Полезные материалы за все 6 курсов / Учебники, методички, pdf / Гистология_для_патологанатомов_М_Л_Линдберг_2022_г_
.pdf
По Вейлю
Выявляет миелинСинее/черное окрашивание
Люксол быстрый голубой
Выявляет миелинСинее окрашивание
Также окрашивает нейропиль в розовый цвет
ПИГМЕНТЫ, МИНЕРАЛЫ И ГРАНУЛЫ
Берлинская лазурь
Выявляет трехвалентное железо (гемосидерин)Синее окрашивание
По Массону—Фонтана
Выявляет меланинЧерное окрашивание
|
|
Гистохимия (специальные окраски) |
41 |
|
|
По фон Коссу
Выявляет кальций и кальцифицированные структурыЧерное окрашивание
Роданин
Выявляет медьРжаво-коричневое окрашивание
ДРУГИЕ МЕТОДЫ ОКРАШИВАНИЯ
Толуидиновый синий
Выявляет тучные клеткиТемно-фиолетовое окрашивание [Гликозаминогликанов
и гранул тучных клеток. — Прим. ред.]
Метенамином серебра по Джонсу
Выявляет базальные мембраны почечных клубочковЧерное окрашивание
Сочетание метенамина серебра и реактива Шиффа
|
|
42 |
Раздел 1. Введение в гистологию и основные методы гистологической техники |
|
|
Иммуногистохимическое исследование нормальных тканей
Matthew R. Lindberg, Laura W. Lamps
ТЕРМИНОЛОГИЯ
Фиксация
Сохранение белков в ткани таким образом, чтобы ткань приобрела устойчивость к дальнейшим изменениям
Подготовка
Процесс обработки ткани таким образом, чтобы можно было изготовить микропрепараты
Иммуногистохимическое окрашивание
Использование меченых антител известной специфичности для обнаружения соответствующего им антигена в тканяхАнтитело метят хромогеном, за счет этого положитель-
ная реакция определяется путем визуализации цветаОбычно используют коричневый или красный хро-
могенТипы окрашивания
ЯдерноеАнтиген экспрессирован только в ядре
Как правило, чистое, четкое окрашивание с небольшим неспецифическим фоновым окрашиванием
ЦитоплазматическоеАнтиген экспрессирован преимущественно в цито-
плазме ± окрашивание цитоплазматической мембраны
МембранноеАнтиген экспрессирован преимущественно в цито-
плазматической мембранеСмешанное
Антиген экспрессирован как в ядре, так и в цитоплазме
Технические аспектыБольшинство антител подходят для исследования в тка-
нях, фиксированных формалином, залитых в парафин и обработанных обычным образомФиксация может снизить антигенные свойства из-
за образования поперечных межмолекулярных связей в белках
Может потребоваться восстановление эпитопов (антигенных детерминант) для демаскирования антигенов с использованием нагрева или обработки ферментами
НАИБОЛЕЕ РАСПРОСТРАНЕННЫЕ КАТЕГОРИИ АНТИТЕЛ ДЛЯ ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
Эпителиальные маркеры
Кератины широкого спектра (например, цитокератин AE1/AE3)
CK7 (легкие, молочные железы, щитовидная железа, слюнные и другие железы)
CK20 (желудочно-кишечный тракт и другие локализации)ЕМАКальретинин
Мышечные маркеры
MSA
SMAДесмин
Коричневый |
Красный |
хромоген |
хромоген |
(Слева) Наиболее распространенный цвет хромогена, используемый в иммуногистохимии, — коричневый. Степень экспрессии (окрашивания) сильно зависит от распределения и количества конкретного антигена. На этом изображении экспрессия панцитокератина указывает на плоскоклеточный эпителий.
