Так, например, известно, что первый контакт человека с те приводит к выработкиIgM-антител, которая продолжается в течение прим месяца. Эти антитела имеют большую массумолекулярнуи не
Рис. 6.12. Диагностически значимые классы антител и их функции
проникают через гистогемацитарные барьеры, поэтому обнару преимущественно в сыворотке крови. -ОбнаружениеантителсвидетельствуеIgM развитиипервичного иммунного ответа..
Уже со второй недели от начала контакта с патогеном в кро накапливатьсяIgG-антитела. Вначале они сопутствуют-антителам,IgM а примерн через один месяц-антителаIgM начинают исчезать из кровотока и н приходят -антителаIgG. Привторномпо поступлении антигена в организ вырабатываются уже только-антитела,IgG в связи с чем антителамиих называют
вторичного иммунного ответа.
Вначале способность к прочному взаимодействию-антителс антигеномне оче велика(IgG-антитела низкой авидности), но по мере развития инфекционног (точнее, на третьем месяце от его начала) сила связывания значительно возрастает вследствие селекции высоко специфи продуцирующих-лимфоцитов,ихВ т.е. появляютсявысоко авидныеIgG-антитела (рис.
6.13).
61
Рис. 6.13. Динамика выработки- IgGIgM-антител
В соответствии с описанными закономерностями в тех случая установить давность инфицирования определяют не толькосо и IgG-антител, но и авидность-антителIgG.
Такое исследование проводится, например, у беременных при инфицирования токсоплазмами. Токсоплазмоз беременных даже течении создает угрозу инфицирования плода и развития вро токсоплазмоза, но только в том случае, если инфицирование же ходе беременности. Поэтому при обследовании беременной же токсоплазмоз у нее обязательно устанавливаютсяинеIgGтолько антител, но и авидность-антителIgG.В лучаеэтомсналичие-антителIgM или низк авид-ных IgG-антител к токсоплазмам, особенно во II и III три свидетельствует в пользу заражения женщины уже в ходе бер проведения лечебных мероприятий.
Определение уровняIgA-антител имеет значение при исследовании секрето слизистых оболочек, в тех случаях, когда последние служат инфекции.-антителаIgA начинают вырабатываться одновременно с из них поступают в секреты слизистых оболочек. Послекционногоисче агента из организма-антителаIgA еще в течение-4 мес продолжают2 секретироваться, а затем исчезают. Если же микроб продолж организме,-антителаIgA продолжают регистрироваться в секретах особенностью обнаружеантителIgA- в отсутствие клинических проя заболевания или через полгода после их исчезновения счита хронического инфицирования.
Рост в сывороткеIgEкрови-антител к тому или иному антигену, как пра свидетельством развитияIgE-опосредованной аллергии к нему. В инфе практике подобное состояние особенно часто сопутствуетин аллергическим осложнениям (кардит, полиартрит), а также г гельминтозам и сопровождается развитием клиническихваллергическогопризн процесса.
62
Таблица 6.9. Иммунологический метод в диагностике бактериальных
Бактериозы и возбудители |
Серологическая pеакция, |
Особенности постановки |
Положительный результат и способ его оценки |
|
|
назначение |
|
|
|
Брюшной тиф Salmonella typhi |
Сероидентификация |
Определение вида |
Положительная реакция, соответствующая |
|
|
РА |
возбудителя |
титру видовой сыворотки Диагностический |
|
|
|
|
титр 1:200 с О-антигеном при возможности |
|
|
Серодиагностика РА |
В конце первой недели |
дифференцировать текущую инфекцию с |
|
|
Видаля Реакция |
болезни с О- и Н-видо- |
«прививочной» или анамнестической |
|
|
пассивной Vi- |
выми диагностикумами У |
реакцией: О-антитела обнаруживаются в |
|
|
гемагглютинации |
реконвалесцентов и лиц |
разгар болезни, а затем исчезают, Н- |
|
|
(РПГА) |
с подозрением на |
антитела появляются позднее и остаются |
|
|
|
носительство |
на длительный срок Диагностический титр |
|
|
|
|
1:40. Vi-антитела обнаруживаются у |
|
|
|
|
реконвалецентов и носителей брюшного |
|
|
|
|
тифа |
|
Паратиф А Salmonella |
Сероидентификация |
Определение вида |
Положительная реакция, соответствующая |
|
paratyphi A |
РА |
возбудителя |
титру видовой сыворотки Диагностический |
|
Паратиф В Salmonella |
Серодиагностика РА |
