Лабораторные работы для выполнения
НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ
Раздел IV. Обмен азотсодержащих соединений.
Тема 4.2. Источники и пути обезвреживания аммиака
в различных тканях.
Количественное определение аммиака по методу Мальфатти
Принцип метода состоит в том, что при действии формалина аммонийные соли мочи образуют уротропин и выделяется эквивалентное количество кислоты. Количественное содержание кислоты определяется титрованием.
Ход определения. В колбочку отмеривают пипеткой 10 мл мочи, добавляют отмеренные цилиндром 30 мл дистиллированной воды, 2 капли 1% раствора фенолфталеина и титруют при перемешивании 0,1н раствором щелочи до появления бледно-розового окрашивания. Затем к раствору добавляют 3-5 мл формалина, предварительно нейтрализованного раствором щелочи в присутствии фенолфталеина. Смесь обесцвечивается вследствие разложения аммонийных солей и появления кислот. Последние оттитровывают 0,1н раствором щелочи до появления бледно-розового окрашивания. Расчет производят по формуле : X = a × 0,0017 × 150, где Х – количество (грамм) аммонийных солей в суточном количестве мочи; а – количество (мл) 0,1н раствора щелочи, пошедшее на последнее титрование. Норма: 0,6-0,8 г.
К методическим рекомендациям
Лабораторные работы для выполнения
НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ
Раздел IV. Обмен азотсодержащих соединений.
Тема 4.3. Обмен глицина, серина, цистеина, метионина,
триптофана, аргинина.
Количественное определение креатинина в моче
Креатитин образуется из креатининфосфата и является постоянной составной частью мочи. За сутки с мочой выделяется 1-2 г (8,8-17,6 ммоль) креатинина, что составляет 2-7% азота от всех азотсодержащих соединений мочи. Количество выделенного с мочой креатинина зависит от интенсивности процессов распада белков тканей организма и содержания креатинина в пище (его много в мясной пище).
Креатин Креатинфосфат Креатинин
Повышенное содержание креатинина в моче наблюдается при острых инфекциях, лихорадочных состояниях, у больных сахарным и несахарным диабетом. Моча здорового человека не содержит креатина, и выделение его с мочой свидетельствует о патологии поперечнополосатых мышц (миостения, мышечная дистрофия).
Принцип метода. Метод количественного определения креатинина в моче основан на цветной реакции Яффе с пикриновой кислотой с последующим определением интенсивности окраски на ФЭКе. Концентрацию креатинина в исследуемой моче находят по калибровочной кривой, выражающей зависимость окраски стандартных растворов от их концентрации.
Ход определения. В одну мерную колбу отмеривают 0,5 мл мочи, в другую – 0,5 мл дистиллированной воды (контрольная проба). В обе колбы добавляют по 3 мл насыщенного раствора пикриновой кислоты, смесь перемешивают, добавляют по 0,2 мл 10% раствора NaOH и доводят объем дистиллированной воды до 100 мл. Перемешивают содержимое колб, выдерживают в течение 10 мин при комнатной температуре и измеряют на ФЭКе оптическую плотность опытной пробы против контроля в кюветах с толщиной слоя 1 см со светофильтром (зеленый, длина волны 540 нм).
Зная оптическую плотность опытного раствора, по калибровачному графику определяют содержание креатинина в пробе, взятой для анализа, и расчитывают количество креатинина, выделенного с мочой за сутки по формуле:
где α- содержание креатинина в пробе с мочой, найденное по калибровочному графику, ммоль; V-объем мочи, взятой для анализа, мл; Vсут – суточный объем мочи, мл.
Оформление работы. Записывают принцип метода, рисуют калибровочный график и указывают содержание креатинина в моче в норме.
К методическим рекомендациям