- •Передмова
- •Правила роботи в клініко-діагностичній лабораторії
- •Правила роботи в клініко-діагностичній лабораторії
- •Розділ 1 інструментальні методи аналізу в медицині
- •Розділ 2 правила роботи з приладами
- •2.1. Фотоелектроколориметри
- •2.1.2. Колориметр фотоелектричний концентраційний кфк-2мп
- •2.1.4. Фотометр аналітичний медичний мефан-8001
- •2.2. Правила проведення фотометрії та розрахунок результатів досліджень
- •2.3. Поляриметр
- •2.4. Рефрактометр ирф–22
- •2.5. Прилади для потенціометричного аналізу
- •2.5.2. Універсальний йономір эв–74
- •Контрольні питання до розділів 1 – 2
- •Розділ 3 методи вивчення білкового обміну
- •Визначення загального білка в сироватці крові й інших біологічних рідинах
- •Лабораторна робота № 1 Уніфікований метод визначення загального білка в сироватці крові. Біуретова реакція
- •Лабораторна робота № 2 Рефрактометричний метод визначення загального білка в сироватці крові
- •Лабораторна робота № 3 Визначення загального білка в сечі. Проба Гелера
- •Клініко-діагностичне значення визначення загального білка у біологічних рідинах
- •Лабораторна робота № 4 Проби колоїдостійкості білків сироватки крові. Тимолова проба
- •Приклад побудови калібрувального графіка для визначення тимолової проби
- •Клініко-діагностичне значення тимолової проби
- •Лабораторна робота № 5 Визначення білкового спектру сироватки крові методом електрофорезу на папері
- •Приклад розрахунку білкових фракцій у відносних одиницях
- •Приклад розрахунку білкових фракцій в абсолютних одиницях
- •Клініко-діагностичне значення дослідження електрофореграм
- •Приклад опрацювання електрофореграм за допомогою комп'ютера
- •Контрольні питання до розділу 3
- •Розділ 4. Небілкові нітрогенвмісні (Азотисті) сполуки
- •Методи дослідження вмісту сечовини, креатину, креатиніну та сечової кислоти в біологічних рідинах
- •Лабораторна робота № 6 Визначення сечовини в сироватці крові та сечі за кольоровою реакцією з діацетилмонооксимом
- •Готування робочого реактиву
- •Клініко – діагностичне значення кількісного визначення сечовини у біологічних рідинах
- •Лабораторна робота № 7 Визначення креатиніну в біологічних рідинах за кольоровою реакцією Яффе
- •Б) Хід визначення вмісту креатиніну в добовій сечі
- •Клініко-діагностичне значення дослідження концентрації креатиніну у біоматеріалі
- •Лабораторна робота № 8 Визначення сечової кислоти в сироватці крові за реакцією з фосфорно-вольфрамовим реактивом
- •Лабораторна робота № 9 Кількісне визначення сечової кислоти в сечі
- •Клініко-діагностичне значення дослідження вмісту сечової кислоти у біологічних рідинах
- •Контрольні питання до розділу 4
- •Розділ 5. Ферменти
- •Визначення активності α-амілази в біоматеріалі
- •Лабораторна робота № 10 Визначення активності α–амілази зі стійким крохмальним субстратом. Метод Каравею
- •Лабораторна робота № 12 Визначення активності α-амілази в сироватці крові. Метод Кінга
- •Лабораторна робота № 13 Вплив рН середовища на активність ферментів
- •Лабораторна робота № 14 Вплив активаторів та інгібіторів на активність ферменту α-амілази
- •Лабораторна робота № 15 Вплив температури на активність
- •Готування розведеної слини
- •Клініко-діагностичне значення визначення активності α-амілази у біологічних рідинах
- •Визначення амінотрансфераз у сироватці крові
- •Лабораторна робота № 16 Колориметричний метод визначення активності аспартатамінотрансферази у сироватці крові (за Райтманом – Френкелем)