В конце первой недели |
титр 1:200 при невысокой чувствительности |
|
schottmuelleri |
и специфичности |
|||
Паратиф C Salmonella |
Видаля РПГА |
болезни с ОН-видовыми |
|
|
|
диагностикумами На 5-6- |
Диагностический титр 1:32 при |
||
hirschfeldii |
|
|||
|
й день болезни с |
относительно высоких чувствительности и |
||
|
|
|||
|
|
видовыми эритроцитар- |
специфичности |
|
|
|
ными диагностикумами |
|
|
Бактериозы и возбудители |
Серологическая pеакция, |
Особенности постановки |
Положительный результат и способ его оценки |
|
|
назначение |
|
|
|
Сальмонеллез Salmonella |
Сероидентификация |
Определение групповой |
На первом этапе с помощью сывороток к О- |
|
typhimurium, S. enteritidis, S. |
РА с О-групповыми и |
и видовой |
антигенам определяется групповая |
|
panama, S. infantis, S. newpart, |
Н-видовыми |
принадлежности |
принадлежность сальмо-нел, а затем |
|
S. agona, S. derby, S. london и |
сыворотками |
сальмонелл, выделенных |
внутри группы с помощью Н-сывороток - |
|
др. |
|
в чистой культуре С |
вид Диагностический титр 1:32. При |
|
|
Серодиагностика РПГА |
использованием |
получении положительной реакции с |
|
|
|
комплексного и |
комплексным эритроцитарным |
|
|
|
групповых |
диагностикумом ставят реакции с |
|
|
|
диагностикумов |
отдельными групповыми О- |
|
|
|
|
диагностикумами |
|
Шигеллез Shigella dysenteriae, |
Сероиндикация |
Обнаружение видов |
Экспресс-диагностика шигеллеза |
|
Sh. flexneri, Sh. boydii, Sh. |
|
шигелл |
Положительная реакция, соответствующая |
|
sonnei |
РИФ |
|
титру видовой сыворотки Диагностический |
|
|
Сероидентификация |
Определение вида |
титр 1:160, вспомогательный метод |
|
|
шигелл |
диагностики |
||
|
РА |
|
|
|
|
|
Обнаружение видоспеци- |
|
|
|
Серодиагностика |
фических антител |
|
|
|
РПГА |
|
|
|
|
РСК |
|
|
|
Эшерихиоз Escherichia coli |
Сероидентификация |
Реакция на стекле с |
Определение видовой принадлежности |
|
|
Реакция агглютинации |
комплексной |
возбудителя Определение групповой |
|
энтеротокси-генные (О6, 8, |
Серодиагностика |
эшерихиозной ОК- |
принадлежности кишечной палочки |
|
15, 20, 25, 27, 63, 78, 80, 85, |
|
сывороткой, развернутая |
Определение в рамках групповой |
|
115, 128, 139, 148, 153, 159, |
РА, |
реакция живой культуры |
принадлежности патогенного серовара |
|
168), |
РПГА, |
с групповой |
кишечной палочки по О-антигену |
|
|
|
|
||
энтеропато-генные (О18, 44, |
ИФА |
ОК-сывороткой, |
Нарастание титра антител через 7-10 сут |
|
55, 111, 112, 114, |
развернутая реакция |
не менее чем в 4 раза Наличие IgM |
||
|
||||
|
|
гретой культуры (без К- |
антител свидетельствует об острой |
|
119, |
|
антигена) с типовыми О- |
инфекции, наличие IgG антител - о |
|
|
|
сыворотками В парных |
бактерионосительстве |
|
125-128, 142), |
|
сыворотках Определение |
|
|
|
|
IgM и IgG антител к |
|
|
энтероин-вазивные (О28, |
|
эшерихиям |
|
|
29, 124, |
|
|
|
|
136, 143, 144, |
|
|
|
|
152, 164, 167), |
|
|
|
|
энтерогемор-рагические |
|
|
|
|
(О157, 126, 111) |
|
|
|
|
Листериоз Listeria |
Серодиагностика РА, |
Антитела |
Вспомогательный метод. Диагностический |
|
|
РПГА, РСК |
вырабатываются на |
титр РА 1:250 |
|
monocytogenes |
|
невысоком уровне |
|
|
Иерсиниоз |
Серодиагностика |
В парных сыворотках |
Нарастание титра антител через 7-10 сут |
|
|
|
(первый забор 1-3 сут) |
не менее чем в 4 раза |
|
Yersinia |
РПГА |
|
|
|
enterocolitica |
ИФА |
|
|
|
Псевдотуберкулез Yersinia |
Серодиагностика |
В парных сыворотках |
Нарастание титра антител через 7-10 сут |
|
рseu-dotuberculosis |
|
(первый забор 1-3 сут) |
не менее чем в 4 раза |
|
|
РПГА |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
63 |
|
|
ИФА |
|
|
Чума |
|
Сероиндикация |
Обнаружение |
Экспресс-диагностика чумы |
|
|
Реакция латекс- |
возбудителя в материале |
Ретроспективный диагноз чумы |
Yersinia pestis |
|
агглютинации |
от больного |
|
|
|
Серодиагностика |
Обнаружение антител к |
|
|
|
|
капсульному антигену |
|
|
|
РПГА |
|
|
Бактериозы |
Серологическая |
Особенности |
Положительный результат |
|
и возбудители |
pеакция, назначение |
постановки |
и способ его оценки |
