- •Гоу впо Тверская гма Росздрава
- •Содержание
- •Список сокращений
- •Предисловие
- •Модуль I «Морфология микроорганизмов»
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •1. Правила работы в учебной бактериологической лаборатории
- •2. Мир микробов. Особенности строения про- и эукариотической клетки
- •3. Систематика и номенклатура микроорганизмов
- •4. Морфология и ультраструктура бактериальной клетки
- •Цитоплазма Капсула Ворсинки (пили) Мезосома
- •Цитоплазмамическая мембрана
- •Периплазматическое пространство
- •5. Основные формы бактерий
- •6. Микроскопический метод диагностики инфекционных заболеваний
- •7. Простые и сложные методы окраски
- •8. Механизмы окрасок по Граму и Цилю-Нильсену
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Тема 2: Специальные методы окраски. Устройство биологического микроскопа. Виды
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •1. Специальные методы окраски для выявления отдельных структур бактерий
- •2. Методы окраски отдельных групп про- и эукариот
- •3. Изучение подвижности микроорганизмов
- •4. Виды микроскопии
- •5. Устройство биологического микроскопа
- •6. Порядок проведения иммерсионной микроскопии
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Тема 3: Морфология и ультраструктура отдельных групп микроорганизмов: риккетсий, хламидий, микоплазм, актиномицет, спирохет, грибов, простейших
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Теоретические вопросы для рубежного контроля знаний
- •Перечень практических навыков
- •Модуль ιι «Физиология микроорганизмов»
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •1. Состав и требования, предъявляемые к питательным средам
- •2. Классификация питательных сред
- •3. Понятия асептики и антисептики
- •4. Понятие дезинфекции, методы дезинфекции и контроль эффективности дезинфекции
- •5. Понятие стерилизации, методы, аппаратура и режимы стерилизации
- •6. Методы определения эффективности стерилизации
- •7. Понятие о виде, штамме, колонии, чистой культуре микроорганизмов
- •8. Методы выделения чистых культур микроорганизмов
- •9. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний
- •10. Техника посева микроорганизмов
- •11. Особенности культивирования анаэробных бактерий
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Диагностике инфекционных заболеваний.
- •I этап.
- •II этап. Цель: накопление чистой культуры
- •III этап. Цель: идентификация исследуемой культуры
- •IV этап.
- •Тема 2: Физиология бактерий. Питание, дыхание, размножение, метаболизм и ферментные системы бактерий. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний (2-й день).
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •1. Метаболизм микроорганизмов
- •2. Ферментные системы микроорганизмов
- •3. Классификация бактерий по типу питания. Источники углерода, азота, макро- и микроэлементов, ростовых факторов для микробов.
- •4. Механизмы питания бактерий
- •5. Классификация микроорганизмов в зависимости от источника энергии
- •6. Классификация бактерий по типу дыхания - биологического окисления.
- •7. Брожение и его виды
- •8. Условия культивирования бактерий
- •9. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения бактерий
- •10. Бактериологический метод исследования. Проведение 2 этапа бактериологического метода выделения аэробов. Культуральные свойства бактерий.
- •III. План практической работы
- •4. Заполнить таблицу « Классификация микроорганизмов по типам дыхания»
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Тема 3: Идентификация чистых культур. Биохимическая активность бактерий. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний (3-день).
