Экзаменационный билет № 66

1. Пикорнавирусы. Полиемиелит и его возбудители.

Таксономия.: семейство Picornaviridae, род Enterovims, вид Poliovirus.

Структура. По структуре полиовирусы — ти¬пичные представители рода Enterovirus. РНК-содержащие вирусы.

Морфология: мелкие, просто организованные вирусы, сферической формы, состоят из одноцепочечной РНК и капсида.

Культивирование: Хорошо репродуцируются в первичных и перевариваемых культурах клеток из тканей человека и сопровождается цитопатическим эффектом. В культуре клеток под агаровым покрытием энтеровирусы образуют бляшки.

Антигенные свойства: Различают 3 серотипа внутри вида: 1, 2, 3, не вызывающие перекрес¬тного иммунитета. Все серотипы патогенны дл человека.

Патогенез и клиника. Естественная воспри¬имчивость человека к вирусам полиомиелита высокая. Входными воротами служат слизис¬тые оболочки верхних дыхательных путей и пищеварительного тракта. Первичная репро¬дукция вирусов происходит в лимфатических узлах глоточного кольца и тонкой кишки. Из лимфа¬тической системы вирусы проникают в кровь, а затем в ЦНС, где избирательно поражают клетки передних рогов спинного мозга (двигательные нейроны). Инкубационный период продолжается в среднем 7—14 дней. Различают 3 клинические формы полиомиелита: паралитическую, менингеальную (без параличей), абортивную (легкая форма). Заболевание на¬чинается с повышения температуры тела, об¬щего недомогания, головных болей, рвоты, болей в горле.

Иммунитет. После перенесенной болезни остается пожизненный типоспецифический иммунитет. Иммунитет определяется наличием вируснейтрализующих ан¬тител, среди которых важная роль принадле¬жит местным секреторным антителам слизис¬той оболочки глотки и кишечника (местный иммунитет). Пассивный ес¬тественный иммунитет сохраняется в течение 3—5 недель после рождения ребенка.

Микробиологическая диагностика. Материал для исследования - кал, отделяемое носог¬лотки, при летальных исходах — кусочки го¬ловного и спинного мозга, лимфатические узлы.

Вирусы полиомиелита выделяют путем за¬ражения исследуемым материалом первичных и перевиваемых культур клеток. О реп¬родукции вирусов судят по цитопатическому действию. Идентифицируют вы¬деленный вирус с помощью типоспецифических сывороток в реакции нейтрализации в культуре клеток. Важное значение имеет внутривидовая дифференциация вирусов, ко¬торая позволяет отличить патоген¬ные штаммы от вакцинных штаммов, выделя¬ющихся от людей, иммунизированных живой полиомиелитной вакциной. Различия между штаммами выявляют с помощью ИФА, реакции нейтрализации цитопатического действия вируса в культуре клеток со штаммоспецифической иммунной сывороткой, а также в ПЦР.

Серодиагностика основана на использова¬нии парных сывороток больных с примене¬нием эталонных штаммов вируса в качестве диагностикума. Содержание сывороточных иммуноглобулинов классов IgG, IgA, IgM оп¬ределяют методом радиальной иммунодиффузии по Манчини.

Лечение. Патогенетическое. Применение гомологичного иммуноглобулина для пре¬дупреждения развития паралитических форм ограничено.

Профилак¬тика. Основной мерой профилактики полиомиелита является иммунизация. Первая инактивированная вакцина для профилактики – создавала общий гуморальный иммунитет, не формировала местной резистентности слизистых оболочек ЖКТ, не обеспечивала надежную защиту.

Пероральная живая культуральная вакцина из трех серотипов штаммов. Используют для массовой иммунизации детей, она создает стойкий общий и местный иммунитет.

Неспецифическая профилактика сводится к санитарно-гигиеническим мероприятиям.

2. Микрофлора воды и ее значение для здоровья человека. Принципы санитарно-бактериологического анализа и оценки. Способы очистки воды от микробов. Экология.

Вода — естественная среда .обитания микробов, основная масса которых поступает из поч¬вы, воздуха с оседающей пылью, с отбросами, стоками, мочой и т. д.