|
Холера |
Сероиндикация |
0бнаружение холерных |
Экспресс-диагностика холеры |
|
Vibrio cholerae |
РИФ, реакция иммо- |
вибрионов в материале |
0пределение принадлежности |
|
|
|
|
от |
|
серогрупп |
билизации холерных |
больного |
вибрионов к группе возбудителей |
|
01 и О139 |
вибрионов видовыми |
Реакция на стекле |
холеры. |
|
Биовары |
сыворотками |
с холерными |
0пределение |
|
|
|
|
сыворотками |
|
серогруппы 01 |
Сероидентификация |
0-1, |
серовара V. cholerae 01 |
|
Vibrio cholerae |
Реакция |
0-139 и RO; |
0пределение вида и биоваров |
|
cholerae, |
агглютинации |
реакция на стекле |
возбудителей при положительной |
|
Vibrio cholerae |
Серодиагностика |
с сыворотками Огава |
реакции не менее чем в 1/2 титра |
|
El-tor |
РПГА, |
и Инаба; |
сыворотки |
|
Серовары |
РНИФ |
развернутая реакция |
Вспомогательный метод. |
|
серогруппы01: |
|
|
с холерными |
Нарастание титра антител через |
|
|
|
сыворотками |
|
0гава |
|
|
0-1, 0-139 и RO |
6-8 сут не менее чем в 4 раза |
|
|
|
|
|
Инаба, |
|
|
В парных сыворотках |
|
|
|
|
|
|
Гикошима |
|
|
(забор первой |
|
|
|
|
сыворотки - на 3-й день |
|
|
|
|
болезни) |
|
Бруцеллез |
Сероидентификация |
0пределение |
Положительная реакция, соответ- |
|
|
|
|
принадлеж- |
|
Brucella |
РА |
ности к роду бруцелл |
ствующая титру диагностической |
|
melitensis, |
Серодиагностика |
Через неделю от начала |
сыворотки |
|
B. abortus и др. |
РА Райта |
заболевания |
Диагностический титр 1:200 в тече- |
|
|
РА Хеддльсона, |
Через неделю от начала |
ние нескольких лет |
|
|
|
|
|
|
|
РПГА, РСК, РИФ |
заболевания |
Положительная реакция в течение |
|
|
|
|
|
|
|
Реакция Кумбса |
По окончании острого |
заболевания |
|
|
|
|
|
|
|
Аллергодиагностика |
периода |
Индикация неполных антител |
|
|
|
|
|
|
|
Проба Бюрне |
По окончании острого |
у реконвалесцентов и при ретроспективном |
|
|
|
|
периода |
диагнозе Положительная проба у |
|
|
|
|
реконвалесцентов, вакцинированных и при |
|
|
|
|
ретроспективном диагнозе |
Туляремия |
Серодиагностика |
На второй неделе забо- |
Диагностический титр РА 1:100 |
|
Francisella |
РА, РПГА |
левания |
Экспресс-диагностика туляремии |
|
tularensis |
Кровяно-капельная |
Начиная с 3-5 дня забо- |
Диагноз текущей инфекции и ретро- |
|
|
проба |
левания |
спективный диагноз |
|
|
|
|
|
|
|
Аллергодиагностика |
с 3-5 дня заболевания |
|
|
|
|
|
|
|
|
Проба с тулярином |
|
|
|
|
|
|
|
|
Сибирская язва |
Сероиндикация |
0бнаружение воз- |
Кольцо преципитата при наличии |
|
Bacillus antracis |
Реакция преципита- |
будителя на объектах |
спор возбудителя |
|
|
ции по Асколи, |
внешней среды, |
Экспресс-диагностика сибирской |
|
|
|
|
|
|
|
РИФ |
в материале от |
язвы |
|
|
|
|
больного |
|
|
Серодиагностика |
На второй неделе забо- |
Ретроспективный диагноз сибирской |
|
|
|
|
|
|
|
РПГА, ИФА |
левания |
язвы |
|
|
|
|
|
|
|
Аллергодиаг- |
Начиная с 3-5 дня забо- |
Диагноз текущей инфекции |
|
|
|
|
|
|
|
ностика |
левания |
и ретроспективный диагноз |
|
|
|
|
|
|
|
Внутрикожная проба |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
с антраксином |
|
|
|
|
|
|
|
|
Стафилокок- |
Серодиагностика |
В парных сыворотках с |
Нарастание титра антител через |
|
ковая |
РПГА |
использованием аутоан- |
7-10 сут не менее |
|
инфекция |
ИФА |
тигенов |
чем в 4 раза |
|
Staphylococcus |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
aureua |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Бактериозы и возбудители |
Серологическая pеакция, |
Особенности постановки |
Положительный результат и способ его оценки |
|
|
назначение |
|
|
|
Стрептококковая |
Сероиндикация Реакция |
Обнаружение антигенов |
Образование преципитата свидетельствует |
|
инфекция |
преципитации |
стрептококка в моче |
о наличии стрептококка в биологическом |
|
|
|
|
больного с помощью |
материале и его принадлежности к |
Streptococcus spp. A, B, |
Серодиагностика РСК |
групповых |
соответствующей группе стрептококков (А, |
|
C, D, F, G |
РН антителами сыворотки |
стрептококковых |
В, С, D, F, G) Нарастание титра антител |
|
|
сывороток |
через 10-14 сут. не менее чем в 4 раза |
