Экзаменационный билет № _49

1. Иерсинии – возбудители чумы.

Таксономия: Y.pestis вызывает чуму; отдел Gracilicutes, семейство Enterobacteriaceae, род Yersinia. Возбудитель – Yersinia pestis.

Морфологические свойства: грамотрицательные палочки, овоидной формы, окрашиваются биполярно. Подвижны, имеют капсулу, спор не образуют.

Культуральные свойства.

Факультативные анаэробы. Температурный оптимум +25С. Хорошо культивируются на простых питательных средах. Ферментируют большинство углеводов без образования газа. Психофилы - способны менять свой метаболизм в зависимости от температуры и размножаться при низких температурах. Вирулентные штаммы образуют шероховатые (R) колонии, переходные (RS) и сероватые слизистые гладкие авирулентные(S) формы.

Два типа колоний - молодые и зрелые. Молодые с неровными краями. Зрелые колонии крупные, с бурым зернистым центром и неровными краями. На скошенном агаре черед двое суток при +28 С образуют серовато - белый налет, врастающий в среду, на бульоне - нежную поверхностную пленку и хлопковидный осадок.

Биохимические свойства: фенментативная активнсть высокая: ферментация до кислоты ксилозу, синтез плазмокоагулазы, фибринолизина, гемолизина, лецитиназу, сероводород. Рамнозу, мочевину не ферментирует.

Антигенная структура.

Группа белково - полисахаридных и липополисахаридных антигенов: термостабильный соматический О-антиген и термолабильный капсульный V,W антигены. С W-антигеном связывают вирулентность бактерий. Продуцирует факторы патогенности: фибринолизин, плазмокоагулазу, эндотоксин, экзотоксин, капсулу, V,W антигены.

Резистентность: чувствителен к антибиотикам (особенно стрептомицин), нестоек к окружающей среде при высокой температуре.

Патогенные свойства.

Обладает патогенным потенциалом, подавляет функции фагоцитарной системы, подавляет окислительный взрыв в фагоцитах и беспрепятственно в них размножается. Факторы патогенности контролируются плазмидами трех классов. В патогенезе выделяют три основных стадии - лимфогенного заноса, бактеремии, генерализованной септицемии. Имеют адгезины и инвазины, низкомолекулярные протеины (ингибируют бактерицидные факторы), энтеротоксин. Часть факторов контролируется плазмидами вирулентности.

Клинические особенности: Инкубационный период – несколько часов до 8 сут. Различают локальные – кожно-бубонная, бубонная; внешне-диссеминированные – первично-легочная, вторично-легочная и кишечная; генерализованная – первично-септическая, вторично-септическая формы чумы. Региональная лимфоаденопатия, энтероколиты, реактивные артриты, спондилит, лихорадка.

Эпидемиология: Чума - классический природноочаговый зооноз диких животных. Основные носители в природе - сурки, суслики, в городских условиях - крысы. В передаче возбудителя - блохи животных, способные заражать человека.

Иммунитет: клеточно-гуморальный, ограничен по длительности и напряженности.

Микробиологическая диагностика:

Бактериоскопическое исследование. Из исследуе¬мого материала готовят мазки, окрашивают по Граму и водным раствором метиленового синего. Бактерии чумы представляют собой грамотрицательные палочки овоидной формы Бактериологическое исследование. Исследуемый материал за¬севают на чашки с питательным агаром. Посевы инкубируют при 25С. Первичное изучение посевов производят через 10ч. К этому сроку появляются колонии, которые образованы вирулентными R-формами. Мало- и авирулентные бактерии формируют S-формы колоний. Идентификацию чистой культуры проводят по морфологии бак¬териальных клеток, характеру роста, антигенным и биохимиче¬ским свойствам, чувствительности к специфическому фагу и биопробе.

На бульоне бактерии образуют пленку; ферментируют многие сахара до кислоты, индола не образуют, желатин не разжижают. Содержат групповой термостабильный соматиче¬ский антиген и специфический термолабильный капсульный ан¬тиген.

Биопроба. Проводится для выделения чистой культуры из материала, загрязненного посторонней микрофлорой. Наиболее чувствительными лабораторными животными являются морские свинки, которым материал вводят подкожно. Внутрибрюшинно материал вводят в том случае, если он не загрязнен другими бак¬териями. После гибели животных отмечают па¬тологические изменения органов и проводят бактериологическое исследование

Экспресс-методы лабораторной диагностики:

1.Иммунофлюоресцентный метод позволяет обнаружить присутст¬вие возбудителя как в патологическом материале, так и в объ¬ектах окружающей среды (вода, воздух), а также в пищевых продуктах и эктопаразитах. С этой целью используют люмине¬сцентную видоспецифическую противочумную сыворотку, люминесцентные противокапсульную и противосоматическую сыворотку.

2.РПГА - для обнаружения антигенов бактерий в материале с помощью стандартной противочумной сыворотки, антитела которой нагружены на эритроциты.

Лечение: антибиотики –стрептомицин, препараты тетрациклинового ряда.

Профилактика: специфическая профилактика - живая ослабленная чумная вакцина EV. Имеется сухая таблетированная вакцина для перорального применения. Для оценки иммунитета к чуме (естественного постинфекционного и вакцинального) может применяться внутрикожная аллергическая проба с пестином.

Чумной бактериофаг – при идентификации Y.pestis.

