2.4.14. Визначення кількісного вмісту діючих речовин в коренях ехінацеї пурпурової

2.4.14.1.Кількісне визначення загального вмісту полісахаридів

Кількісне визначення полісахаридів проводили за відомою методикою [28]. 20 г подрібненої сировини переносили у колбу зі шліфом ємністю 250 мл та додавали 200 мл води. Колбу приєднували до зворотного холодильнику та кип’ятили на водяній бані при перемішуванні протягом 30 хв. Екстракцію в колбі проводили ще двічі, використовуючи перший раз 200 мл, другий раз 100 мл води. Водні витяжки об’єднували, центрифугували і декантували у мірну колбу ємністю 500 мл крізь 5 шарів марлі, що була вкладена в скляну лійку діаметром 55 мм і попередньо промита водою. Фільтр промивали водою і доводили об’єм водою до позначки (розчин А).

25 мл розчину А переносили у центрифужну пробірку, додавали 75 мл 95% спирту, перемішували, підігрівали на водяній бані до 30ºС протягом 5 хв. Через 1 год вміст пробірки центрифугували з частотою обертання 5000 об/хв протягом 30 хв. Надосадову рідину з розчину А фільтрували під вакуумом при залишковому тиску 13-16 кПа, через висушений до постійної маси при температурі 100-105ºС скляний фільтр ПОР-16 діаметром 40 мм. Осад з розчину кількісно переносили на фільтр, послідовно промивали 15 мл розчинами 95% спирту етилового у воді (у відношенні 3:1), 10 мл ацетону та 10 мл діетилового етеру. Фільтри з осадом висушували на повітрі, а потім при температурі 100-105ºС до постійної маси. Вміст полісахаридів у перерахунку на абсолютно суху сировину у відсотках (Х) обчислювали за формулою:

,

де m₁ – маса фільтру, г;

m₂ – маса фільтру з осадом, г;

m – маса сировини, г;

W – втрата у масі при висушуванні, %.

Результати кількісного визначення полісахаридів в коренях ехінацеї пурпурової наведено в табл. 2.2.

Таблиця 2.2

Кількісний вміст полісахаридів в коренях ехінацеї пурпурової

m				Xi	Хср		S2			Scp		P	t(P,)	Довірчий інтервал					ε, %
1		2		3	4		5			6		7	8	9					10
5	4		9,436			9,43		0,001079	0,014692		0,95		2,78		9,43	±	0,04	0,433
			9,387
			9,462
			9,447
			9,395

Як видно з табл. 2.2, вміст полісахаридів в коренях ехінацеї пурпурової складає 9,43±0,04%.

2.4.14.2. Фракціонування полісахаридів

Після отримання ліпофільної фракції, нами був досліджений шрот та отримані різні фракції полісахаридів – визначено водорозчинні полісахариди (ВРПС), пектинові речовини (ПР) та геміцелюлози А і Б (ГЦ) [38, 54].

100 г шроту сировини, що залишився після отримання ліпофільних фракцій екстрагували 82% спиртом етиловим при нагріванні на водяній бані протягом 2 год, періодично збовтуючи для змивання частинок сировини зі стінок колби. Екстракцію проводили двічі, для очищення сировини від вільних моносахаридів, олігосахаридів та інших спирторозчиних речовин. Отриманні витяжки відділяли від сировини. Повітряно-сухий шрот сировини, що залишився після екстракції 82% спиртом етиловим, використовували для отримання ВРПС. Шрот екстрагували двічі по 1л гарячої води при нагріванні до температури 95С протягом 2 год кожного разу. Екстракцію проводили при постійному перемішуванні. Отриманні екстракти відділяли від сировини, об'єднували, випарювали до 1/5 від початкового об'єму. Концентровані витяжки ВРПС висаджували трикратною кількістю 96% етанолу за об'ємом при кімнатній температурі. Отримані осади відфільтровували, промивали 96% етанолом, ацетоном, висушували у сушильній шафі до постійної маси та зважували. Отримували фракції ВРПС.

Шрот, що залишився після вилучення ВРПС, використовували для виділення ПР. Екстракцію повітряно-сухого шроту проводили сумішшю 0,5% розчину кислоти щавлевої та 0,5% розчину амонію оксалату у співвідношенні 1:1. Екстрагування відбувалося двічі при температурі 80-85С протягом 2 год при постійному перемішуванні. Отриманні витяжки відділяли від сировини, об'єднували, екстракти концентрували і висаджували трикратною кількістю 96% етанолу. При цьому утворювався осад ПР, який відфільтровували, промивали послідовно 96% спиртом етиловим, ацетоном, висушували у сушильній шафі до постійної маси та зважували.

Для виділення ГЦ, використовували повітряно-сухий шрот, що залишився після послідовного дослідження ВРПС та ПР. Екстракцію проводили двічі 10 % розчином натрію гідроксиду. Екстрагування відбувалося при температурі 80-85С протягом 2 год при постійному перемішуванні. Співвідношення сировина-екстрагент 1:5. Витяжки відділяли від сировини, екстракти об'єднували, концентрували до 1:5 від початкового об’єму, висаджували трикратною кількістю 96% спирту етилового. Осад, що випав, відфільтровували, промивали спочатку 96% етанолом, потім ацетоном, висушували у сушильній шафі до постійної маси та зважували.

Результати дослідження вмісту полісахаридів в коренях ехінацеї пурпурової за фракціями наведено в табл. 2.3.

Таблиця 2.3