Лабораторные работы для выполнения

НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ

Раздел V. Биохимия витаминов и гормонов.

Тема 5.5. Гормональная регуляция обмена белков, кальция,

воды и электролитов.

Определение содержания кальция в сыворотке крови мурексидным методом

Принцип метода. Метод основан на способности мурексида образовывать с ионами кальция в щелочной среде комплексные соединения, окрашенные в красно-фиолетовый или бледно-розовый цвет (в зависимости от концентрации). При титровании раствором более сильного комплексообразователя (комплексон III) это комплексное соединение разрушается, и связанный мурексид вновь освобождается, что приводит к появлению его натуральной окраски (фиолетовой или бледно-сиреневой). Объем комплексона III, пошедший на титрование, пропорционален содержанию кальция в сыворотке крови.

Ход определения. В коническую колбочку вносят 50 мл дистиллированной воды, 0,4 мл раствора гидроксида натрия, на кончике скальпеля мурексид и тщательно перемешивают стеклянной палочкой. Появляется бледно-сиреневая окраска, обусловленная цветом самого индикатора.

Отбирают 25 мл полученного раствора в колбочку для титрования (оставшийся раствор служит эталоном сравнения) и добавляют 0,5 мл сыворотки крови, при этом появляется бледно-розовое окрашивание, обусловленное образованием кальциево-мурексидного комплекса.

Смесь титруют раствором комплексона III до первоначальной окраски индикатора. Конец титрования контролируют, сопоставляя окраску опытной пробы с эталоном (неиспользованная часть раствора).

Расчет. Содержание кальция рассчитывают по формуле:

где х – содержание кальция в сыворотке крови, ммоль/л; V – объем раствора комплексона III, пошедший на титрование, мл; 0,5 – объем сыворотки, взятый на исследование, мл; 72 – коэффициент пересчета количества кальция на 1л сыворотки с учетом эквивалентности комплексообразователя; 40 – молекулярная масса кальция.

Оформление работы. Рассчитать содержание кальция в сыворотке крови, сравнить с нормой и сделать вывод.

Практическое значение работы. В норме содержание кальция в сыворотке крови составляет 2,25-2,75 ммоль/л. Гиперкальциемия наблюдается при гипервитаминозе D, гиперпаратиреоидизме, при сердечной недостаточности, желтухе. Гипокальциемия встречается при спазмофилии, рахите, хронических заболеваниях почек, гипопаратиреоидизме и т. д.

К методическим рекомендациям

Лабораторные работы для выполнения

НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ

Раздел VI. Биохимия крови и печени.

Тема 6.1. Белки и ферменты плазмы крови.

Определение концентрации белков сыворотки крови биуретовым методом.

Принцип метода. Биуретовый метод относится к колориметрическим методам анализа и основан на цветной биуретовой реакции.

Ход определения. Взять в пробирку 0,2 мл исследуемой сыворотки, добавить 4,8 мл дистиллированной воды, перемешать. К 3 мл полученного раствора добавить 3 мл биуретового реактива, смешать. Через 30 минут определить экстинкцию полученного раствора против контроля (3 мл дистиллированной воды + 3 мл биуретового реактива) λ=540. Данные для построения калибровочной кривой:

Содержание белка	Оптическая плотность
7,80 5,80 3,95 2,96 1,975 1,46	0,303 0,226 0,150 0,113 0,076 0,057

Нормальное содержание белка в сыворотке крови взрослых людей 65-85 г/л (6,5 – 8,5 %), у детей до 6 лет – 56-58 г/л (5,6 – 8,5 %).

К методическим рекомендациям