К постоянно живущим в воде микроорганизмам относятся Azotobacter, Nitrobacter, Micro-coccus roseus, Pseudomonas fluorescens, Bact. aquatalis, Pro¬teus vulgaris, Spirillum и др. Кроме сапрофитов в воде могут быть возбудители инфекционных болезней животных и чело¬века.

Загрязненность воды определяется по общей микро¬бной обсемененности и обнаружению санитарно-показательных микроорганизмов — ин¬дикаторов наличия выделений человека или животных. В воде регистрируют кишечную палочку, БГКП (колиформные палочки), энте¬рококк, стафилококки;

На основании количественного выявле¬ния этих санитарно-показательных бак¬терий вычисляются индекс БГКП (число БГКП в 1 л воды), перфрингенс-титр, титр энтерококка и т.д. Так, например, титр энтерококка воды — это наименьшее ко¬личество воды, в котором определяется энтерококк.

К бактериям группы кишечной палочки относят грамотрицательные палочки, сбра¬живающие с образованием кислоты и газа лактозу или глюкозу при температуре 37°С в течение 24-48 ч и не обладающие оксидазной активностью. Наиболее часто этот показатель применяют как индикатор фекального за¬грязнения воды. Другой сходный показатель фекального загрязнения — общие колиформные бактерии: грамотрицательные, оксида-заотрицательные палочки, ферментирующие лактозу или маннит (глюкозу) с образованием альдегида, кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 часов. Вместо последнего термина предлагается использовать термин «бактерии семейства Enterobacteriaceae», так как все бактерии этого семейства имеют ин¬дикаторное значение. К бактериям семейства Enterobacteriaceae относятся грамотрицатель¬ные, оксидазаотрицательные палочки, расту¬щие на лактозосодержащих средах типа среды Эндо и ферментирующие глюкозу до кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 ча¬сов; колиформные бактерии (палочки).

При бактериальном загрязнении воды свыше допустимых норм следует провести дополни¬тельное исследование на наличие бактерий — показателей свежего фекального загрязнения. К таким бактериям относят термотолерантные колиформные бактерии, фекальные кишечные палочки, ферментирующие лактозу до кислоты и газа при температуре 44 °С в течение 24 часов и не растущие на нитратной среде. О свежем фекальном загрязнении свидетельствует также выявление энтерококка. На давнее фекальное загрязнение указывают отсутствие БГКП и на¬личие определенного количества клостридш перфрингенс, т. е. наиболее устойчивых споро-образующих бактерий.

В соответствии с нормативными докумен¬тами регламентируются следующие нормати¬вы микробиологических показателей питьевой воды при централизованном водоснабжении:

1. Общее микробное число воды не должно пре¬вышать 100 микробов в 1 мл исследуемой воды;

2. Общие колиформные бактерии должны от¬сутствовать в 100 мл исследуемой воды;

3. Термотолерантные колиформные бактерии должны отсутстовать в 100 мл исследуемой воды;

4. Колифаги не должны определяться в 100 мл исследуемой воды (учет по бляшкооб-разующим единицам);

5. Споры сульфитредуцирующих клостридий не должны определяться в 20 мл исследуемой воды;

6. Цисты лямблий не должны определяться в 50 мл исследуемой воды.

Кроме того, загрязненность воды оценива¬ется по обнаружению патогенных микробов с фекально-оральным механизмом переда¬чи (энтеровирусы, энтеробактерии, холерные вибрионы и др.).

Микрофлора воды. Факторы, влияющие на количество ми¬кробов в воде.

Микрофлора воды отражает микробный состав почвы, так как микроорганизмы, в основном, попадают в воду с ее частичками. В воде формируются определенные биоцено¬зы с преобладанием микроорганизмов, адап¬тировавшихся к условиям местонахождения, освещен¬ности, степени растворимости кислорода и диоксида углерода, содержания органических и минеральных веществ.

В водах пресных водоемов обнаруживаются различные бактерии: палочковидные (псевдо-монады, аэромонады), кокковидные (мик¬рококки) и извитые. Загрязнение воды органи-ческими веществами сопровождается увеличе¬нием анаэробных и аэробных бактерий, а также грибов. Микрофлора воды выполняет роль активного фактора в процессе самоочищения ее от органических отходов, которые утилизируют¬ся микроорганизмами. Вместе с сточными водами попадают представители нормальной микрофлоры человека и животных (кишечная палочка, цитробактер, энтеробактер, энтеро¬кокки, клостридии) и возбудители кишечных инфекций (брюшного тифа, паратифов, дизен¬терии, холеры, лептоспироза, энтеровирусных инфекций). Таким образом, вода является фактором передачи возбудителей многих инфек¬ционных заболеваний. Некоторые возбудители могут даже размножаться в воде (холерный виб¬рион, легионеллы).