||
|
крови больного |
|||
|
|
Выше 250 АЕБЮ - острая стрептококковая |
||
|
гемолитической активности |
|
||
|
|
инфекция Отсутствие снижения в течение 6 |
||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
64 |
|
|
стрептококкового |
Исследование парных |
|
мес от начала заболевания - возможность |
|
|
|
стрептолизина-О (АСЛО) |
сывороток |
|
рецидива или осложнений |
|
|
|
|
|
Однократно (7-14 дни |
|
|
|
|
|
|
болезни) В парных |
|
|
|
|
|
|
сыворотках |
|
|
Пневмококковая |
|
Серодиагностика |
В парных сыворотках |
|
Нарастание титра антител через 7-10 сут не |
|
инфекция Streptococcus |
|
|
|
(первый забор крови - |
|
менее чем в 4 раза |
pneumoniae |
|
РПГА |
при поступлении в |
|
|
|
Гемофильная |
|
ИФА |
стационар) |
|
|
|
инфекция Haemophilus |
|
|
|
|
||
|
|
|
|
|
|
|
influenzae |
|
|
|
|
|
|
Легионеллез |
|
|
|
|
|
|
Legionella |
|
|
|
|
|
|
pneumophila |
|
|
|
|
|
|
Дифтерия Corynebacte- |
|
Серодиагностика РПГА |
В парных сыворотках |
|
Нарастание титра антител через 7-10 сут не |
|
rium diphtheriae |
|
|
|
(первый забор 1-3 сутки) |
|
менее чем в 4 раза |
|
|
ИФА |
|
|
|
|
Менингокок-ковая |
|
Серодиагностика |
В парных сыворотках |
|
Нарастание титра антител через 7-10 сут не |
|
инфекция Neisseria |
|
|
|
(первый забор 1-3 сутки) |
|
менее чем в 4 раза |
meningitidis |
|
РПГА |
|
|
|
|
|
|
ИФА |
|
|
|
|
Лепра |
|
Аллергодиагностика |
Учет результатов через |
|
Диагноз текущей инфекции |
|
|
|
Лепроминовая проба |
2-4 нед |
|
|
|
Mycobacterium leprae |
|
|
|
|
|
|
Столбняк |
|
Сероиндикация РН токсина |
Обнаружение токсина в |
|
Экспресс-диагностика столбняка |
|
|
|
Сероидентификация |
материале от больного |
|
Положительная реакция в случае |
|
Clostridium |
|
Реакция нейтрализации |
Определение вида |
|
соответствия токсина видовой |
|
tetani |
|
токсина |
возбудителя, |
|
антитоксической сыворотке |
|
|
|
|
выделенного в чистой |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
культуре по его токсину |
|
|
Ботулизм Clostridium |
|
Сероиндикация РН токсина, |
Обнаружение токсина в |
|
Экспресс-диагностика ботулизма |
|
botulinum А, В, Е, F |
|
РПГА, ИФА |
материале от больного |
|
Положительная реакция в случае |
|
|
|
|
|
Определение серовара |
|
соответствия токсина типовой |
|
|
Сероидентификация РН |
возбудителя, |
|
антитоксической сыворотке |
|
|
|
токсина, |
выделенного в чистой |
|
|
|
|
|
РПГА, ИФА |
культуре по его токсину |
|
|
|
|
|
|
|
|
||
Возвратный тиф: |
|
Серодиагностика РСК, |
Определение антител в |
|
Вспомогательный метод Диагностика |
|
|
|
|
|
сыворотке крови |
|
текущего заболевания |
эпидемический |
|
реакция нагрузки |
больного |
|
|
|
|
|
спирохеттромбоцитами |
|
|
|
|
Borrelia |
|
|
|
|
|
|
recurrentis |
|
|
|
|
|
|
эндемический |
|
|
|
|
|
|
B. duttoni, |
|
|
|
|
|
|
B. persica |
|
|
|
|
|
|
Бактериозы и возбудители |
|
Серологическая реакция, |
|
Особенности постановки |
|
Положительный результат и способ его оценки |
|
|
назначение |
|
|
|
|
Иксодовые клещевые |
|
Серодиагностика |
|
Определение антител в |
|
Диагностика текущего заболевания |
бор-релиозы Borrelia |
|
|
|
сыворотке крови и |
|
|
burgdorferi, B. afzelii, B. |
|
РНИФ, |
|
синовиальной жидкости |
|
|
garinii |
|
ИФА |
|
больного |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Лептоспирозы |
|
Серодиагностика РПГА, |
|
В парных сыворотках (в |
|
Нарастание титра антител не менее чем в |
|
|
|
|
разгар заболеания и в |
|
4 раза |
Leptospira |
|
pеакция агглютинации и |
|
период реконвалесцен- |
|
|
interrogate |
|
лизиса |
|
ции) |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Эрлихиозы Erlichia |
|
Серодиагностика РНИФ |
|
В парных сыворотках с |
|
Диагностика заболевания на 2-й неделе с |
chaffeensis, Е. cams |
|
|
|
определением IgM и IgG |
|
подтверждением на 4-6-й неделе |
|
|
|
|
антител |
|
|
Эпидемический сыпной |
|
Серодиагностика |
|
Определение видовых |
|
Диагностика заболевания с |
тиф Rickettsia prowazekii |
|
|
|
антител в сыворотке крови |
|
идентификацией возбудителя |
|
|
РА, |
|
больного |
|
|
|
|
РСК, |
|
|
|
|
|
|
РТГА, |
|
|
|
|
Эндемический |
|
