37_DFU_2.1 / DFU_Dopolnenie_2cr

МЕТОДИКА

Уразівикористанняальтернативного обладнанняможе бути необхідне регулювання інструментальних пара­ метрів.

Перед використанням усі скляні пристосування тала­ бораторне обладнання очищають розчином 10 гlл кис­ лоти азотної Р.

Випробовуваний розчин. Зазначену в окремій статті кількість випробовуваної речовини поміщають у ре-

Корекція увімкн. вимкн. вимкн. вимкн. вимкн. вимкн. фону Швид- л/мін 3 3 3 3 3 3 кість потоку азоту

Величина поглинання холостого розчину автоматич­ но віднімається від величини поглинання, одержаної ДЛЯ випробовуваного розчину.

АРСЕН І РТУТЬ

Визначають вміст арсену та ртуті в порівнянні з роз­ чинами порівняння арсену або ртуті відомої концент­ раціїметодом прямого калібрування (2.2.23, Метод /), використовуючи автоматизовану систему безупинно­ го потоку гідридної пари.

Величина поглинання холостого розчину автоматич­ но віднімається від величини поглинання, одержаної ДЛЯ випробовуваного розчину.

Арсен

Розчинзразка. До І 9.0 мл випробовуваного розчину або холостого розчину, що зазначені вище, додають І мл розчину 200 гlлкалію йодиду Р. Витримують випробо­ вуваний розчин при кімнатній температурі протягом 50 хв або при температурі 70 ОС протягом 4 хв.

Кислотнийреагент. Кислотахлористоводнева, вільнавід важкихметалів, Р.

Відновлюючийреагент. Розчин 6 гlл натрію тетрагід­ роборату Р в розчині 5 гlл натрію гідроксиду Р. .

Можуть бути використані інструментальні параметри, зазначені в Табл. 2.4.27.-2.

Таблиця 2.4.27.-2

Ртуть

Розчин зразка. Випробовуваний розчин або холостий розчин, зазначені вище.

Кислотнийреагент. Розчин 5 І 5 гІл кислотихлористо­ водневої, вільноївід важкихметалів, Р.

ВідновлюючиЙреагент. Розчин 10 гlл оловахлорида Рв розведеній кислотіхлористоводневій, вільній від важких металів, Р.

Можуть бути використані інструментальні параметри, зазначені в Табл. 2.4.27.-2. ..оіііі

2.5.МЕТОДИ КІЛЬКІСНОГО ВИЗНАЧЕННЯ

2.5.13. АЛЮМІНІЙ В АДСОРБОВАНИХ ВАКЦИНАХ

Випробовуваний зразок гомогенізують і відповідну його кількість, що містить приблизно від 5 мг до 6 мг алюмінію, поміщають у колбу для спалювання місткістю 50 мл. Додають 1 мл кислоти сірчаної Р, 0. 1 мл кислоти азотної Р і декілька скляних кульок. Розчин нагріваютьдо появи насиченої пари білого ко­ льору. У разі обвуглювання на цій стадії додають ще декілька крапель кислоти азотноїРі продовжують ки­ п'ятитидо зникнення забарвлення. Охолоджують, до­ дають 0.05 млрозчинуметилового оранжевого Рі нейт­ ралізують розчином натрію гідроксиду концентро­ ваним Ру кількості від 6.5 мл до 7 мл. Якщо утвориться осад, його розчиняють, додаючи краплями необхідну кількість кислоти сірчаноїрозведеноїР. Розчин перено­

сять у конічну колбу місткістю 250 мл, промиваючи колбу для спалювання 25 мл води Р. Додають 25.0 мл

0.02 Мрозчину натрію едетату, 1О мл ацетатного бу­ ферного розчину рН 4.4 Р і декілька скляних кульок, і обережно кип'ятять протягом 3 хв. Додають 0. 1 мл роз­ чину nіридилазонафтолу Р і титрують гарячий розчин

0.02 Мрозчиноммідісульфатудо зміни забарвлення на багряно-коричневе.

Паралельно проводять контрольний дослід.

1 мл 0. 02 М розчину натрію едетату відповідає

0.5396 мг АІ.

2.5.14. КАЛЬЦІЙ В АДСОРБОВАНИХ ВАКЦИНАХ

Усі розчини, використовувані для даного випробування мають бути приготованіз використанням води Р.

Вміст кальцію у випробовуваному зразку визначають методом атомно-емісійної спектрометрії (2.2.22, ме­ тод J). Випробовуваний зразок гомогенізують. До 1 .0 мл гомогенізованого зразка додають 0.2 мл кисло­ ти хлористоводневоїрозведеної Р і доводять об'єм роз­ чину водою Рдо 3.0 мл . Вимірюють поглинання одер­ жаного розчину за довжини хвилі 620 нм.