(Справа) Красный хромоген чаще всего используют при иммуногистохимическом окрашивании тканей с темными пигментами (меланин), например, кожи
|
|
Иммуногистохимическое исследование нормальных тканей |
43 |
|
|
MиогенинMYOD1
Mиоэпителиальные маркеры
Высокомолекулярные цитокератины (например, CK5/6)
Кальпонинp63
Сосудистые маркеры
CD31
CD34
ERG
D2-40 (эндотелий лимфатических сосудов)
Маркеры нейронов
Белок S-100
SOX10
CD57
NFP
GFAP
Маркеры меланоцитов
Белок S-100SOX10
HMB-45Melan-AТирозиназа
Нейроэндокринные маркеры
CD56Синаптофизин
Хромогранин
Маркеры гемопоэтических/лимфоидных клеток
CD45 (общий лейкоцитарный антиген)CD20 (В-лимфоциты)
CD3, CD4, CD8 (T-лимфоциты)CD68, CD163 (гистиоциты)CD138 (плазматические клетки)
Гормоны
АКТГПаратиреоидный гормон
ИнсулинХорионический гонадотропин (ХГТ)ГлюкагонСоматостатин
Гастрин
ФСГ
ЛГ
Ферменты
ХимотрипсинTрипсин
Муцины
MUC2
MUC3 (тонкая кишка)MUC6 (желудок)
АНТИГЕННЫЕ СВОЙСТВА ОТДЕЛЬНЫХ ОРГАНОВ И ТКАНЕЙ
Жировая ткань
Белок S100Кальретинин
Кора надпочечников
Кальретинин
ИнгибинD2-40Синаптофизин
Мозговое вещество надпочечников
Синаптофизин
ХромогранинCD56
Мочевой пузырь (эпителий)
p63
Цитокератины высокого молекулярного веса (например, 34βE12)
GATA3
Головной и спинной мозг
GFAP (астроциты)Синаптофизин (нейроны)
Молочная железа
GATA3
p63, SMA, кальпонин, CK5/6 (миоэпителиальные клетки)
Хрящ
Белок S100
Соединительная ткань
SMAКальпонин
ДесминCD34
Печень
Hep-Par1 (гепатоциты)
Легкие
TTF-1 (пневмоциты)
Мезотелий
Кальретинин
Высокомолекулярные цитокератины (например, CK5/6)
D2-40
WT-1
Нервы
Белок S100NFP
EMA (периневрий)
|
|
44 |
Раздел 1. Введение в гистологию и основные методы гистологической техники |
|
|
Ядерное |
Цитоплазматическое |
окрашивание |
окрашивание |
(Слева) Иммуногистохимическое окрашивание антигенов, экспрессированных в ядре, обычно не сопровождается фоновым окрашиванием и легко поддается интерпретации. Примером антигенов с ядерной экспрессией служат TTF-1, pax-8, миогенин, p63 и GATA3. Цитоплазматическое окрашивание этих антигенов является артифициальным и должно игнорироваться. (Справа) Многие антигены присутствуют только в цитоплазме клеток. Это синаптофизин, хромогранин, десмин и SMA
Мембранное |
Ядерное и цитоплазматическое |
окрашивание |
окрашивание |
(Слева) Некоторые антитела выявляют только антигены на поверхности клеточной мембраны. Классические примеры — CD-антигены, в частности CD99, CD3 и CD20, а также многие другие.
(Справа) Существует несколько антител, которые выявляют антигены как в ядре, так и в цитоплазме. К таким антигенам относятся кальретинин (показано) в мезотелиальных клетках и белок S100 в шванновских клетках
Эпителий |
Мышцы |
(Слева) Эпителий почти любой локализации содержит кератины широкого спектра, в частности панцитокератин и цитокератин AE1/ AE3. Экспрессия обычно выраженная [Цитоплазматическая. —
Прим. ред.], как продемонстрировано на срезе нормальной толстой кишки. (Справа) В мышечных волокнах высокая экспрессия десмина и SMA. Гладкомышечные волокна также экспрессируют SMA и кальпонин. В скелетных мышцах обнаруживают ядерную экспрессию миогенина и MYOD1
|
|
Иммуногистохимическое исследование нормальных тканей |
45 |
|
|
Нерв |
Жировая |
|
ткань |
(Слева) Белок S100 экспрессирован в различных нормальных тканях, включая нервные волокна.
