- •Родоначальник
- •Ученики — мнимые и подлинные
- •Последователи
- •Днк крупным планом
- •Образец упаковки молекулярных структур в клетке
- •Главный секрет — упаковка
- •Порядок хаоса
- •Утраченные иллюзии и крепнущий оптимизм
- •Хронология «днк-логии»
- •Порядок хаоса
- •Утраченные иллюзии и крепнущий оптимизм
- •Хронология «днк-логии»
- •Главная цель - клетка
- •И что же это значит?
- •Расширяя понимание природы
- •Что сулит миру наукоемкое сельское хозяйство?
- •Чего ждать от биотехнологии
- •Устоим ли против невежественных фанатиков?
- •Заключение
- •Об авторе
- •Зачем нам трансгенные растения
- •Накануне больших перемен
- •Генная инженерия и биоразнообразие
- •Что сделано
- •Что дальше
- •Проблемы внедрения
- •Ответственность перед обществом
- •«Золотой миллиард» или «золотой» рис?
- •Экскурс в историю и клеточную биологию
- •Экскурс в медицину и социологию
- •Экскурс в футурологию и этику
- •О еде и окружающей среде
- •Колорадский жук предпочитает не Колорадо, а Россию
- •Соя и хлопчатник
- •О «безопасности» и «экологической чистоте»
- •Перенос переносу рознь
- •Природные механизмы гпг
- •Гпг: опасности мнимые и подлинные
- •Бактерии и антибиотики
- •От растений — к бактериям
- •Не перенесем ли «что-нибудь» за обедом?
- •Почему же растет устойчивость к антибиотикам?
- •Могут ли обмениваться свойствами далекие виды?
- •«Горизонтальный» перенос — механизм эволюции
- •Паразитирование как высшая форма адаптации
- •«Вседозволенность» вирусного переноса
- •Ограничения все-таки есть
- •«Горизонтальный» перенос в эволюции
- •Эффективное средство биотехнологии
- •Почему об этом надо знать
- •Как бактерия «обманывает» растения, а ученые — бактерию
- •Как это выглядит на практике j
- •Стимул — трудности
- •Пушки вместо бактерий
- •Три «поколения» трансгенных растений
- •Основные трансгенные культуры в 2003 г. (% от общей площади посевов)
- •«Золотой» рис — манна земная
- •Что родится в дискуссии?
- •Доводы «против»
- •Мнение специалистов
- •: Общая позиция
- •Зачем все это
- •Надо набраться терпения
- •Что ж, вернемся к основной теме разговора. Итак, в борьб с органическими загрязнителями мы можем рассчитывать на по мощь наших друзей-микробов. Как же все это выглядит на прагс тике?
- •Их тоже запахивают в почву?
- •В заключение — несколько слов о проблемах и перспекти- I вах этого направления, вселяющего надежду на то, мы победим за- I грязнения, а не они нас.
- •Биоремедиация
- •Биодеградация
- •Носители информации
- •Эволюция генетических систем деградации ксенобиотиков
- •Интродукция биодеструкторов
- •Новый этап
- •«Шоковая терапия» для генной терапии
- •Альтернатива смерти — лечение, связанное с риском
- •«Почему» и «как» современной генетики
- •Аргументы и факты
- •Вредны ли гм-продукты?
- •Пестициды и генная инженерия
- •Распространение измененных генов
- •«Притянутые» проблемы
- •Кредо — безграмотность
- •О чем не сказано
- •Об организации общественных кампаний
- •РРавда рРопагандистов рРироды
- •Невинный грех простоты
- •Ложь во спасение
- •Великая битва с химерами
- •Рождение дьявола
- •Опасна ли генная инженерия?
- •Есть или не есть?
- •Спасет ли мир биотехнология?
- •Табак без никотина
- •Листья превратим в цветы?