2.5. 15. ФЕНОЛ У ІМУНОСИРОВОТКАХ І ВАКЦИНАХ

Випробовуваний зразок гомогенізують. Підхожий об'єм гомогенізату 'розводять водою Р таким чином, щоб одержаний розчин містив близько 15 мкг/мл фе­ нолу. Готують ряд стандартних розчинів фенолу Р, щО містять відповідно 5 мкг/мл, 10 мкг/мл, 1 5 мкг/мл, 20 мкг/мл і 30 мкг/мл фенолу. До 5 мл випробовувано­ го розчину і кожного стандартного розчину додають

104

по 5 мл буферногорозчинурН 9.О Р, 5 мл розчину аміно­ піразолону Р і 5 мл розчинукалію феріціаніду Р, витри­ мують протягом 1О хв і вимірюють оптичну густину за довжини хвилі 546 нм.

Будують калібрувальну криву і розраховують вміст фенолу у випробовуваному зразку.

2.5. 16. БІЛОК У ПОЛІСАХАРИДНИХ ВАКЦИНАХ

Випробовуванийрозчин. Підбирають мірну колбу підхо­ жого об'єму для приготування розчину, що містить близько 5 мг/мл сухого полісахариду. Вміст контейне­ ра кількісно переносятьу мірну колбу і доводять об'єм розчину водою Рдо позначки. 1 мл одержаного розчи­ ну поміщають у скляну пробірку і додають 0. 15 мл роз­ чину 400 г/л кислоти трихлороцтової Р. Струшують,

витримують протягом 15 хв, центрифугують протягом 10 хв зі швидкістю 5000 об/хв і видаляють надосадову рідину. До осаду додають 0.4 мл О. J Мрозчину натрію гідроксиду .

Стандартні розчини. 0.1ОО г альбуміну бичачого Рроз­ чиняють у 1ОО мл О. J Мрозчину натрію гідроксиду (ос­ новний розчин, що містить 1 г/л білка). 1 мл основно­ го розчину розводять до 20 мл О. J Мрозчином натрію гідроксиду (робочий розчин 1 ; 50 мг/л білка). 1 мл ос­ новного розчину розводять до 4 мл О. J Мрозчином на­ трію гідроксиду (робочий розчин 2; 250 мгjл білка). У шість скляних пробірок поміщають 0. 1О мл, 0.20 мл і 0.40 мл робочого розчину 1 і 0. 15 мл, 0.20 мл і 0.25 мл робочого розчину 2. Об'єм розчину в кожній пробірці доводять О. J Мрозчином натрію гідроксидудо 0.40 мл .

Готують холостий розчин з використанням 0.40 мл

0.1 Мрозчину натрію гідроксиду .

Укожну пробіркудодають по 2 мл мідно-тартратного розчину РЗ, струшують і витримують протягом 1О хв. У кожну пробірку додають по 0.2 мл суміші: фосфорно­ вольфрамовий реактив Р - вода Р ( 1 : 1), приготованої безпосередньо перед використанням. Закривають про­

бірки пробками, перемішують вміст, струшуючи про­ бірки, і витримують у темному місці протягом ЗО хв. Розчини забарвлюються в синій колір, стійкий про­ тягом 60 хв. Якщо необхідно, центрифугуютьдля одер­

жання прозорих розчинів.

Вимірюють оптичну густину (2.2.25) кожного розчи­ ну за довжини хвилі 760 нм, використовуючи як ком­ пенсаційний розчин холостий розчин. Будують каліб­ рувальну криву залежності величин оптичної густини шести стандартних розчинів від вмісту в них білка і за калібрувальною кривою визначають вміст білка у вип­ робовуваному розчині.

2.5.17.НУКЛЕІноВІ КИСЛОТИ В ПОЛІСАХАРИДНИХ ВАКЦИНАХ

Випробовуваний розчин. Використовують мірну колбу підхожого об'єму для приготування розчину, що містить близько 5 мг/мл зневодненого полісахариду.

ДЕРЖАВНА ФАРМАКОПЕЯ УКРАЇН И 1.2

Вміст контейнера кількісно переносять у мірну колбу, і доводять об'єм розчину водою Рдо позначки.

Якщо необхідно, випробовуваний розчин розводятьдо досягнення величини оптичної густини, що відпові­ дає розрізнювальній здатності використовуваного приладу. Вимірюють оптичну густину (2.2.25) за дов­ жини хвилі 260 нм, використовуючи як компенсацій­ ний розчин воду Р.

Величина оптичної густини нуклеїнових кислот з кон­ центрацією 1 гjл задовжини хвилі 260 нм дорівнює 20.

2.5.18. ФОСФОР У ПОЛІСАХАРИДНИХ ВАКЦИНАХ

Випробовуваний розчин. Використовують мірну колбу підхожого об'єму для приготування розчину, що містить близько 5 мгjмл зневодненого полісахариду. Вміст контейнера кількісно переносять у мірну колбу ідоводять об'єм розчинуводою Рдо позначки. Розчин розводятьтаким чином, щоб використовуваний у вип­ робовуванні об'єм (1 мл) даного розчину містив близь­ ко 6 мкг фосфору. 1 .0 мл розведеного розчину поміща­ ють у термостійку пробірку місткістю 1О мл.