(Справа) Содержание белка S100 также типично для нормальной зрелой жировой ткани. При этом окраска 
кажется скорее мембранной, а не цитоплазматической из-за того, что цитоплазма клеток занята липидами, вытесняющими компоненты цитоплазмы под цитолемму
Окрашивание |
Соединительная |
на гормоны |
ткань |
(Слева) Выявление гормонов включает широкий спектр антител, в частности к АКТГ, ФСГ, ЛГ, СТГ и соматостатину. Представлен пример окрашивания антителами инсулина, позволяющего выделить клетки островка Лангерганса в нормальной поджелудочной железе. (Справа) Соединительная ткань содержит разнообразные фибробластические клетки, часть которых экспрессирует SMA, а другие — CD34. CD34 обычно экспрессируется в эндотелиальных клетках 
Миоэпителиальные |
Миоэпителиальные |
маркеры (СК5/6) |
маркеры (р63) |
(Слева) Маркеры, такие как CK5/6 (рисунок), кальпонин и SMA, позволяют дифференцировать миоэпителиальные или базальные клетки, окружающие нормальные протоки в молочной железе и нормальные ацинусы в простате. Утрата этих клеток в указанных тканях часто происходит при карциноме.
(Справа) Миоэпителиальные или базальные маркеры также могут экспрессироваться в ядрах. В представленном примере экспрессия p63 выявляет базальные клетки 
нормальных ацинусов предстательной железы, в то время как люминальные клетки этот маркер не экспрессируют
|
|
46 |
Раздел 1. Введение в гистологию и основные методы гистологической техники |
|
|
Поджелудочная железа
Синаптофизин, хромогранин, CD56, pax-8 (островки Лангерганса)
Шишковидная железа
Синаптофизин
Гипофиз
Различные гормональные антигены (например, гормон роста, АКТГ)
GFAP (клетки гипофиза)
Простата
PSA
PSAP
p63, высокомолекулярныецитокератины(базальные клетки)
Скелетные мышцы
Миогенин
Десмин
MYOD1MSA
Гладкие мышцы
SMAДесминMSAКальпонин
Щитовидная железа
TTF-1pax-8
TиреоглобулинКальцитонин (C-клетки)
Матка (эндометрий)
pax-8
Иммунофлуоресценция 47
Иммунофлуоресценция
Anthony Chang
ТЕРМИНОЛОГИЯ
Аббревиатуры
Иммунофлуоресценция (МФА — метод флуоресцирующих антител)
Определения
МФА позволяет обнаруживать интересующие антигены с помощью флуоресцентно меченых антител и флуоресцентного микроскопаПрямой МФА
Первичное антитело непосредственно конъюгировано с флуоресцентным красителем для обнаружения с помощью флуоресцентной микроскопии
Обычно используется флуоресцеин изотиоцианат (ФИТЦ)
Непрямой МФАПервичное антитело не конъюгировано с флуорес-
центным красителемТребуется добавление вторичного антитела, конъ-
югированного с флуоресцентным красителем и позволяющего обнаружить первичное антитело с помощью флуоресцентной микроскопии
МЕТОДОЛОГИЯ
Транспортные среды
Михеля или ЗеусаЭти среды должны храниться в холодильнике до их ис-
пользования
После помещения в среду ткань до обработки может храниться при комнатной температуре вплоть до 5 днейДанные среды — сугубо транспортные, они не фикси-
руют ткани
Свежая ткань
Заливка и заморозка ткани при оптимальной температуре для изготовления срезов
Как правило, обеспечивает более высокую чувствительность по сравнению с МФА или ИГХ, которые выполняются с использованием фиксированных формалином срезов ткани
Ткань, фиксированная формалином, залитая парафином
Важный метод сохранения тканей, когда для МФА невозможно использовать свежезамороженную тканьВ целом МФА в ткани, фиксированной формалином, ха-
рактеризуется меньшей чувствительностью по сравнению с исследованием свежезамороженной ткани
Требуется ферментативная обработка ткани для демаскировки антигена
Для обработки ткани используют следующие ферменты:проназа
протеиназа XXIVтрипсинпепсинпротеазапротеиназа K
Биопсия |
Биопсия |
кожи |
почки |
(Слева) Исследование с антителами к цепи α-1 коллагена IV в биопсийном материале кожи. Нормальное выраженное непрерывное окрашивание базальных мембран эпидермиса 
и базальных мембран капилляров 
. (Справа) Исследование с антителами к цепи α-5 коллагена IV. Нормальное выраженное непрерывное линейное окрашивание базальных мембран клубочков
и дистальных канальцев 
, а также капсулы Боумена
|
|
48 |
Раздел 1. Введение в гистологию и основные методы гистологической техники |