Микрофлора воды океанов и морей также содержит различные микроорганизмы, в том числе светящиеся и галофильные вибрионы,

поражающие рыб, при употреблении которых в пищу раз¬вивается пищевая токсикоинфекция.

Вирусы, циркулирующие в сточной воде, методы индикации.

В водах обнаруживаются различные бактерии: палочковидные (псевдо¬монады, аэромонады), кокковидные (мик¬рококки) и извитые. Загрязнение воды органи¬ческими веществами сопровождается увеличе¬нием анаэробных и аэробных бактерий, а также грибов. Вместе с сточными водами попадают представители нормальной микрофлоры человека и животных (кишечная палочка, цитробактер, энтеробактер, энтеро¬кокки, клостридии) и возбудители кишечных инфекций (брюшного тифа, паратифов, дизен¬терии, холеры, лептоспироза, энтеровирусных инфекций). Некоторые возбудители могут даже размножаться в воде (холерный виб¬рион, легионеллы).

Индикация: на основе цитопатического действия (ЦПД) вирусов, образования бляшек, реакции гемагглютинации, гемадсорбции.

Отбор, хранение, транспортировка проб воды для санитарно-микробиологического исследования.

Для отбора проб используют стерильные флаконы емкостью 500 мл с проб¬кой. Предварительно проводят обжигание кранов пламенем горя¬щего тампона, смоченного спиртом, и спускают воду в течение 10— 15 мин при полностью открытом кране. Бумажный колпачок с пробкой снимают с флакона непосредственно перед ее запол¬нением, не касаясь руками горлышка флакона и пробки.

Пробы воды очищенной, используемой для приготовления ле¬карственных форм отбирают в количестве 500 мл в стерильные бутылки, за¬крытые ватными пробками и бумажными колпачками. Пробы от¬бирают из бюретки, у которой предварительно обжигают кончик с помощью ватного тампона, смоченного спиртом.

Пробы воды очищенной для приготовления инъекционных ра¬створов и глазных капель отбирают в стерильные флаконы в количестве 20 мл.

Исследование питьевой воды на присутствие возбуди¬телей брюшного тифа, холеры и лептоспирозов.

В воде регистрируют кишечную палочку, БГКП (колиформные палочки).

К бактериям группы кишечной палочки относят грамотрицательные палочки, сбра-живающие с образованием кислоты и газа лактозу или глюкозу. Этот показатель применяют как индикатор фекального загрязнения воды. Колиформные бактерии, фекальные кишечные палочки – показатели свежего фекального загрязнения.

Определение колиформных бактерий. Общие колиформные бактерии — это Гр- аспорогенные палочки, не обладающие оксидазной активностью и сбраживающие лактозу с образовани¬ем кислоты и газа. Их обнаружение свидетельствует о свежем фекальном загрязнении воды.

Общие колиформные бактерии должны отсутствовать в 100 мл. воды.

Показатели качества воды: микробное число, коли-индекс.

Общее микробное число— коли¬чество аэробных и факультативно-анаэробных бак¬терий в 1 мл воды — определяют у всех видов воды. Исследуемую воду вносят по 1 мл в две стерильные чашки Петри и заливают питательным агаром. Результат вычисляют путем суммирования среднего ариф¬метического числа бактерий, дрожжевых и плесневых грибов.

ОМЧ не должно превышать 100 микробов в 1 мл. воды.

Коли – индекс – измеряется количеством БГКП, содержащихся в 1 л. исследуемой воды.

Определение колиформных бактерий. Общие колиформные бактерии — это Гр- аспорогенные палочки, не обладающие оксидазной активностью и сбраживающие лактозу с образовани¬ем кислоты и газа. Их обнаружение свидетельствует о свежем фекальном загрязнении воды.

Общие колиформные бактерии должны отсутствовать в 100 мл. воды.