Стандартні розчини. 0.2 194 г калію дигідрофосфату Р

розчиняють у 500 мл води Р і одержують розчин, що містить 0. 1 мгjмл фосфору. 5.0 мл одержаного розчи­ нудоводять водою Рдо об'єму 100.0 мл. 0.5 мл, 1 .0 мл і 2.0 мл розведеного розчину поміщають у три тер­ мостійкі пробірки.

Холостий розчин готують у термостійкій пробірці з використанням 2.0 мл води Р.

В усі пробірки додають по 0.2 мл кислоти сірчаної Р, і нагрівають у масляній бані при 120 аС протягом 1 год, а потім при 1 60 асдо появи білої пари (приблизно про­ тягом І год). Додають по 0. 1 мл кислотихлорноїР і на­ грівають при 160 ас до знебарвлення розчину (при­ близно протягом 90 хв). Охолоджують і додають у кожну пробірку по 4 мл води Р і по 4 мл амонію моліб­ датуреактиву Р. Нагрівають на водяній бані при 37 ас протягом 90 хв і охолоджують. Доводятьоб'єм водою Р до 10.0 мл. Синій колір забарвлення стійкий протягом декількох годин.

Вимірюють оптичну густину (2.2.25) кожного розчи­ нуза довжини хвилі 820 нм, використовуючи як ком­ пенсаційний розчин холостий розчин. Затрьома стан­ дартними розчинами будують калібрувальну криву залежності оптичної густини від вмісту фосфору в роз­ чині і визначають вміст фосфору у випробовуваному розчині.

2.5. 19. 0-АЦЕТИЛ У ПОЛІСАХАРИДНИХ ВАКЦИНАХ

Випробовуваний розчин. Використовують мірну колбу підхожого об'єму для приготування розчину, що містить близько 5 мгjмл зневодненого полісахариду.

Вміст контейнера кількісно переносять у мірну колбу

ідоводять об'єм розчину водою Рдо позначки. Одер­ жаний розчин розводять таким чином, щоб викорис­ товувані при проведенні випробування об'єми розве­ деного розчину містили від 30 мкг до 600 мкг ацетилхолін хлориду (О-ацетил). Розведений розчин поміщають у 6 пробірок: у ДВІ пробірки по 0.3 мл, у дві - по 0.5 мл і у дві - по 1 .0 мл (три робочих розчини

ітри коригувальних розчини).

Стандартнірозчини. 0. 1 50 г ацетилхолінхлориду Рроз­ чиняють у 10 мл води Р (основний розчин; 15 гjл аце­ тилхолінхлориду). Безпосередньо перед використан­ ням І мл основного розчину розводять водою Р до 50 мл (розчин І : 300 мкгjмл ацетилхолін хлориду). Без­ посередньо перед використанням І мл основного роз­ чину розводять водою Рдо 25 мл (розчин 2; 600 мкгjмл ацетилхолін хлориду). У дві пробірки поміщають по 0. 1 мл розчину І , у дві - по 0.4 мл розчину І , у дві - по 0.6 мл розчину 2 і в дві - по 1.0 мл розчину 2 (чоти­ ри робочихрозчини і чотири коригувальних розчини).

Готують холостий розчин з використанням 1 мл води Р.

Об'єм розчинів у всіх пробірках доводять водою Р до І мл. До всіх коригувальних розчинів і до холостого розчину додають по 1 .0 мл 4 Мрозчину кислоти хлори­ стоводневої. У кожну пробірку додають по 2.0 мл роз­ чину гідроксиламіну лужного Р. Реакція має протікати точно 2 хв, після чого до кожного з робочих розчинів додають по 1 .0 мл 4 Мрозчину кислотихлористоводне­ вої. У кожну пробіркудодають по 1.0 мл розчину 100 гjл

хлориду заліза ІІІ Р в О. 1 Мрозчині кислоти хлористо­ водневої, закривають пробірки пробками і ретельно струшують для видалення бульбашок.

Вимірюють оптичну густину (2.2.25) кожного розчи­ ну за довжини хвилі 540 нм, використовуючи як ком­ пенсаційний розчин холостий розчин. Для кожного робочого розчину корегують значення оптичної гус­ тини віднімаючи оптичну густину відповідного кори­ гувального розчину. За скорегованими значеннями оптичної густини чотирьох стандартних розчинів бу­ дують калібрувальну криву і визначають вміст ацетил­ холіну хлориду в кожному із узятих об'ємів випробо­ вуваного розчину. Обчислюють середнє з трьох величин.

2.5.20.ГЕКСОЗАМІНИ В ПОЛІСАХАРИДНИХ ВАКЦИНАХ

Випробовуваний розчин. Використовують мірну колбу підхожого об'єму для приготування розчину, шо містить близько 5 мгjмл зневодненого полісахариду. Вміст контейнера кількісно переносять у мірну колбу і доводять об'єм розчину водою Рдо позначки. Одер­ жаний розчин розводять таким чином, щоб викорис­ товувані при проведенні випробування об'єми розве­ деного розчину м істили від 1 25 м кг до 500 м кг

глюкозаміну (гексозаміну). 1 .0 мл розведеного розчи­ ну поміщають у градуйовану пробірку.