- •Клініко-діагностичне значення визначення активності амінотрансфераз у сироватці крові
- •Контрольні питання до розділу 5
- •Розділ 6. Методи вивчення вуглеводного обміну
- •Лабораторна робота № 17 Якісне визначення глюкози в біологічних рідинах. Реакція Тромера
- •Лабораторна робота № 18 Визначення глюкози в біологічних рідинах глюкозооксидазним (уніфікованим) методом
- •Лабораторна робота № 19 Кількісне визначення глюкози в сечі за кольоровою реакцією з о-толуїдиновим реактивом
- •Лабораторна робота № 20 Кількісне визначення глюкози в сечі поляриметричним методом
- •Клініко-діагностичне значення визначення глюкози в біологічних рідинах
- •Контрольні питання до розділу 6
- •Розділ 7. Обмін ліпідів
- •Біологічна роль ліпідів
- •Лабораторна робота №21 Якісна реакція на ацетон та ацетоацетатну кислоту
- •Лабораторна робота №22 Якісна реакція на ацетоацетатну кислоту. Реакція Герхарда
- •Лабораторна робота №23 Якісне виявлення ацетону у біологічних рідинах
- •Лабораторна робота №24 Якісна реакція на β-оксимасляну кислоту
- •Клініко-діагностичне значення визначення кетонових тіл у біологічних рідинах
- •Контрольні питання до розділу 7
- •Біохімічні показники для дорослих у нормі
- •Література
- •Безпальченко Віолета Михайлівна
- •Практикум Навчальний посібник для студентів вищих навчальних закладів
Приклад побудови калібрувального графіка для визначення тимолової проби
Побудований 15.09.2002.
Спеціаліст – Макаренко В.М.
Прилад – колориметр фотоелектричний концентраційний КФК–2; заводський № 8708231.
Кювета – 5 мм.
Довжина хвилі – 640 нм (світлофільтр червоний).
Норма 0 – 4 одиниць S–H.
№ п/п S–H Е 1 5 0,11 2 10 0,22 3 15 0,33 4 20 0,44
Фактор перерахунку
=
S–H/Е
= 50/1,1 = 45.
За даними калібрувального графіку складається калібрувальна таблиця 5.
Таблиця 5
Калібрувальна таблиця
для визначення тимолової проби
Е |
0,01 |
0,02 |
0,03 |
0,04 |
0,06 |
0,08 |
0,10 |
0,12 |
0,14 |
0,16 |
0,20 |
S–Н |
0,45 |
0,90 |
1,35 |
1,80 |
2,70 |
3,60 |
4,50 |
5,40 |
6,30 |
7,20 |
9,00 |
Клініко-діагностичне значення тимолової проби
Тимолова проба є неспецифічною реакцією. Водночас вона набагато більш специфічна для функціонального дослідження печінки, чим інші колоїдно-осадові проби. Вважають, що проба Маклагана позитивна в 90 – 100 % випадків хвороби Боткіна (вже у переджовтяничній її стадії і при безжовтяничній формі), токсичного гепатиту. Реакція позитивна у хворих із постгепатитним і постнекротичним, особливо жовтяничним, цирозом (на відміну від такої у хворих іншими формами цирозів), малярією і вірусними інфекціями. При механічній жовтяниці вона (у 75 % випадках) негативна. Остання обставина має диференційно-діагностичне значення.
У хворих механічною жовтяницею проба стає позитивної лише у випадку, якщо процес ускладнюється паренхіматозним гепатитом.
Тимолову пробу, доповнену тестом визначення уробіліну в сечі, можна використовувати в період диспансерного спостереження за хворими, що лікувались у стаціонарі з приводу хвороби Боткіна.
Лабораторна робота № 5 Визначення білкового спектру сироватки крові методом електрофорезу на папері
Мета: Вивчити залежність швидкості руху білків в електричному полі від розміру заряду та молекулярної маси, розрахувати кількість білкових фракцій у відносних і абсолютних одиницях, зробити клініко-діагностичний висновок (стор. 53).
