Лабораторные работы для выполнения

НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ

Раздел III. Обмен липидов.

Тема 3.4. Регуляция и патология липидного обмена.

Обнаружение кетоновых тел в моче

Принцип метода. Кетоновые тела (β-гидроксимасляная кислота, ацетатоуксусная и ацетон) появляются в моче при нарушениях углеводного и жирового обменов, в частности при диабете, а так же при голодании. В номальной моче кетоновые тела обычными реакциями не обнаруживается. Определение кетоновых тел в моче очень важно для диагностики заболевания, для контроля за ходом лечения и установлением диеты для больного диабетом.

Ход определения. 1. Проба Люголя на ацетон. К 2 мл мочи добавляют 3-4 капли раствора нитропруссида натрия и 2-3 капли раствора гидроксида натрия. Появляется красно-бурое окрашивание. При подкислении концентрированной уксусной кислотой окрашивание становиться ярко-красным. Если ацетон отсутствует в моче, при подкислении уксусной кислотой красное окрашивание переходит в желтое (реакция на креатинин в моче).

2. Проба Либена на ацетон. К 2 мл мочи добавляют 3-4 капли раствора гидроксида натрия и затем по каплям раствор Люголя до слабо-желтой окраски раствора. При наличии ацетона в моче жидкость мутнеет вследствие выделения бледно-желтого кристаллического осадка йодоформа, обладающего характерным запахом:

CH₃COCH₃ + 2I₂ + 4NaOH → CH₃I + CH₃COONa + 3NaI + 3H₂O

йодоформ

3. Проба Герхарда на ацетоуксусную кислоту. К 5 мл мочи прибавляют по каплям раствор хлорида железа(III), выпадает осадок фосфатов в форме FePO₄; при наличии ацетоуксусной кислоты от прибавления лишней капли хлорида железа (III) появляется винно-красное окрашивание (реакция на енолы), постепенно бледнеющее при стоянии вследствие самопроизвольного декарбоксилирования ацетоуксусной кислоты:

CH₃COCH₂COOH → CH₃COCH3 + CO₂

К методическим рекомендациям

Лабораторные работы для выполнения

НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ

Раздел IV. Обмен азотсодержащих соединений.

Тема 4.1. Азотосодержащие соединения пищи. Переваривание белков.

Исследование действия пепсина

Принцип метода. Пепсин действует на внутренние пептидные связи, расщепляя белки на пептиды. О действии пепсина на белок, например на фибрин (нерастворимый белок плазмы), можно судить, наблюдая растворение кусочков фибрина. Полученный раствор дает положительную биуретовую реакцию, указывающею на появление в растворе пептидов.

Ход определения. 1. В три пробирки наливают по 1 мл раствора пепсина или желудочного сока. Содержимое первой пробирки кипятят 2 мин и охлаждают под струей воды. Содержимое второй пробирки нейтрализуют раствором NaHCO₃ до щелочной реакции по лакмусу (3-4 капли 10%-ного раствора NaHCO₃). Третью пробирку оставляют без изменения.

2. Во все три пробирки добавляют по маленькому кусочку фибрина или яичного белка. Пробирки выдерживают в термостате при 37˚С 30-45 мин. Затем их вынимают, встряхивают, отмечают видимые изменения белка (растворение, набухание) и проделывают биуретовую реакцию. Положительная биуретовая реакция получается только в третьей пробирке.

Оформление работы. Полученные результаты вносят в таблицу и делают выводы.

№ пробирки	Субстрат	Фермент	Реакция среды	Видимые изменения	Биуретовая реакция	Выводы

К методическим рекомендациям