Стандартні розчини. 60 мг глюкозаміну гідрохлориду Р

розчиняють у 1 00 мл води Р (основний розчин; 0.500 гlл глюкозаміну), 0.25 мл, 0.50 мл, 0.75 млі 1 .0 мл

розчину поміщають у 4 градуйовані пробірки. Готуютьхолостий розчин з використанням І млводи Р.

Об'єм розчину у кожній пробірці доводять водою Рдо І мл. Укожнупробіркудодають по І мл розчину 292 гlл

кислоти хлористоводневої Р. Пробірки закривають пробками і витримують протягом 1 году водяній бані. Потім охолоджуютьдо кімнатноїтемператури. У кож­ ну пробірку додають по 0.05 мл розчину 5 гlл тимол­ Фталеїну Р у сnирті Р; додають розчин 200 гІл натрію гідроксиду Рдо одержання синього забарвлення. Потім додають 1 Мрозчин кислоти хлористоводневої до зне­ барвлення розчинів. Об'єм розчинуу кожній пробірці доводять водою Рдо 1О мл (нейтралізований гідролізат).

У другу серію градуйованих пробірок місткістю ІО мл поміщають по І мл кожного з нейтралізованих гідролізатів. У кожну пробіркудодають по 1 мл ацетилацето­ нового реактиву (суміш розчинників: ацетилаце­ тон Р - розчин 53 гlл натрію карбонату безводного Р

(І:50); готують безпосередньо перед використанням). Пробірки закривають пробками і витримують протя­ гом 45 хв у водяній бані при температурі 90 ос. Охо­ лоджують до кімнатної температури. У кожну про­ бірку додають по 2.5 мл спирту Р і по 1 .0 мл розчину диметиламінобензальдегіду (безпосередньо перед ви­ користанням 0.8 гдиметuламінобензальдегіду Ррозчи­ няють у 1 5 мл спирту Р і додають 1 5 мл кислотихлори­ стоводневої Р). Об'єм розчину у кожній пробірці доводять до 10 мл спиртом Р. Пробірки закривають пробками, перемішують вміст, перевертаючи про­ бірки, і витримують у темному місці протягом 90 хв.

Вимірюють оптичну густину (2.2.25) кожного розчи­ ну задовжини хвилі 530 нм, використовуючи як ком­ пенсаційний розчин холостий розчин.

За результатами випробування для чотирьох стандарт­ них розчинів з відомим вмістом гексозаміну будують калібрувальну криву і визначають вміст гексозаміну у випробовуваному розчині.

2.5.21. МЕТИЛПЕНТОЗИ В ПОЛІСАХАРИДНИХ ВАКЦИНАХ

Випробовуваний розчин. Використовують мірну колбу підхожого об'єму для приготування розчину, що містить близько 5 мгlмл зневодненого полісахариду. Вміст контейнера кількісно переносять у мірну колбу і доводять об'єм розчину водою Р до позначки. Одер­ жаний розчин розводять таким чином, щоб викорис­ товувані при проведенні випробування об'єми розве­ деного розчину містили від 2 мкг до 20 мкг рамнози (метилпентози). 0.25 мл, 0.50 мл і 1 .0 мл розведеного розчину поміщають у три пробірки.

106

Стандартні розчини. 0. 1ОО г рамнозu Р розчиняють у

100 мл води Р (основний розчин; 1 гlл метилпентози). Безпосередньо перед використанням І мл основного розчину розводять водою Рдо 50 мл (робочий розчин; 20 мгlл метилпентози ). 0. 1 0 мл, 0.25 мл, 0.50 мл, 0,75 мл і 1 .0 мл робочого розчину поміщають у 5 про­ бірок.

Готують холостий розчин з використанням 1 млводи Р.

Об'єм розчину у кожній пробірці доводять водою Рдо І мл. Пробірки поміщають у крижану воду й у кожну пробірку при безупинному перемішуванні додають краплями по 4.5 мл охолодженої суміші розчинників:

вода Р - кислота сірчана Р (1:6). Дають пробіркам на­

грітися до кімнатної температури і поміщають на кілька хвилин у водяну баню. Охолоджуютьдо кімнат­ ноїтемператури. У кожну пробірку додають по 0.1О мл розчину 30 гlл цистеїну гідрохлориду Р, приготовано­ го безпосередньо перед використанням. Струшують і витримують протягом 2 год.

Вимірюють оптичну густину (2.2.25) кожного розчи­ ну за довжини хвиль 396 і 430 нм, використовуючи як компенсаційний розчин холостий розчин.Для кожно­ го розчину розраховують різницю значень оптичної густини, одержаних за зазначених довжин хвиль. Бу­ дуютькалібрувальну кривуза одержанимиданими для п'яти стандартних розчинів з відомим вмістом метил­ пентози і визначають вміст метилпентози в кожному ізузятихоб'ємів випробовуваного розчину. Обчислю­ ють середнє з трьох значень.

