- •Лабораторная работа № 14
- •2. Исследование жвачки, отрыжки и рвоты
- •3. Исследование ротовой полости
- •4. Исследование глотки
- •5. Исследование пищевода
- •6. Исследование зоба у птиц
- •Лабораторная работа № 15
- •Лабораторная работа № 16 «наружное исследование брюшных органов у жвачных животных»
- •1. Методика исследования рубца
- •Исследование сетки
- •Исследование книжки
- •Исследование сычуга
- •Исследование кишечника
- •Исследование печени
- •Лабораторная работа № 17 «наружное исследование брюшных органов у лошадей и других животных»
- •Методика исследования желудка у лошадей и других животных
- •Исследование кишечника у лошадей и других животных
- •Исследование печени у лошадей и других видов животных
- •Лабораторная работа № 18, 19 «методы взятия и исследования желудочного содержимого, желудочного сока, рубцового содержимого и фекалий»
- •1. Исследование желудочного содержимого
- •Определение свободной соляной кислоты.
- •Определение общей кислотности
- •Определение связанной соляной кислоты.
- •Определение дефицита соляной кислоты
- •Определение молочной кислоты
- •Определение уропепсина.
- •Микроскопическое исследование
- •3. Исследование содержимого рубца у жвачных животных
- •Определение химических свойств
- •Определение летучих жирных кислот (лжк)
- •Определение общей кислотности
- •Микроскопическое исследование
- •Определение активности рубцовой микрофлоры по Дирксену и Хофиреку
- •4. Исследование фекалий
- •Химическое исследование
- •Определение органических кислот в фекалиях
- •Определение аммиака
- •5. Функциональные методы исследования печени
- •6. Исследование выделительной способности печени (бросульфалеиновая проба)
- •6. Пункция печени у крупного рогатого скота
- •7. Диагностика заболеваний поджелудочной железы.
Определение молочной кислоты
К 10 мл 2% раствора карболовой кислоты прибавляют 1-2 капли 10% раствора полуторахлористого железа. Полученную темно - фиолетовую жидкость разводят водой до бледно-фиолетового цвета (аметистовый след) и по каплям прибавляют желудочный сок. При наличии молочной кислоты жидкость принимает желтый цвет.
Определение масляной кислоты
5мл желудочного сока нагревают до кипения в пробирке. Над парами, выходящими из пробирки держат синюю лакмусовую бумажку, смоченную дистиллированной водой. При наличии масляной кислоты бумага краснеет.
Определение желчных пигментов
На лист бумаги наносят5-6 капель не фильтрованного желудочного сока и на него наслаивают 1-2 капли 0,2% раствора метиленового синего. Появление зеленого окрашивания указывает на наличие желчных пигментов.
Определение пигментов крови. (бензидиновая проба)
К 5 каплям 1% раствора бензидина приливают 5 капель 3% раствора перикиси водорода и 5 капель желудочного сока. При наличии крови – появляется синее окрашивание.
2. КЛИНИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ПЕПСИНА В ЖЕЛУДОЧНОМ СОКЕ И УРОПЕПСИНА В МОЧЕ
Принцип метода в основе метода лежит способность пепсина в желудочном соке створаживать белок молока – казеиноген.
Створаживание молочно-ацетатной смеси при рН 4,9 и температуре 25оС пепсином происходит строго параллельно его способности переваривать белки.
За единицу активности пепсина принимают то его количество, которое при указанных условиях створаживает 5 мл молочно-ацетатной смеси за 60 сек (эта условная единица соответствует 0,01 мг кристаллического пепсина). Активность уропепсина определяют в моче по такому же принципу.
Ход работы. На дно пробирки с помощью микропипетки вносят 0,1 мл желудочного сока, а в другую пробирку – 5 мл молочно-ацетатной смеси. Помещают пробирки в водяную баню, нагретую до 25оС на 5 минут. Быстро переливают молочно-ацетатную смесь в пробирку с желудочным соком и одновременно включают секундомер. Пробирку встряхивают, не вытаскивая из водяной бани и следят за появлением на ее стенках первых хлопьев казеина. В момент появления хлопьев секундомер останавливают и записывают время створаживания в секундах.
Расчет: для расчета активности 1 мл желудочного сока делят число 60 на количество найденных секунд. Полученный результат умножают на 10.
Например: створаживание смеси произошло за 15 секунд, следовательно, в 0,1 мл желудочного сока будет 4 ед. пепсина(60/15=4ед.), а в 1 мл сока 40 ед. или 0,4мг кристаллического пепсина.
Определение уропепсина.
В пробирку наливают 0,5 мл суточной мочи. Для активации уропепсина к моче приливают 0,1 мл 2Н раствора хлористоводородной кислоты до рН 3 (в присутствии бумажки Конго-красного до сине-фиолетового цвета). Если окраска не появляется, то добавляют по каплям 2Н раствор НСl до появления окраски. Пробирку помещают в термостат при температуре 37о на 1 час.
В водяную баню, нагретую до 25о помещают пробирку с активизированным уропепсином и пробирку с молочно-ацетатной смесью (5 мг) на 5 минут.
Далее определение проводят также, как описано выше с желудочным соком.
Для расчета количество уропепсина число 60 делят на время свертывания в секундах, полученное в опыте. Для расчета, сколько единиц уропепсина выделяется с мочой умножают на 2 и на суточный диурез (в мл).
При ахилии уропепсин отсутствует, при язвенной болезни может быть увеличенным.