РНИФ, ИФА |
|
|
|
|
крысиныйсыпной тиф R. |
|
|
|
|
|
|
typhi |
|
|
|
|
|
|
Марсельская |
|
|
|
|
|
|
лихорадка R. oonorii |
|
|
|
|
|
|
Астраханская |
|
|
|
|
|
|
риккетсиозная- |
|
|
|
|
|
|
лихорадка R. conori |
|
|
|
|
|
|
Ку-лихорадка R. burneti |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
65 |
|
Орнитоз |
Сероиндикация РИФ |
Обнаружение хламидий в |
Экспресс-диагностика хдамидиоза IgM- |
|
|
материале от больного |
антитела свидетельствует о начальном |
Chlamydia |
ИФА |
Неоднократное опреде- |
этапе и активности |
psittaci |
|
|
|
Урогенитальный |
Серодиагностика |
ление IgM, IgG и IgA |
хламидиоза. Через 2-3 нед появляются |
хламидиоз, трахома, |
|
антител |
IgG-антитела в высоком титре (1:4000). |
|
ИФА РНИФ |
|
1дА антител свидетельствует о тяжелом |
венерический |
|
Использование антигенов |
течении заболевания и выраженном |
лимфогранулематоз и |
|
хламидий различных |
аутоиммунном процессе (синдром |
др. Chlamydia trachomatis |
|
серотипов |
Рейтера). Отсутствие антител не означает |
Пневмония, бронхиты и |
|
|
отсутствия хламидиоза (50%) |
др. Chlamydia pneumoniae |
|
|
Обнаружение антител к хламидиям |
|
|
|
различныхсеротипов |
Микоплазмоз |
Сероиндикация |
Обнаружение микоплазм в |
Экспресс-диагностика микоплаз-менной |
|
|
лаважной жидкости, |
инфекции Нарастание титра антител через |
Mycoplasma |
РИФ |
соскобах со слизистых |
10-14 сут не менее чем в 4 раза |
pneumoniae, |
Серодиагностика |
оболочек |
|
|
|
||
Mycoplasma |
ИФА, РСК РПГА |
В парных сыворотках |
|
|
|
||
hominis |
|
|
|
Уреаплазмоз |
|
(первый забор 1-6 сут) |
|
Ureaplasma |
|
|
|
urealitica |
|
|
|
Таблица 6.10. Иммунологический метод в диагностике протозоонозн инфекций
Протозооз и возбудитель |
Серологическая реакция и |
Особенности |
Положительный результат и способ его оценки |
|
ее назначение |
постановки |
|
Амебиаз |
Серодиагностика |
В парных |
Нарастание титра антител через 10-14 сут не |
|
|
сыворотках |
менее чем в 4 раза при внекишечном амебиазе и |
Entamoeba |
РПГА, |
|
наличии тканевых форм |
hystolitica |
ИФА |
|
|
Токсоплазмоз Toxoplasma |
Серодиагностика |
В парных |
Нарастание титра антител через 10-14 сут не |
gondii |
|
сыворотках с |
менее чем в 4 раза говорит о наличии |
|
РНИФ ИФА |
определением IgM |
токсоплазмоза, но не носительства. Определение |
|
|
и IgG антител, а |
IgM антител применяется для диагностики острого |
|
|
также авидности |
токсоплазмоза. Антитела IgG появляются в период |
|
|
IgG антител |
реконвалесценции и сохраняются до 10 лет. |
|
|
|
Низкая авидность IgG антител говорит, что от |
|
|
|
момента заражения прошло не более 16 нед, |
|
|
|
высокая авидность - больший срок |
Криптоспоридиоз |
Сероиндикация |
Обнаружение |
Экспресс-диагностика криптоспо-ридиоза |
|
|
ооцист |
|
Cryptosporidium |
РИФ |
возбудителя в |
|
parvum |
ИФА |
кале |
|
|
|
||
Малярия |
Сероиндикация РИФ |
Обнаружение |
Экспресс-диагностика малярия |
|
|
малярийных |
|
Plasmodium vivax, P. |
Серодиагностика РНИФ |
плазмодиев Через |
Диагностический титр 1:80, в случае P. |
malariae, P. ovale, P. |
РПГА |
неделю от начала |
falciparum свидетельствует о свежей инвазии |
falciparum |
заболевания |
|
|
|
ИФА |
|
|
Лямблиоз Lamblia |
Серодиагностика ИФА |
Обнаружение IgM |
Наличие IgM антител свидетельствует о |
intestinalis (Giardia lamblia) |
|
антител |
лямблиозе, но не о носительстве |
Токсокароз Toxocara canis |
Серодиагностика РПГА, |
Обнаружение |
Основной метод диагностики при невозможности |
Шистосомоз Schistosoma |
ИФА |
антител к |
обнаружить возбудителя |
haematobium, S. mansoni |
возбудителю |
|
|
Трихинеллез Trichinella |
|
|
|
spiralis |
|
|
|
Таблица 6.11. Иммунологические методы в диагностике вирусных ин
Вирусная |
Серологические |
|
Характерика маркеров |
Диагностическое значение |
инфекция |
маркеры |
|
|
|
ВГВ |
HBsAg |
|
Поверхностный антиген |
Инфицированность HBV |
|
|
|
вируса гепатита В (HBV) |
|
|
HBeAg |
|
Антиген инфекционно-сти |
Репликация HBV в гепатоцитах, высокая инфекционность крови |
|
|
|
HBV |
|
|
HBcAg |
|
Сердцевинный антиген HBV |
Репликация HBV в гепатоцитах, в крови в свободном виде не |