2.5.22.УРОНОВІ КИСЛОТИ В ПОЛІСАХАРИДНИХ ВАКЦИНАХ

Випробовуваний розчин. Використовують мірну колбу підхожого об'єму для приготування розчину, що містить близько 5 мгlмл зневодненого полісахариду. Вміст контейнера кількісно переносять у мірну колбу і доводять об'єм розчину водою Рдо позначки. Одер­ жаний розчин розводять таким чином, щоб викорис­ товувані при проведенні випробування об'єми розве­ деного розчину м істили від 4 мкг до 40 мкг глюкуронової кислоти (уронові кислоти). 0.25 мл, 0.50 мл і 1 .0 мл розведеного розчину поміщають у три пробірки.

Стандартнірозчини. 50 мг глюкоронату натрію Р роз­

чиняють у 100 мл води Р (основний розчин; 0.4 гlл глюкуронової кислоти). Безпосередньо перед використанням 5 мл основного розчину розводять водою Рдо 50 мл (робочий розчин; 40 мгlл кислоти глюкуроно­ вой). 0. 1О мл, 0.25 мл, 0.50 мл, 0,75 мл і 1 .0 мл робочо­ го розчину поміщають у 5 пробірок.

Готують холостий розчин з використанням 1 мл води Р.

Об'єм розчину у кожній пробірці доводять водою Рдо 1 мл. Пробірки поміщають у крижану воду й у кожну пробірку при безупинному перемішуванні краплями додають по 5.0 мл бури розчину Р. Пробірки закрива-

ДЕРЖАВНА ФАРМАКОПЕЯ УКРАЇН И 1 . 2

бути використані методики паротворення, якщо зра­ зок нагрівають із використанням лампи (печі), при цьому вода випаровується та вводиться у комірку у струмені сухого інертного газу. Введення твердих зразків у комірку звичайно уникають. Однак, якщо це необхідно, введення таких зразків здійснюється крізь герметичний канал. При цьому має бути прийняті відповідні заходи для виключення потрапляння воло­ ги з повітря, наприклад, шляхом проведення аналізу у захисній камері з рукавичками в атмосфері сухого інер­ тного газу. Проведення аналізу контролюється відпо­ відними електронними пристроями, які також виво­ дять результат на екран дисплея.

МЕТОДИКА

Камери реакційної комірки заповнюють реактивом електролітудля визначеllНЯ водимікрометодом Р відпо­ відно до інструкції виробника приладу і виконують кулонометричнетитрування до кінцевоїточки. Зазна­ чену кількість випробовуваної речовини уводятьу ре­ акційну комірку, перемішують протягом ЗО с, якщо

немає інших зазначень в окремій статті, і зновутитру­ ють до кінцевої точки. При використанні печі зазна­ чену кількістьзразка поміщають у пробіркута нагріва­ ють. П ісля випаровування води зі зразка у титрометричну комірку починають титрування. Зчи­ тують значення із пристрою для виводу інформації та розраховують, якщо необхідно, відсоток або кількість води , що міститься У випробуваній речовині. Для відповідних типів зразката пробопідготовки проводять контрольний дослід.

П ЕРЕВІРКА ПРАВИЛЬНОСТІ

Міждвомапослідовними титруваннями зразкауводять точно зважену таку саму кількість води, як і кількість води у зразку, або у вигляді води Р, або у вигляді стан­ дартногорозчину для визначення води мікрометодом Рі проводять кулонометричне титрування. Відношення, у відсотках, знайденого значення від введеної кількості знаходиться у діапазоні від 97.5 % до 102.5 % при до­ даванні 1 000 мкг HP та у діапазоні від 90.0 % до 1 1 0.0 % при додаванні 100 мкг Н2О.

0.3 мл

1 .0 мл

1000 мл

Випробування проводять для контролю субстанцій, го­ товихлікарськихзасобів або виробів, якіу відповідності до вимог Фармакопеїмають бути стерильними. Однак задовільний результат аналізу означає лише те, що в

.. умовах випробування у зразку не були виявлені життєз­ датні мікроорганізми. ,.Рекомендації з виконання вип­ робування на стерильність наведені наприкінці даної статті.....

ЗАПОБІГАННЯ МІКРОБНОГО ЗАБРУДНЕННЯ

,.Випробування настерильність проводять за асептич­ них умов. З метоюдосягнення такихумов навколишнє середовише має бути адаптованедоспособу проведен­ ня випробування.....Заходи, що вживаються для запо­ бігання мікробного забруднення, не мають чинити впливу на мікроорганізми, які можуть бути виявлені у зразку в результаті випробування. Умови проведення випробування слід регулярно контролювати шляхом аналізу проб, відібраних відповідним чином у робочій зоні, або проведенням інших контрольних заходів

,.(наприклад'....викладених у відповіднихДирективах Європейського Співтовариства і примітках до наста­ нов із GMP).

