученную при проведении предыдущей работы, профильтровать и к фильтрату добавить 2-3 капли концентриро­ванного раствора аммиака. Выпадает нерастворимый осадок фос­форнокислой аммиакмагнезии.

2. Изучение аминокислотного состава оссеина.

Оставшуюся после обработки серной кислотой органическую

часть костной ткани кипятить 15 минут с 20 мл дистиллированной воды. С полученным раствором после фильтрования выполнить реакции для обнаружения белка (биуретовая реакция) и для изу­чения его аминокислотного состава (реакции Фоля, Миллона).

Работа. Определение сиаловых кислот

Принцип метода. Метод основан на цветной реакции, по­лучаемой при нагревании сиаловой кислоты (ацетилнейрамино- вой) с раствором Гесса. Интенсивность буровато-розового окра­шивания зависит от концентрации сиаловых кислот.

Порядок выполнения работы. К 1 мл сыворотки крови в центрифужной пробирке добавляют 1 мл 10% раствора три- хлоруксусной кислоты и встряхивают. Затем помещают пробир­ку в кипящую водяную баню на 5 мин. и охлаждают. Это приво­дит к освобождению связей N-ацетилнейраминовой кислоты с белковой частью молекулы гликопротеидов. После центрифу-гирования к 0,4 мл надосадочной жидкости добавляют 5 мл реактива Гесса (94 ч. ледяной уксусной кислоты и 6 ч. концен­трированной серной кислоты) и повторно кипятят в водяной бане 30 минут. При этом появляется буровато-розовое окрашива­ние. Охлаждают и колориметрируют на ФЭКе в кюветах на 10 мл против воды при зеленом светофильтре. Полученную вели­чину экстинкции умножают на 1000. Результат определения выражают в условных единицах экстинкции. В норме величина ее колеблется от 100 до 195 условных единиц, что соответст­вует содержанию сиаловых кислот от 550 мл до 790 мг/л (55- 79 мг%).

Клинико-диагностическое значение. Определение сиа­ловых кислот имеет важное диагностическое значение при рев­матизме, туберкулезе, раке легких, злокачественных опухолях костной ткани, когда их содержание увеличивается.

К методическим рекомендациям