|
|
|
|
выявляется |
|
анти-НВс (total) |
|
Суммарные антитела к |
Ретроспективная диагностика ГВ, особенно, в отсутствие HBsAG |
|
(НВсАЬ) |
|
HBcAg |
и при неверифици-рованных гепатитах |
|
D анти-НВс |
|
Антитела класса М к |
Ранний сывороточный маркер ГB, указывает на острую |
|
(НВсАЬ IgM) |
|
сердцевинному антигену |
инфекцию, при ХГВ маркирует репликацию HBV и активность |
|
|
|
|
процесса в печени |
Продолжение табл. 6.11 |
|
|
||
|
|
|
|
66 |
Вирусная инфекция |
Серологические |
Характерика маркеров |
Диагностическое значение |
|
маркеры |
|
|
|
Анти-НВе (HBeAb) |
Антитела к антигену |
Начало стадии реконвалесценции (исключение - |
|
|
инфекционности |
мутантная форма HBV) |
|
Анти-HBs (НВбАЬ) |
Протективные антитела |
Перенесенная инфекция или наличие поствакцинальных |
|
|
к поверхностному |
антител; обнаружение антител в первые недели ГВ |
|
|
антигену HBV |
прогнозирует развитие фульминантного гепатита |
Вирусный гепатит D |
IgM анти-HDV |
Антитела класса M к |
Репликация вируса гепатита D (HDV) в организме |
(ВГй) |
|
HDV |
|
|
IgG анти-HDV |
Антитела класса G к |
Возможная инфицированность HDV или перенесенная |
|
|
HDV |
инфекция |
|
HDAg |
Антиген HDV |
Mаркер наличия HDV в организме |
Вирусный гепатит С |
Анти-HCV IgG |
Антитела класса G к |
Возможная инфицированность HCV или перенесенная |
|
|
вирусу гепатита С |
инфекция |
(ВГС) |
|
(HCV) |
|
|
Анти-HCV core IgM |
Антитела класса M к |
Текущая инфекция (острая или хроническая в фазе |
|
|
сердцевинным белкам |
реактивации) |
|
|
HCV |
|
|
Анти-HCV core IgG |
Антитела класса G к |
Инфицированность HCV или перенесенная инфекция |
|
|
сердцевинным белкам |
|
|
|
HCV |
|
|
Анти-HCV NS |
Антитела к |
Хроническая стадия гепатита С (ГС) |
|
|
неструктурным белкам |
|
|
|
HCV |
|
ВГА |
IgM анти-HAV |
Антитела класса M к |
0страя инфекция |
|
|
HAV |
|
|
IgG анти-HAV |
Антитела класса G к |
Перенесенная инфекция, сохраняются пожизненно |
|
|
HAV |
|
ВГЕ |
IgM анти-HEV |
Антитела класса M к |
0страя инфекция |
|
|
HEV |
|
|
IgG анти-HEV |
Антитела класса G к |
Перенесенная инфекция |
|
|
HEV |
|
ВИЧ-инфекция |
р24 |
Сердцевинный белок |
2-8 нед после заражения, маркер развития СПИД |
|
|
ВИЧ |
|
|
IgM anti-p24 |
Антитела класса M к |
Первые месяцы после заражения ВИЧ |
|
|
белку р24 ВИЧ |
|
|
IgG anti-p24 |
Антитела класса G к |
Текущая ВИЧ-инфекция |
|
|
белку р24 ВИЧ |
|
|
IgG anti-gp41 IgG |
Антитела класса G к |
Текущая ВИЧ-инфекция через 3-6 мес после заражения |
|
anti-gp120 IgG anti- |
поверхностным |
|
|
gp160 |
антигенам ВИЧ |
|
Грипп |
Выявление антител в РСК, РТГА с |
Ретроспективный диагноз, нарастание титра антител не |
|
|
использованием парных сывороток |
менее чем в 4 раза |
|
|
Выявление антител в реакции радиального |
Экспресс-диагностика гриппа |
|
|
гемолиза |
|
|
Краснуха |
IgM-, IgG- |
0тсутствие антител |
0тсутствие заболевания в настоящее время и в |
|
|
(ИФА) |
анамнезе |
|
IgM-, IgG+ |
Наличие антител |
Перенесенное заболевание в анамнезе |
|
|
вторичного ответа |
|
|
IgM+, IgG- |
Наличие антител |
Заболевание в ранней стадии, период обострения |
|
|
первичного ответа |
|
|
IgM+, IgG+ |
Наличие антител |
Период обострения |
|
|
первичного и |
|
|
|
вторичного ответа |
|
Вирусная инфекция |
Серологические |
Характерика маркеров |
Диагностическое значение |
|
маркеры |
|
|
Корь |
Определение IgM и IgG антител методом ИФА |
Наличие IgM антител при отсутствии IgG характерно для |
|
|
|
|
острого периода (периода высыпаний) |
|
Определение антител в парных сыворотках |
Ретроспективный диагноз, нарастание титра антител не |
|
|
методами РТГА, РСК |
|
менее чем в 4 раза |
Эпидемический |
Определение IgM и IgG антител методом ИФА |
Наличие IgM антител при отсутствии IgG характерно для |
|
паротит |
|
|
острого периода |
Полиомиелит |
Выявление антител в сыворотке крови в |
Выявление антител со 2-3-й недели заболевания |
|
|
реакции преципитации, РСК |
|
|
Энтеровирус-ная |
ЭВ-специфи-ческие |
Наличие антител |
Выявляются в сроки от первой недели заболевания до 6 |
инфекция |
IgM |
первичного ответа |