ЖИВИЛЬНІ СЕРЕДОВИЩА ,.ТА ТЕМПЕРАТУРА ІНКУБАЦІї....

Живильнісередовища для випробуванняможутьготува­ тися, як описано нижче, абоможуть бути використані

,.еквівалентні готові середовища....за умови, що вони

відповідають вимогам заростовими властивостями.

Для проведення випробування настерильність можуть бути використані живильні середовища, наведені ниж­ чe. Рідке тіогліколеве середовище призначене насам­ перед для вирощування анаеробних бактерій, однак ,.воно також підходить....для виділення аеробних бак­ терій. "Соєво-казеїнове середовище призначене для вирощування грибів і аеробних бактерій.....

Допускається використання іншихживильних середо­ вищ за умови, що "вони відповідають вимогам за ро­ стовими властивостями і забезпечують придатність ме­ тодики випробування.....

ристання, його зберігають при температурі від 2 аС до 25 асу стерильному "щільно закупореному....контей­ нері. "Не слід використовувати середовище по закін­ ченні валідованого періоду зберігання.....

Соєво-казеїнове середовище "інкубують при темпе­ ратурі від 20 асдо 25 ас.

Використовувані живильні середовища мають задо­ вольняти наведені нижче вимоги щодо стерильності та ростових властивостей. ....Ви пробування на відповідність живильних середовищ зазначеним вимо­ гам проводять за наведеними нижче методиками пе­ ред випробуванням лікарського засобу на стерильність або одночасно з ним.

Стерильність. " Порції живильних середовищ інкубу­ ють протягом 14 діб.....Після закінчення періоду інку­ бації не має спостерігатися ріст мікроорганізмів.

Ростові властивості. Випробування для аеробів, анае­ робів і грибів. " Випробування проводять для кожної партії готового живильного середовища тадля кожної партіїсередовища, що приготоване з сухого середови­ ща або з окремих інгредієнтів. Рекомендовані тест­ мікроорганізми наведені в Табл. 2.6. 1 .- 1 .

Порціїрідкого тіогліколевого середовища інокулюють невеликою кількістю (не більше 1(10КУО) кожного з таких видів мікроорганізмів: Clostridium sporogenes, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus. Порції соєво-казеїнового середовища інокулюютьневеликою кількістю (не більше 100 КУО) таких видів мікроор­ ганізмів: Aspergillus niger, Bacillus subtilis, Candida albicans. Використовують окремі порції середовища для кожного з тест-мікроорганізмів.....Інкубують не більше трьох діб (для бактерій) і не більше п'яти діб (для грибів).

Робочу культуру, використовувану при випробуванні, одержують таким чином, щоб кількість пересівань, зроблена від вихідного тест-штаму, не перевишувала п'яти.

Якщо після закінчення періоду інкубації у випробо­ вуваномуживильному середовищі спостерігається ви­ paзHo видимий ріст мікроорганізмів, його вважають придатним для подальшого використання.

ПЕРЕВІРКА ПРИДАТНОСТІ МЕТОДИКИ ВИПРОБУВАН НЯ

"Проводять випробування відповідно до методики, описаної нижче у розділі «Випробування лікарського засобу на стерильність» , але з такими змінами.....

Випробування методом мембранної фільтрації. Вміст

контейнера(ів) із випробовуваним зразком пропуска­ ють крізь мембранний фільтр, мембранний фільтр відмивають, додавши до останньої порції стерильно­ го розчинника невелику кількість " (не більше ІОО КУО)....відповідного тест-мікроорганізму.

Випробування методом прямого висівання. Вміст кон­ тейнера(ів) з випробовуваним зразком (для кетгуту і інших шовних матеріалівдля ветеринарії - нитки) вно­ сять у живильне середовище, потім інокулюють сере­ довище невеликою кількістю "(не більше 100 КУО)....

відповідного тест-мікроорганізму.

"Незалежно від методу випробування, використову­ ють мікроорганізми, наведені вище у розділі « Ростові властивості. Випробування для аеробів, анаеробів і грибів» . Позитивний контрольний дослід проводять, як описано вище у розділі « Ростові властивості. Вип­ робування для аеробів, анаеробів і грибів». Усі посіви інкубують не більше п'яти діб.....

Якщо після закінчення періоду інкубаціїу посівах, шо містять лікарський засіб, спостерігається виразно ви­ димий ріст тест-мікроорганізмів, що не поступається за інтенсивністю контролю, то вважають, що випро­ бовуваний лікарський засібабо не має антимікробної активності за умов випробування на стерильність, або антимікробна активність повністю нейтралізується. У подальшому випробування на стерильність проводять без зміни методики.

Якщопісля закінчення періодуінкубаціїу посівах, що містять лікарський засіб, виразно видимий ріст тест­ мікроорганізму відсутній або поступається за інтен­ сивністю контролю, то вважають, що антимікробна активність лікарського засобу за умов випробування на стерильність не була повністю нейтралізована. Змінюють умови випробування так, щоб повністю нейтралізувати антимікробну активність, і повторю­ ють перевірку придатності методики.