Определение колифагов. Присутствие колифагов (бактериофа¬гов, паразитирующих на Е. coli) определяют в воде поверхност¬ных источников и питьевой воде, в сточных водах. Исследование проводят методом агаровых слоев. При наличии колифагов обра¬зуются прозрачные бляшки.

Колифаги не должны определяться в 100 мл. воды.

Методы санитарно-бактериологического исследования воды.

В воде регистрируют кишечную палочку, БГКП (колиформные палочки), энте¬рококк, стафилококки. На основании количественного выявле¬ния этих санитарно-показательных бак¬терий вычисляются индекс БГКП (число БГКП в 1 л воды), титр энтерококка.

Общее микробное число— коли¬чество аэробных и факультативно-анаэробных бак¬терий в 1 мл воды — определяют у всех видов воды. Исследуемую воду вносят по 1 мл в две стерильные чашки Петри и заливают питательным агаром. Результат вычисляют путем суммирования среднего ариф¬метического числа бактерий, дрожжевых и плесневых грибов.

Определение колиформных бактерий. Общие колиформные бактерии — это Гр- аспорогенные палочки, не обладающие оксидазной активностью и сбраживающие лактозу с образовани¬ем кислоты и газа. Их обнаружение свидетельствует о свежем фекальном загрязнении воды.

Определение колифагов. Присутствие колифагов (бактериофа¬гов, паразитирующих на Е. coli) определяют в воде поверхност¬ных источников и питьевой воде, в сточных водах. Исследование проводят методом агаровых слоев. При наличии колифагов обра¬зуются прозрачные бляшки.

Определение спор сульфитредуцирующих клостридий. Присутствие спор клостридий определяют в воде для оценки эффективности работы сооружений по подготовке питье¬вой воды. В результате прораста¬ния спор, размножения клостридий и восстановления ими суль-фита образуется сульфид железа, который придает среде черный цвет.

3. Антигены их виды и материальная основа, функции, определение. Назначение в практической медицине вакцин, диагностикумов, аллергенов.

Антиген – это биополимер органической природы, генетически чужеродный для макроорганизма, который при попадании в последний распознаётся его иммунной системой и вызывает иммунные реакции, направленные на его устранение.

Антигены обладают рядом характерных свойств: антигенностью, специфичностью и иммуногенностью.

Антигенность. Под антигенностью понимают потенциаль¬ную способность молекулы антигена акти¬вировать компоненты иммунной системы и специфически взаимодействовать с фактора¬ми иммунитета (антитела, клон эффекторных лимфоцитов). Иными словами, антиген дол¬жен выступать специфическим раздражителем по отношению к иммунокомпетентным клет¬кам. При этом взаимодействие компоненты иммунной системы происходит не со всей молекулой одновременно, а только с ее не¬большим участком, который получил название «антигенная детерминанта», или «эпитоп».

Чужеродность является обязательным усло¬вием для реализации антигенности. По этому критерию система приобретенного иммунитета дифференцирует потенциально опасные объ¬екты биологического мира, синтезированные с чужеродной генетической матрицы. Понятие «чужеродность» относительное, так как имму-нокомпетентные клетки не способны напря¬мую анализировать чужеродный генетический код. Они воспринимают лишь опосредованную информацию, которая, как в зеркале, отражена в молекулярной структуре вещества.

Иммуногенность — потенциальная способ¬ность антигена вызывать по отношению к себе в макроорганизме специфическую за¬щитную реакцию. Степень иммуногенности зависит от ряда факторов, которые можно объединить в три группы: 1. Молекулярные особенности антигена; 2. Клиренс антигена в организме; 3. Реактивность макроорганизма.

К первой группе факторов отнесены природа, химический состав, молекулярный вес, струк¬тура и некоторые другие характеристики.

Иммуногенность в значительной степени за¬висит от природы антигена. Важна также оптическая изомерия аминокислот, составляющих молекулу белка. Большое значение имеет размер и молекулярная масса антигена. На степень иммуногенности также оказыва¬ет влияние пространственная структура анти¬гена. Оказалась также существенной стерическая стабильность молекулы антигена. Еще одним важным условием иммуно¬генности является растворимость антигена.

Вторая группа факторов связана с динамикой поступления антигена в организм и его выведе¬ния. Так, хорошо известна зависимость иммуногенности антигена от способа его введения. На иммунный ответ влияет количество пос¬тупающего антигена: чем его больше, тем более выражен иммунный ответ.