- •Светящийся от жажды
- •Вакцины из гм-растений
- •Витаминный салат с крысиными генами
- •Лучше поздно, чем никогда
- •Словарь специальных терминов*
- •Часть 1. Методическое пособие для учителя. — м., 2002. 88 с. Часть 2. Рабочая тетрадь. — м., 2002. 160 с. Ббк т4.200.50
Пушки вместо бактерий
Трудности, с которыми столкнулись, пытаясь модифицировать злаковые с помощью агробактерий, вынудили ученых разработать альтернативные схемы трансформации.
Одной из них стало введение свободной ДНК, называемой также векторной ДНК или просто вектором, в протопласты — растительные клетки без стенок (оболочек). Их удаляют, помещая эксплантаты в раствор ферментов и» низших грибов. Дело в том, что клеточная стенка —• серьезное препятствие для ДНК. В протопластах же единственной защитой остается плазматическая мембрана. Обычно ДНК внедряют в протопласты, используя полиэти-ленгликоль (плотный органический полимер, проникающий сквозь мембрану) или электрический пробой, при котором мембрану «протыкает» импульс напряжения. Эти процедуры не связаны с биологическими взаимодействиями и пригодны для любых клеток. Но получить полноценное растение из изолированных протопластов нелегко: лишенная стенки клетка с трудом ее восстанавливает. К тому же регенерировать целое растение из изолированной клетки гораздо сложнее, чем из клетки или клеток в составе
103
эксплантата. Часто трансгенные растения, полученные таким способом, оказываются стерильными (они не дают потомства).
Культуры:
П - устойчивые к гербицидам Щ - устойчивые к вредителям
Ц - устойчивые к вредителям и гербиццдам
< 1% - с другими качествами
Распределение по культурам площади возделывания трансгенных растений в 2003 г.
Поэтому не прекращались попытки ввести ДНК в интактные (с оболочкой) клетки. Обычные инъекции оказались неэффективными: тончайшие иглы ломались и засорялись. К тому же обрабатывать клетки «поодиночке» — однообразный и утомительный труд, так что в промышленных целях способ явно не применим. Кроме того, даже если ДНК попадает в клетку, она
далеко не всегда «встраивается» в геном. Иногда нужны инъекции многих тысяч клеток, чтобы нужный ген включился в хромосому хотя бы одной из них.
В Калифорнийском университете (США) эффективность доставки генов в клетки резко повысили, бомбардируя сразу множество растительных клеток микрочастицами с покрытием из генетического материала. На частицы вольфрама или золота наносили суспензию с нужной ДНК, заключали их в капсулу и стреляли по мишени (чашке Петри с эксплантатами). При столкновении капсулы со специальным препятствием тысячи частиц рассеивались в мишени. Быстро движущиеся металлические частицы диаметром 1-2 мкм, покрытые ДНК, легко проникали в клетки, проходя сквозь стенки и мембраны. Оставленные ими крошечные отверстия быстро затягивались, не нарушая целостности клеток. Хотя внедренные в клетку частицы оставались в цитоплазме, они были так малы, что не мешали клеточным процессам.
Со времени создания «биологической пушки» ее устройство заметно усовершенствовалось. В первой пушке детонатором служил обычный порох, затем использовали сжатый воздух и электричество. Одной из самых распространенных и эффективных стала пушка, созданная в Университете штата Огайо (США), в которой нет капсулы, а частицы ускоряются сжатым гелием.
С помощью «биопушки» трансформировали почти все злаковые. Однако при использовании пушки вероятность «встраивания» сразу многих копий ДНК-вектора, «обрывков» ДНК и других сбоев выше, чем при работе с агробактериями.
В среднем лишь несколько из каждых ста трансгенных растений отбирают для получения новой линии (сорта). Помимо эффективной «работы» введенного гена трансгенное растение дол-
104
ясно удовлетворять многим другим требованиям. Оно не должно отличаться от исходного растения (донора) по основным биохимическим, физиологическим и морфологическим характеристикам. Путь от начала экспериментов по трансформации до выбора потенциальных родоначальников нового сорта очень долог (в зависимости от вида растений он занимает 2-5 лет). После этого требуется еще не менее 3-5 лет различных испытаний (агрономических, медицинских и т. п.) до того, как новый сорт попадет на поля.