Перевірку придатності методики проводять:

Випробування методом мембранної фільтрації. Викорис­ товують мембранні фільтри з номінальним розміром пор не більше 0.45 мкм, здатні ефективно затримува­ ти мікроорганізми. Для водних, розведених спиртових розчинівта розчинів в оліях використовують, наприк­ лад, целюлозно-нітратні мембранні фільтри, адля кон­ центрованих спиртових розчинів - целюлозно-аце­ татні мембранні фільтри. ЯКШО необхідно, длядеяких лікарських засобів, наприклад, для антибіотиків, мо­ жутьбути використані спеціальні мембранні фільтри.

Використовують мембранні фільтри діаметром близь­ ко 50 мм. При використанні мембранних фільтрів іншогодіаметра об'єм розчинника і промивноїрідини змінюють відповідним чином. Фільтраційну установ­ ку і мембранні фільтри стерилізують підхожим спосо­ бом. Конструкція фільтраційної установки має забез­ печувати асептичні умови при внесенні та фільтрації лікарського засобу, а також при видаленні мембран­ ного фільтрадля переносу його у живильне сереД0вище або має дозволяти проводити інкубацію посівів безпосередньо у самій установці після додавання в неї живильного середовища.

Воднірозчини. Перед початком випробування рекомен­ дується пропустити крізь мембранний фільтр невели­ ку кількість підхожого стерильного розчинника, на­ приклад, нейтрального розчину 1 гlл м'ясного або казеїнового пептону з рН 7. 1 ±0.2. Розчинник може містити відповідні нейтралізатори іlабо відповідні інактиватори, наприклад, при випробуванні антибіо­ тиків.

Увесь вміст контейнера(ів) з випробовуваним зразком переносять на мембранний фільтр або мембранні фільтри. '-Якщо необхідно, попередньодоводятьоб'єм зразка відповідним стерильним розчинником до того

Твердірозчинніречовини. Кількістьлікарського засобу, взята для висівання на кожне живильне середовище, має бути не менщою зазначеної в Табл. 2.6. 1 .-2. Зра­ зок розчиняють у підхожому розчиннику, наприклад, нейтральному розчині 1 гlл м'ясного або казеїнового пептону, і проводять випробування, як описано для водних розчинів, використовуючи тип мембранних фільтрів відповідно до вибраного розчинника.

Олії та розчини в оліях. Кількість лікарського засобу, взята для висівання на кожне живильне середовище, має бути не меншою зазначеної в Табл. 2.6. 1 .-2. Оліїта розчини в оліях з досить малою в'язкістю допускаєть­ ся фільтрувати крізь сухий мембранний фільтр без по­ переднього розведення. В'язкі олії, якщо необхідно, розчиняють у підхожому стерильному розчиннику, наприклад, ізопропілміристаті, який не виявляє анти­ мікробної активності за умов випробування. Дають можливість олії проникнути в пори мембранного фільтра самопливом, а потім фільтрують, використо­ вуючи тиск або вакуум. Мембранний фільтр відмива­ ють не менше трьох разів, пропускаючи крізь нього щоразу близько 1ОО мл відповідноїстерильноїпромив­ ної рідини, наприклад, розчину 1 гlл м'ясного або ка­

зеїнового пептону, '-що містить підхожий емульгатор в тій самій кількості, що і при перевірці придатності

методики, наприклад розчин 10 гlл полісорбату-80.....

Мембранний фільтр або мембранні фільтри поміша­ ють у живильне середовище або живильні середови­ ща або вносять живильне середовище у фільтраційну установку й інкубують, як описано для водних роз­ чинів, '-при тих самих значеннях температури протя­ гом того самого часу.....

Мазіта креми. Кількістьлікарського засобу, взятадля висівання на кожне живильне середовище, має бути

не меншою зазначеної в Табл. 2.6. 1 .-2. Мазі на жировій основі і емульсії типу вода/олія допускається розво­ дити ізопропілміристатом "-до 1 %..011якІ,описано вище, використовуючи, якщо необхідно, нагрівання до тем­ ператури не більше 40 Ос. У виняткових випадках до­ пускається нагрівання до температури не більше 44 Ос. Фільтрацію проводять відразу з максимально можли­ вою швидкістю. Далі випробування проводять, якопи­ сано вище для олій та розчинів в оліях.

Випробування методом прямого висівання. Випробову­

ваний лікарський засіб вносять безпосередньо у жи­ вильне середовище у кількості , зазначеній у Табл. 2.6. 1 .-2. Якщо немає інших зазначень в окремій статті, кількість лікарського засобу має становити не більше 1О % від об'єму живильного середовища.

