Зависимость скорости ферментативной реакции от температуры

Принцип метода. Метод основан на определении скорости гидролиза альфа-амилазой слюны крахмала в зависимости от температуры.

Ход определения. В пробирку помещают 5 капель слюны, кипятят 1-2 минуты на водяной бане и остужают. В две другие помещают по 5 капель некипяченой слюны.

Вносят во все пробы по 10 капель раствора крахмала и ставят первую и вторую пробирки в водяную баню при 38^оС, а третью - в воду со льдом или снегом на 3 мин. Затем прибавляют в каждую пробирку по 1 капле раствора йода в йодиде калия и сравнивают развивающуюся окраску.

Оформление работы. Данные оформляют в виде таблицы. Сделать вывод о зависимости скорости ферментативной реакции от температуры и причинах этой зависимости.

Фермент	Субстрат	Окрашивание с йодом	Температура

К методическим рекомендациям

Лабораторные работы для выполнения

НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ

Раздел I. Химия белков. Ферменты.

Тема 1.4. Ингибиторы и активаторы ферментов.

Регуляция активности ферментов.

Активаторы и ингибиторы альфа-амилазы слюны

Метод основан на сравнении скорости гидролиза крахмала (продукт гидролиза крахмала обнаруживают пробой с йодом) под действием альфа-амилазы слюны до и после добавления фенилтиомочевины, ионов Сl^- и Сu²⁺.

Ход определения. Берут 4 пробирки наливают по 10 капель: в первую-дистиллированной воды, во вторую-раствора хлорида натрия, а в третью-раствора сульфата меди и в четвертую – раствора фенилтиомочевины, а затем по 20 капель раствора крахмала и по 1 капле разведенной слюны. Содержимое перемешивают встряхиванием, помещают пробирки в водяную баню при 38^оС и засекают время начала инкубации.

Через каждые 1-2 минуты из проб отбирают в другие пробирки по 1 капле жидкости и добавляют 1 каплю раствора йода в йодиде калия. Отмечают время появления красного окрашивания (стадия образования эритродекстринов) при проведении реакции с йодом в каждой из пробирок.

Оформление работы. Результаты занести в таблицу и сделать вывод о действии изученных веществ.

Фермент	Модификатор активности	Фермент	Время образования эритродекстринов, мин (проба с йодом)

К методическим рекомендациям

Лабораторные работы для выполнения

НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ

Раздел II. Биоэнергетика. Обмен углеводов.

Тема 2.1. Биологическое окисление. Окислительное фосфорилирование.

Качественная реакция на каталазу

Ход определения. Действие каталазы крови (вместо крови можно использовать слюну, которая содержит небольшое количество каталазы). В две пробирки берут по 1 мл воды, добавляют по 2 капли крови и одну пробирку кипятят 2-3 минуты для начала инактивации ферментов. После охлаждения в обе пробирки добавляют 5-10 капель перекиси водорода, встряхивают и наблюдают за выделением пузырьков кислорода. При встряхивании кипяченой пробы выделение пузырьков не происходит.

К методическим рекомендациям

ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБОТЫ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ

НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ

Раздел II. Биоэнергетика. Обмен углеводов.

Тема 2.2. Гликолиз. Пентозофосфатный путь окисления глюкозы.

Качественная реакция на молочную кислоту

Принцип метода. Молочная кислота в присутствии фенолята железа (реакция Уффельмана), окрашенного в фиолетовый цвет, образует лактат железа желто-зеленого цвета.

Ход определения. Мышцы измельчают ножницами и растирают 1 грамм их в ступке в течение 3 минут, прибавив 5 капель воды до получения гомогенной массы. Затем приливают 3 мл воды, перемешивают, сразу же фильтруют через смоченную водой вату, 25 капель фильтрата добавляют по каплям к реактиву Уффельмана (20капель 1% раствора фенола + 2 капли 1% раствора хлорного железа до появления фиолетового цвета). В присутствии молочной кислоты фиолетовая окраска жидкости переходит в желто-зеленую, так как образуется лактат железа. Для сравнения проводят реакцию Уффельмана с раствором молочной кислоты и наблюдают появление желто-зеленого окрашивания.

К методическим рекомендациям