|
|
Антитела
Первичные антитела, нередко непосредственно конъюгированные с ФИТЦ
Антитела, используемые в клинической оценке неопухо-
левых биопсий (особенно почек):
IgGIgG1IgG2IgG3IgG4
Исследование экспрессии субклассов IgG в повсе-
дневной практике не требуется
IgAIgM
Компонент системы комплемента С3В норме синтезируется в эпителиальных клетках
проксимальных канальцевКомпонент системы комплемента C1qФибриноген или фибринЛегкая цепь каппа (κ)
Легкая цепь лямбда (λ)Альбумин
Компонент системы комплемента С4d
Исследуют при пересадке аллотрансплантатов, как правило, почек или сердца
Выраженная и диффузная экспрессия в эндотелии капилляров указывает на антитело-опосредованное отторжение трансплантата
В норме экспрессия с картиной зернистого окрашивания в мезангиальных клетках клубочков
α-3 и α-5 цепи коллагена IVХранение препаратов
Внешний свет вызывает обесцвечиваниеХраните микропрепараты в темноте
ИССЛЕДОВАНИЕ КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА
Почка
КлубочкиВ нормальных клубочках отсутствуют иммуноглобули-
ны или компоненты комплементаМезангий
Гранулярное окрашивание C4d не считается патологическим
Содержание C4d методом МФА исследуют в материале аллотрансплантатов почек
Подоциты (висцеральные эпителиальные клетки)
В нормальных подоцитах отсутствуют иммуноглобулины или компоненты системы комплемента
При некоторых патологических состояниях, сопровождающихся протеинурией, можно обнаружить капли резорбированных белковКапли белков имеют сферический вид. Не следует
их путать с иммунными комплексами, которые дают зернистое окрашивание
Базальная мембрана клубочков
В норме выявление цепей α-3 и α-5 коллагена IV дает линейное окрашивание
Отсутствие цепей α-3 и α-5 коллагена IV
Связано с Х-сцепленным вариантом синдрома Альпорта у мужчин
Сегментарное окрашивание цепей α-3 и α-5 коллагена IV
Связана с Х-сцепленным вариантом синдрома Альпорта у женщин
Капсула Боумена
В норме присутствуют цепи α-5 и α-6 коллагена IVКанальцы
С3 синтезируется в цитоплазме эпителиальных клеток проксимальных канальцев
Легкие цепи κ и λ, а также альбумин помогают выявлять капли реабсорбированных белков в цитоплазме эпителиальных клеток проксимальных канальцевЭтот признак встречается при патологических состо-
яниях, сопровождающихся протеинуриейОкрашивание моноклональных легких цепей наблю-
дается при проксимальной тубулопатии легких цепейБазальная мембрана канальцев
В норме экспрессия цепи α-1 коллагена IV в виде линейного окрашивания
В норме экспрессия цепей α-3 и α-5 коллагена IV в дистальных канальцах
АртериолыВ норме экспрессия С3 в виде зернистого окрашива-
ния в эндотелиальных клетках, связанная его продукцией в цитоплазме данных клеток
Клетки интерстициального воспаленияМоноили поликлональная экспрессия κ- и/или α-лег-
ких цепей в цитоплазме
Кожа
В норме в коже отсутствует диагностически значимое содержание иммуноглобулинов или компонентов системы комплементаПатологическое содержание характерно для различных
везикуло-буллезных заболеваний кожиБазальная мембрана эпидермиса
В норме содержит α-1 и α-5 цепи коллагена IV, который определяется в виде линейного окрашиванияОтсутствие экспрессии цепи α-5 коллагена IV
Связано с Х-сцепленным вариантом синдрома Альпорта у мужчин
Сегментарная экспрессия цепи α-5 коллагена IV
Ассоциирована с Х-сцепленным вариантом синдрома Альпорта у женщин
Отсутствие α-3 цепи коллагена IV
Неисключен аутосомный вариант синдрома Альпорта (мутации генов цепей α-3 или α-4 коллагена IV)
Слизистая ротовой полости
В норме в слизистой оболочке полости рта отсутствует диагностически значимое содержание иммуноглобулинов или компонентов системы комплементаПатологическое накопление имеет место при разичных
везикуло-буллезных заболеваниях
Иммунофлуоресценция 49
Клубочек |
Дистальные канальцы |
в норме |
в норме |
(Слева) Нормальное содержание α-3 цепей коллагена IV в виде линейного окрашивания базальных мембран
почечного клубочка. Капсула Боумена 
состоит только из α-5 и α-6 цепей коллагена IV и, соответственно, не окрашена. В соседних базальных мембранах проксимальных канальцев 
отсутствует α-3 цепь коллагена IV.