Третья группа объединяет факторы, опреде¬ляющие зависимость иммуногенности от со¬стояния макроорганизма. В этой связи на пер¬вый план выступают наследственные факторы.

Специфичностью называют способность ан¬тигена индуцировать иммунный ответ к строго определенному эпитопу. Это свойство обуслов¬лено особенностями формирования иммунно¬го ответа — необходима комплементарность рецепторного аппарата иммунокомпетентных клеток к конкретной антигенной детерминанте. Поэтому специфичность антигена во многом определяется свойствами составляющих его эпитопов. Однако при этом следует учитывать условность границ эпитопов, их структурное разнообразие и гетерогенность клонов антигенреактивных лимфоцитовой специфичности. В результате этого организм на антигенное раз¬дражение всегда отвечает поликлональными им¬мунным ответом.

В настоящее время в лабораториях используются следу¬ющие диагноста кумы.

1. Бактериальный диагностикум сальмонелл тифа. Приме¬няется в реакции агглютинации для обнаружения антител в сыворотке больных.

2. Сальмонеллезные О-диагностикумы содержат О-антигены различных групп сальмонелл (инактивированных 15%-ным раствором глицерина). Применяются для выявления О-аптител при сальмонеллезных инфекциях в реакции агглю¬тинации с сывороткой больных.

3. Сальмонеллезные Н-монодиагностикумы. Исполь¬зуются в реакции агглютинации для определения заболевания в прошлом (анамнестическая реакция агглютинации) и реже с диагностической целью.

4. Vi — брюшнотифозный диагностикум. Применяется в реакции агглютинации при выявлении брюшноти¬фозного бактерионосительства.

5. Единый бруцеллезный диагностикум — взвесь бруцелл (инактивированных фенолом), подкрашенная метиленовым синим. Применяется для определения антител в сыворотках крови больных бруцеллезом людей и животных в реакциях агглютинации Райта и Хеддльсона.

6. Эритроцитарный сальмонеллезный О-диагностикум — взвесь эритроцитов с адсорбированными на них О-антигенами различных групп сальмонелл. Используется для постановки РПГА с сывороткой больного при уточнении клинического диагноза сальмонеллеэной инфекции.

7. Эритроцитарный Vi-диагностикум — эритроциты, сенси¬билизированные очищенным Vi-антигеиом S. typhi, применяет¬ся в РПГА при выявлении брюшнотифозного бактерионоси¬тельства.

8. Гриппозный диагностикум представляет собой аллантоисную жидкость инфицированных вирусом гриппа (типов А, В) куриных эмбрионов и инактивированную мертиолатом или формалином. Диагностикумы необходимы при постановке РТГА с парными сыворотками больных для уточнения кли¬нического диагноза и циркулирующего типа вируса гриппа.

9. Диагностикум вируса клещевого энцефалита получают из суспензии мозга белых мышей, зараженных вирусом кле¬щевого энцефалита. Суспензию подвергают центрифугирова¬нию (для осветлення) и инактивируют химическими вещест¬вами.

Диагностикум используется в РТГА и РСК с сывороткой больных при диагностике заболевания.

4. В весенне-летний период в стационар поступил больной с симптомами энцефалита. Профилактическая вакцинация пациенту, геологу по профессии, не проведена. Работал до заболевания в экспедиции в Уссурийской тайге. Составить план лабораторной диагностики болезни.

Задача №23

Вирус клещевого энцефалита (Flavivirus). Диагностика проводится путем выделения вируса из крови или цереброспинальной жидкости, а также внутренних органов и мозга умерших путем интрацеребрального заражения мышей и культур клеток.

Вирусологический метод: Идентификацию вируса в суспензиях мозга мышей проводят в РТГА, РН и РСК, а в монослое культур клеток – в РИФ.

Серологический метод: Обнаружение антител в парных сыворотках и цереброспинальной жидкости - РСК, РТГА и др.

Экспресс диагностика: обнаружение вирусного АГ в крови с помощью РНГА и ИФА , выявлении IgM на первой неделе заболевания в цереброспинальной жидкости и обнаружении РНК вируса в крови и цереброспинальной жидкости у людей, в клещах и внутренних органах животных с помощью ПЦР,