мес от начала инфекции |
Вирусные диареи |
Определение антигенов вирусов в кале с |
Экспресс-диагностика вирусных диарей (основной |
|
(рото-вирусная и |
помощью ИФА |
|
метод) |
норовирусная |
Определение видовых антител к вирусам в |
Вспомогательный метод |
|
инфекция |
сыворотке крови с помощью ИФА, РСК |
|
|
ОРВИ |
Выявление видовых антител в РСК, ИФА с |
Нарастание титра антител не менее чем в 4 раза |
|
|
использованием парных сывороток |
|
|
Герпетическая |
Выявление антител к вирусу герпеса простого |
Обострение инфекции при нарастании титра антител не |
|
инфекция |
типа 1 и 2 в парных сыворотках крови методом |
менее чем в 4 раза |
|
|
ИФА |
|
|
Ветряная оспа |
Определение уровня IgM антител к Herpes |
Острый пекриод инфекции при наличии IgM |
|
|
zoster методом ИФА |
|
|
Цитомегало-вирусная |
Определение уровня IgM антител к цитомега- |
Нарастание титра IgM антител при обострении |
|
инфекция (ЦМВИ) |
ловирусу (ЦМВ) |
|
инфекции не ранее 4-й недели заболевания |
|
|
|
|
67
|
методом ИФАс использованием парных |
|
|
сывороток |
|
Инфекционный |
Реакция Гоффа-Бауерра - неспецифическая |
Ориентировочная диагностика инфекционного |
мононукле-оз (вирус |
серологическая реакция гетерогемаг- |
мононуклеоза при диагностическом титре 1:32 |
Эпштейна- |
глютинации эритроцитов лошади со 2-й недели |
|
|
заболевания |
|
Барр) |
Определение уровня IgM и IgG антител к |
Острый пекриод инфекции при наличии IgM |
|
вирусу Эпштейна-Барр методом ИФА |
|
Натуральная оспа |
Выявление антител в РТГА, РСК, РН на |
Ретроспективный диагноз |
|
куриных эмбрионах и в культурах клеток |
|
Геморрагическая |
Выявление видовых антител в РСК, РН, РИА |
Нарастание титра антител не менее чем в 4 раза |
лихорадка |
(радиоиммунный анализ) с парными |
|
|
сыворотками |
|
Клещевой энцефалит |
Определение специфических антител классов |
Наличие антител класса IgM и низкоа-видных IgG |
|
IgM и IgG в сыворотке крови методами ИФА |
является показателем острой инфекции. При отсутствии |
|
или РНИФ, а также авидности IgG |
симптоматики со стороны ЦНС основанием для |
|
|
постановки диагноза является одновременное |
|
|
обнаружение IgM- и IgG-антител либо 4-кратное |
|
|
увеличение концентрации IgG-антител в образце, |
|
|
взятом через 2-3 нед |
Молекулярно-биологические методы
Кмолекулярно-биологическим методам диагностики инфекционных относятся генетический анализ, протеомный анализ, липидны комбинированные методы.
Кметодам генетигеского анализа относятся ПЦР, рестрикционный анализ, молекулярная гибридизация, риботипирование, опосредованна амплификация рибосомальной рибонуклеиновой кислоты (РНК), высокопроизводительное секвенирование.
Наиболее широко в инфекционной практике применяется ПЦР. этого метода представлен на рис. 6.14.
Суть ПЦР заключается в обнаружении в биологическомв матери дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), специфичных для пре иного вида микроорганизмов. ПЦР обладает очень высокой чу позволяет обнаружить даже минимальные количества генетиче поскольку в содержаниедавходитмето его селективная репликация до объема, когда он может быть зарегистрирован специальными не только чувствительна, но и высоко специфична. Первонач качественный вариант. В последующем былличественныйразработанметодко П (ПЦР в режиме реального времени), которая позволяет в усл копий искомого гена в 1 мл исследуемого материала или МЕ) микроорганизма (микробную нагрузку). Этот количественныйнь полезным во врачебной практике при мониторинге больных хр инфекциямихроническими вирусными гепатитами,-инфекциейВИЧи др. ПЦР в настоящее время является основным методом индикации возбу инфекционного больногоезависимон от природы этих возбудителейпростейших, грибов, бактерий и бактериеподобных микроорганизмов, виру используются в зависимости от преимущественной локализаци СМЖ, моча, кал, экссудаты и т.дй. вариантКолчественныПЦР позволяет в 1-2 сут оценить эффективность этиотропной терапии. При поз микробная нагрузка снижается в 100 раз и б-остаетсялее,при нанегат прежнем уровне или возрастает. Уровень микробнойденагрузки случаев оценить тяжесть течения болезни.