(Справа) Выраженное накопление α-3 цепей коллагена IV в базальных мембранах канальцев 
в виде линейного окрашивания дистальных канальцев в составе мозгового луча
Синтез С3 |
С3 |
в клетках канальцевого эпителия в норме |
в эндотелиальных клетках |
(Слева) Присутствие С3 в цитоплазме
эпителиальных клеток канальцев подтверждается методом иммунофлуоресценции (МФА) и обусловлено нормальным синтезом С3. Возможно линейное окрашивание С3 в базальных мембранах канальцев (не показано), не имеющее определенного значения. (Справа) С3 содержится в эндотелиальных клетках 
артериол, что служит эффективным внутренним положительным контролем. Гранулярное окрашивание стенок кровеносных сосудов антителами к С3 в сочетании с экспрессией C1q и других иммуноглобулинов может наблюдаться при волчаночном нефрите, соответствуя присутствию иммунных комплексов
С4d |
Альбумин в клетках |
в почечном клубочке |
канальцевого эпителия |
(Слева) Гранулярное окрашивание С4d в мезангиальных клетках 
служит эффективным внутренним контролем и не считается патологическим. C4d в перитубулярных капиллярах (не показано) в биопсийных препаратах трансплантата почки может свидетельствовать об антитело-опосредованном отторжении.
(Справа) МФА позволяет выявить нормальную реабсорбцию альбумина в цитоплазме эпителиальных клеток 
проксимальных канальцев. Количество капель реабсорбируемого белка увеличивается при патологических изменениях, сопровождающихся протеинурией. В этих каплях обнаруживают легкие κ- и λ-цепи
|
|
50 |
Раздел 1. Введение в гистологию и основные методы гистологической техники |
|
|
Нормальная |
Нормальная |
кожа |
кожа |
(Слева) В базальных мембранах эпидермиса 
и капилляров 
биопсийного материала нормальной кожи выражено линейное отложение α-1 цепей коллагена IV.
(Справа) В базальной мембране 
биопсийного материала нормальной кожи выражено линейное отложение α-5 цепей коллагена IV. В некоторых образцах обнаруживают значительное фоновое окрашивание эпидермиса (не показано), которое не следует принимать за базальную мембрану эпидермиса
Биопсия кожи при Х-сцепленном варианте |
Биопсия кожи при Х-сцепленном варианте |
синдрома Альпорта у мужчины |
синдрома Альпорта у женщины |
(Слева) В базальной мембране эпидермиса 
отсутствует накопление α-5 цепей коллагена IV, что служит диагностическим признаком Х-сцепленного варианта синдрома Альпорта (наследственный нефрит). В роговом слое (stratum corneum) 
наблюдается нечеткое окрашивание, что не следует принимать за положительный результат.
(Справа) Сегментарная экспрессия 
α-5 цепей коллагена IV в базальной мембране эпидермиса служит диагностическим признаком синдрома Альпорта у пациентки женского пола
Базальные мембраны |
C4d в аллотрансплантате |
в легком |
сердца |
(Слева) Присутствие IgG в базальных мембранах 
в виде линейного окрашивания у пациента с легочным кровотечением (синдром Гудпасчера) при нефрите, обусловленном антителами к базальным мембранам клубочков. Эпителиальные и капиллярные базальные мембраны в норме неравномерно сливаются, как показано на этом рисунке, однако в нормальном легком отсутствуют отложения IgG. (Справа) Внескольких некротизированных миоцитах 
присутствует С4d, но в капиллярах этот маркер отсутствует, что исключает антителоопосредованное отторжение трансплантата