Теоретична частина
Для більш глибокого вивчення білкового спектру крові запропоновані різноманітні засоби електрофоретичного фракціонування. Найбільш широке використання в клінічній практиці одержав зональний електрофорез. Як підтримуюче середовище-носій застосовують папір, ацетат целюлозу, різноманітні гелі та ін. Метод заснований на тому, що під впливом сталого електричного струму білки сироватки крові, що мають електричний заряд, рухаються по просоченому буферним розчином паперу зі швидкістю, що залежить від величини заряду і молекулярної маси частки. При цьому поділ фракцій білків сироватки крові відбувається в напрямку від катоду до аноду. Найбільшу швидкість просування має альбумін, як дрібнодисперсний, з відносно невисокою молекулярною масою білок. За ним слідують глобуліни: 1 -; 2 -; -; - фракції.
Реактиви та матеріали:
1. Веронал – мединаловий буфер із рН = 8,6.
2. Красильний розчин із водорозчинною синьою сулемою.
3. Розчин з масовою часткою оцтової кислоти 1 %. Розчин для відмивання електрофореграм від барвника, що не зв'язався з білком.
4. Розчин з молярною концентрацією еквівалентів натрій гідроксиду 0,01 моль/л . Розчин, що елюює, для витягу бромофенолового синього з забарвлених електрофореграм.
5. Освітлюючий розчин, що використовується при розрахунках білкових фракцій.
6. Досліджувана сироватка крові.
Обладнання: апарат для проведення електрофорезу на папері з перетворювачем змінного струму в сталий, з силою струму 50 – 100 мА при напрузі 180 – 400 В, колориметр фотоелектричний концентраційний КФК-2МП.
Хід визначення
1. Готують електрофоретичну камеру. Кювети камери заповнюють на половину об'єму буферним розчином так, щоб рівень рідини був однаковим.
2. Роблять розмітку паперових стрічок для електрофорезу. Потім їх замочують у буферному розчині, залишаючи сухими тільки кінці і вкладають у камеру.
3. Наносять сироватку крові мікропіпеткою ємністю 0,1 мл в об'ємі до 0,02 мл на паперову стрічку в місці лінії старту, що визначається розміткою.
4. Виконують електрофорез. Величина напруги, при якій виконується поділ білкових фракцій, визначається, виходячи з розрахунку 3 – 8 В на 1 см довжини паперової стрічки. Час поділу фракцій складає 3 – 20 годин і визначається експериментальним шляхом.
5. Апарат відключають від мережі, виймають стрічки і розвішують їх на дерев'яних рамках. Рамки просушують у шафі при температурі 100 оС протягом 10 хвилин. Висушені стрічки вносять у кювети і заливають барвником на 20 – 30 хвилин. Барвник зливають, а стрічку промивають 1 % розчином оцтової кислоти до знебарвлення ділянок паперу, вільних від білків. Стрічку просушують.
6. Проводять елюцію. Для елюції електрофоретичну стрічку розрізають за кількістю фракцій, орієнтуючись на найсвітлішу ділянку між ними, вносять їх в окремі пробірки і заливають 0,01 н розчином натрій гідроксиду по 3 мл у глобулінові фракції і по 9 мл у пробірку з альбуміновою фракцією. Пробірки струшують і залишають на 30 хвилин, після чого фотометрують за довжини хвилі 500 – 560 нм у кюветі товщиною 10 мм (розд. 2.1.2), причому виміряну величину оптичної густини розчину з альбуміновою фракцією множать на 3. Контролем служить ділянка фореграми, що не містить білка, яка оброблена аналогічно глобуліновій фракції.
7. Розраховують кількість білкових фракцій у відносних (%) і абсолютних (г/л) одиницях та порівнюють отримані дані з нормальним співвідношенням білкових фракцій (табл. 6).