68
Рис. 6.14. Принцип и этапы полимеразной цепной реакции
Как правило используются наборы праймеров, соответствующи инфекционного процесса. Например, для диагностики,-мерывируса грамм+ко ков и гр-паммлочек.
Определять наличие-либокакогомикроорганизма в биологическом мат путемрестрикционного анализа. Данный метод основан на применении фер носящих название рестриктаз и позволяющих распознавать ми определенного вида.
Принцип метода заключается в том, что в геноме микробов о строго определенное (генетически детерминированное) число для определенной рестриктазы. В настоящее время из различ и очищеноблее 175 различных рестриктаз, для которых извест Если выделенную из конкретного микроба ДНК обработать опр рестриктазой, то это приведет к образованию строго опреде фрагментов ДНК фиксированного размера.
Размер каждого типа фрагментов можно узнать с помощью элек агарозном геле: мелкие фрагменты перемещаются в геле быст крупные фрагменты, и длина их пробега больше. Гель окраши этидием и фотографируют в ультрафиолетовомучении.Сопоставляяизл полу карту рестрикции ДНК с образцами видовых рестрикционных к принадлежность анализируемого возбудителя к определенномудаже такому, который находится за рамками предположений клиниц
Ещеодин способ генетического- молекулярнаяанализагибридизация, методически основанная на способности двухцепочечной ДНК при повышенн °С) в щелочной среде денатурировать, т.е. расплетаться на понижении температуры вновьа10 восстанавливать°С исходную двухц структуру. Для проведения молекулярной гибридизации иссле расплетают указанным выше способом, одну нить фиксируют н фильтре, который затем помещают в раствор, содержащий. рад
69
Зондом называется одноцепочечная молекула нуклеиновой кис вида микроорганизма, меченная радиоактивными нуклидами, с исследуемую ДНК. Когда создаются условия для -цепочечнойвосстановлен структуры ДНК, зондучае вналичиясл комплементарности между ним ДНК способствует образованию двойной спирали. Это позволя соответствия ДНК определяемого микроорганизма структуре з точно идентифицировать возбудителя заболеванияинфекционного.
Принциприботипирования основан на том, что последовательность ну оснований в оперонах, кодирующих рибосомальную РНК (рРНК) консервативностью, присущей каждому виду бактерий. Эти оп бактериальнойосомехром в нескольких копиях. Количество и лока оперонов рРНК варьируют в ДНК различных видов бактерий. Э производить исследование выделенных штаммов на число копи определять их вид. В настоящее времяние рибпроводтипитсяровав автоматическом режиме в специальных приборах.
Опосредованная транскрипцией амплификация рРНК используется для диагности смешанных инфекций. На первом этапе проводится амплификац рРНК на матрице, выделенной из материалаисследуемогоДНК при помощиДН зависимой -РНКполимеразы. Далее проводится гибридизация накоп рРНК с видоспецифическим олигонуклеотидами, меченными флю ферментами. Исследование проводится в нескольких пробах с видам икробов,м наличие которых предполагается в составе би материала от больного. На заключительном этапе определяют гибридизации методами -люоресценциииммуноф или ИФА. Реакция осуще в автоматическом режиме в установках,озволяюткоторыепроводить одномоментное определение рРНК различных видов бактерий.
Высокопроизводительное секвенирование ампликонов используется для исследова видового состава прокариот в материале от больного путем высококонсервативных участковенома, гчастности гена 16S рРНК. В гена есть консервативные и вариабельные участки. В процес помощью консервативных участов распознают ДНК бактерий, а участки накапливают и идентифицируют в нихи,последовательнхарактерные определенного вида бактерий. Метод позволяет устанавливат бактерий, присутствующих в исследуемом материале.
Все описанные способы генетического анализа обладают очен преимуществом перед остальнымиониметодамипозволяют выявлять даже т микроорганизмов, которые невозможно культивировать ни одн способов.
ПРОТЕОМНЫЙ АНАЛИЗ
Методы молекулярного, в том числе протеомного, анализа на развиваться еще в начале-х гг. прошлого90етиястол.
Исследование совокупного белкового состава (протеома) био осуществляют, в частности, используя соотношение массы от заряду. В настоящее время все чаще для этих целей применя матрично-активированную лазерную десорбцию/ионизацию- МАЛДИ-масс- спектрометрию. При туберкулезе, менингитах различной этиологии инвазивной стрептококковой инфекции протеомные исследован идентификации организмов по совокупностибелковприсущих. им
Принцип масс-спектрометрии и его использование в инфекционной значительно отличаются от любых других диагностических пр
70