Якщо лікарський засіб має антимікробну активність за умов випробування, її нейтралізують шляхом дода­ вання підхожих нейтралізаторів або збільшення об'єму живильного середовища. Якщодля висівання необхі­ дно використати велику кількість зразка, то краще за­ стосовувати концентроване живильне середовище, приготоване з урахуванням подальшого розведення. Там, де це можливо, концентроване живильне середо­ вище рекомендується додавати безпосередньо у кон­ тейнер з лікарським засобом.

Рідини, що містять олії. ,.-Використовують живильні середовища, до яких додають підхожий емульгатор у тій самій кількості, що і при перевірці придатності методики, наприклад, розчин 10 г/л полісорбату 80...011І

Мазі та креми. Лікарський засіб емульгують у розве­ денні 1 :1Озадопомогою підхожого емульгаторау підхо­ жому стерильному розчиннику, наприклад, нейтраль­ ному розчині 1 г/л м'ясного або казеїнового пептону. Одержану емульсію вносять у живильне середовище, яке не містить емульгатора.

,.-Посіви інкубують не менше 14 діб...оІІІПосіви перегля­ дають кілька разів у період інкубації. Посіви олійних лікарських засобів щодня обережно струшують. Однак якщо тіогліколеве або аналогічне йому середовище за­ стосовується для виявлення анаеробних мікроор­ ганізмів, струшування або перемішування має бути зведенедо мінімумудля того, щоб не порушувати ана­ еробних умов.

Кетгут та інші шовні матеріали для ветеринарії.

Кількість зразка, взята для посіву на кожне живильне середовище, має бути не меншою від зазначеної в Табл. 2.6. 1 .-2. Розкривають упаковку, дотримуючися правил асептики, і переносять по три відрізка, відібрані від початку, середини і кінця нитки, у кожне живильне середовище. Довжина кожного відрізка має становити ЗО см. При випробуванні матеріалів у ка­ сетній упаковці ви·користовують усю нитку. Кожний відрізок нитки вносять у відповідне живильне середо­ вище. Живильне середовище має цілком покривати випробовуваний матеріал (використовують від 20 мл до 1 50 мл живильного середовища).

ОБЛІК І ІНТЕРПРЕТАЦІЯ РЕЗУЛЬТАТІВ

Посіви переглядають періодично під час і після закін­ чення інкубаційного періоду, відмічаючи наявність візуально виявлюваного росту мікроорганізмів. Якщо випробовуваний зразок викликає помутніння живиль­ ного середовища, яке робить неможливим візуальний облік, то через 14 діб після початку інкубації з кожної посудини переносять ,.-порції середовища (не менше 1 мл кожна)..оІІІнові посудини з тим самим живиль­ ним середовищем. Продовжують інкубацію вихідних

і повторних посівів "-протягом не менше четірехдіб...оІІІ

Лікарський засіб витримує випробування на сте­ рильність, якщо при візуальному обліку не виявляєть­ ся ріст мікроорганізмів. При наявності росту мікро­ організмів вважають, щолікарський засіб не витримує випробування на стерильність, якщо не доведена не­ вірогідність результатів випробування, викликана при­ чинами, не пов'язаними з випробовуваним лікарським засобом. Результати випробування можуть бути виз­ нані невірогідними, тільки якщо виконується одна або кілька з умов, наведених нижче:

а) одержані незадовільні результати мікробіологічно­ го контролю навколишнього середовища у ході про­ ведення випробування на стерильність;

Ь) виявлені помилки, допущені в ході випробування;

с) виявлений ріст мікроорганізмів у негативних конт­ ролях;

d)після ідентифікації мікроорганізмів, виділених з лікарського засобу, однозначно визнано, що причи­ ною виникнення росту цього виду або видів є мате­ ріали і/аботехнічні прийоми, використані при вип­ робуванні на стерильність.

Якщо результати випробування визнані невірогідни­ ми, його повторюють на тій самій кількості зразків, що і початкове.

Якщо в результаті повторного випробування не було виявлено росту мікроорганізмів, вважають, що лікарський засіб витримує випробування на сте­ рильність. Якщо в результаті повторного випробуван­ ня було виявлено ріст мікроорганізмів, то лікарський засіб не витримує випробування на стерильність.

КОНТРОЛЬ СТЕРИЛЬНОСТІ ПАРЕНТЕРАЛЬНИХ, ОФТАЛЬМОЛОГІЧНИХ І ІНШИХ НЕІН'ЄКЦІЙ Н ИХ ГОТОВИХ

ЛІКАРСЬКИХ ЗАСОБІВ, ДО ЯКИХ СТАВЛЯТЬСЯ ВИ МОГИ ЩОДО СТЕРИЛЬНОСТІ

При випробуванні методом мембранноїфільтрації ви­ користовують, якщо це можливо, увесь вміст контей­ нера, але не менше кількості , зазначеної в Табл. 2.6. 1 .-2. Якщо необхідно, доводять об'єм зразка до 100 мл відповідним стерильним розчинником, на­ приклад, нейтральним розчином 1 г/л м'ясного або казеїнового пептону.

При випробуванні методом прямого висівання вико­ ристовують кількість зразка, зазначену в Табл. 2.6. 1 .-2,