Чумная сухая вакцина – высушенная живая культура Y.pestis вакцинного штамма EV, используется для профилактики чумы.

2. Фенотипическая изменчивость, сущность, формы, практическое значение. Роль экологии.

Фенотипическая изменчивость. Проявление наследуемых морфологических признаков и физиологических процессов у индивидуумов называется фенотипом. Различия по фенотипу между микроорг. одинак. по генотипу наз. модификациями.

3. Неполные (блокирующие) антитела и их определение в реакции торможения связывания комплемента, сущность, техника, особенности учета.

Различают три вида антител: полные, неполные агглютинирующие и неполные блокирующие.

Неполные агглютинирующие и блокирующие антитела (класс G, А) агглютинируют эритроциты в коллоидной среде, в сыворотке, в альбумине. Они появляются позднее, легко проникают через плаценту, поэтому имеют решающее значение в развитии гемолитической болезни.

практической работе в большинстве случаев приходится сталкиваться с наличием в сыворотке неполных агглютинирующих антител. Количество антител выявляют путем определения их титра. Титр антител соответствует наибольшему разведению сыворотки, при котором она еще способна агглютинировать резус-положительные эритроциты (титр антител может быть равен 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 и т. д.).

При очень большом титре (концентрации) неполных антител их не удается обнаружить в неразведенной сыворотке. Они проявляют свои агглютинирующие свойства только после разведения в 5-100 раз. Такие антитела называют «скрытые». Наличие «скрытых» антител свидетельствует о большой степени иммунизации.

Для постановки РСК используют комплемент, содержащийся в крови морских свинок. Гемолитическая активность комплемента на комплексе антиген-антитело его действие проявляется реакцией лизиса антигена, если антиген корпускулярный или не сопровождается никакими видимыми изменениями, если это мелкодисперсные или растворимые антигены. Для учёта результатов РСК вводят вспомогательную ( индикаторную) гемолитическую систему. Она состоит из взвеси эритроцитов баранов в изотоническом растворе хлорида натрия и гемолотической сыворотки кролика, полученной путём его иммунизации упомянутыми эритроцитами.

Приготовление и титрование ингредиентов.

Титрование комплемента. Проводят с помощью реакции имунного гемолиза. Для этого свежую сыворотку морской свинки разводят изотоническим раствором хлорида натрия от 1:10 до 1:40. К 0,2мл каждого разведения комплемента добавляют по 0,4 мл гемолитической смеси (смеси равных объёмов 3% суспензии эритроцитов в изотоническом растворе хлорида натрия и гемолитической сыворотки в разведении, соответствующем е тройному титру). Пробирки выдерживают при 37С и через 30 минут определяют титр комплемента – наибольшее разведение комплемента, которое вызывает полный лизис эритроцитов в присутствии гемолитической сыворотки. Рабочую дозу комплемента рассчитывают, исходя из его титра. Рабочая доза комплемента должна быть выше титра на 25%.

Антигены изготавливаются из взвесей убитых микроорганизмов, из лизатов, полных антигенов, гаптенов, экстратов тканевых липидов.

Взвесь эритроцитов барана получают из дефибринированной крови барана, отмывая эритроциты изотоническим раствором хлорида натрия до получения полной бесцветности и прозрачности надосадочной жидкости и готовят из нах 3% взвесь в изотоническом растворе хлорида натрия.

Гемолитическая сыворотка готовится путм 3-4 кратной внутривенной иммунизации кролика 50% взвесью бараньих эритроцитов и инактивируется при 56С (разрушен комплемент). На этикетке ампул с сывороткой обозначен её титр – максимальной разведение данной сыворотки, которое обеспечивает полный лизис 3% взвеси эритроцитов барана в присутствии комплемента при 37С в течении часа. Для РСК сыворотка в тройном титре.

Постановка основного опыта РСК. Испытываемую и контрольные сыворотки предварительно инактивируют нагреванием при 56С в течение 30 мин. Первая фаза инкубации смеси антигена испытываемой сыворотки и комплемента при 37С в течении 30 мин. При постановке РСК на холоде эту фазу проводят при 0-4С в течение 18-20ч, что повышает чувствительность реакции. После добавления в каждую пробирку по 0,4 мл гемолитической системы пробирки встряхивают и выдерживают 20-30 мин при 37С. Результаты опыта оценивают, отмечая наличие или отсутствие гемолиза во всех пробирках. Реакцию считают положительной при полной задержке гемолиза, когда жидкость в пробирке бесцветна и эритроциты оседают на дне, отрицательной- при полном лизисе эритроцитов, когда жидкость интенсивно окрашена(«лаковая кровь»). Степень задержки гемолиза оценивают в зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка эритроцитов на дно (++++,+++,++,+).

В качестве контроля (2-я,3-я) учитывают реакцию с заведомо положительной и заведомо отрицательной сыворотками;4-я,5-я пробирки – проверка антикомплементарных свойств сыворотки и антигена; в6-й,7-й пробирках контролируются рабочая доза комплемента и качество гемолитической системы.

4. В стационаре хирургической клиники возникла серия гнойных послеоперационных осложнений. Наметить план выявления источника инфекции, выделения возбудителя и связи его с ним.

Проверка инструментария на инфекцию, проверить качество стерилизации и определить возбудитель у больных, если они совпадают по всем факторам, значит, стерилизация была проведена не в должном объеме