- •1. Проведение III этапа бактериологического метода выделения чистых культур микроорганизмов. Схема идентификации микроорганизмов
- •2. Определение чистоты выделенной культуры
- •3. Использование ферментативной активности бактерий для идентификации микроорганизмов
- •4. Методы определения гликолитической активности микроорганизмов
- •5. Методы определения протеолитической активности бактерий
- •6. Определение окислительно-восстановительных ферментов бактерий
- •7. Системы для биохимической идентификации бактерий
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Модуль III «Основы антибактериальной химиотерапии»
- •2. Механизмы действия антибиотиков на микроорганизмы
- •3. Побочное действие антибиотиков
- •4. Механизмы антибиотикорезистентности микроорганизмов
- •5. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •III модуль «Инфекция и инфекционный процесс»
- •Тема 2: Инфекционный процесс. Факторы патогенности бактерий. Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний
- •Базовый текст
- •1. Учение об инфекции. Понятия «инфекция» и «инфекционное заболевание»
- •3. Классификации инфекционных заболеваний и форм инфекций
- •4. Периоды и исходы инфекционного заболевания
- •5. Патогенность и вирулентность, единицы вирулентности
- •6. Основные факторы патогенности микроорганизмов
- •7. Микробные токсины
- •8. Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •III модуль «Экология микроорганизмов. Основы санитарной микробиологии»
- •Тема 3:Микрофлора организма человека. Санитарно-бактериологическое исследование воды, воздуха, почвы
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II.Базовый текст
- •2. Функции нормальной микрофлоры организма человека
- •3. Методы определения микрофлоры организма человека
- •4. Определение понятия дисбактериоз и причины его возникновения
- •5. Принципы диагностики и лечения дисбактериоза
- •6. Предмет санитарной микробиологии и требования, предъявляемые к санитарно-показательным микроорганизмам
- •7. Микрофлора воды, воздуха и почвы
- •8. Методы определения санитарно-показательных микроорганизмов воды, воздуха и почвы
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Теоретические вопросы для рубежного контроля знаний
- •Перечень практических навыков
- •Литература
5. Принципы диагностики и лечения дисбактериоза
В медицинской практике для диагностики дисбактериозов используется, как правило, классический бактериологический анализ, требующий наличия большого количества дорогостоящих питательных сред и относительно длительного промежутка времени (не менее 5 дней). Как отмечалось выше, только в кишечнике человека обитают около 1000 видов микроорганизмов нормальной микрофлоры, при этом соотношение анаэробов к аэробам 1000:1, таким образом, учет всех, столь отдаленных в таксономическом отношении микроорганизмов, при классическом бактериологическом анализе практически невозможно.
Согласно ОСТ 91500.11.0004-2003 диагноз дисбактериоза кишечника основывается на результатах клинического обследования пациента и данных микробиологического исследования кала.
Поскольку дисбактериоз кишечника в ряде случаев протекает бессимптомно, решающее значение при постановке диагноза имеют микробиологические показатели.
Микробиологическими критериями диагноза являются:
– нарастание количества условно-патогенных микроорганизмов одного или нескольких видов в кишечнике при нормальном количестве бифидобактерий;
– нарастание одного или нескольких видов условно-патогенных микроорганизмов при умеренном снижении концентрации бифидобактерий (на 1-2 порядка);
– снижение содержания облигатных представителей микробиоценоза (бифидобактерий и/или лактобацилл) без регистрируемого увеличения количества сапрофитной или условно-патогенной микрофлоры кишечника;
– умеренное или значительное (<107) снижение содержания бифидобактерий, сочетающееся с выраженными изменениями в аэробной микрофлоре – редукцией лактобацилл, появлением измененных форм кишечной палочки, обнаружением одного или нескольких представителей условно-патогенных микроорганизмов в высоких титрах (до 107 – 108 КОЕ/г).
Снижение числа анаэробных представителей облигатной микрофлоры, обладающих высокой антагонистической активностью, создает условия для развития условно-патогенных микроорганизмов: энтеробактерий, стафилококков и грибов рода Candida.
При дисбактериозе нарушается нормальное соотношение между анаэробной и аэробной микрофлорой. Это, прежде всего, выражается в:
- снижении концентрации бифидобактерий на 1-2 порядка,
- снижении концентрации лактобактерий на 1-2 порядка,
- нарастании концентрации кишечных палочек с измененными свойствами,
- снижении концентрации нормальных кишечных палочек (< 1 млн. на 1 г фекалий) или увеличение их содержания в 1 г фекалий > 1 млрд.)
- нарастании концентрации других условнопатогенных микроорганизмов.
В настоящее время некоторые лаборатории используют для диагностики дисбактериоза косвенные методы, направленные на определении некоторых метаболитов кишечной микрофлоры. Эти соединения разделены на четыре основные группы: 1-я группа включает в себя индикан, n-крезол, фенол; 2-я группа – Н2, СН4, СО2, С2-С6жирные кислоты; 3-я – деконъюгированные жирные кислоты; 4-я – аммиак (NН3). Исследования последних лет с использованием скрининговой диагностики дисбактериоза, а именно метода газожидкостного хроматографического анализа, ионоэксклюзионной хроматографии и высокоэффективной жидкостной хроматографии позволили создать микробный метаболический паспорт при эубиозе кишечника (Кушнир С.М., 2002).
Для скрининговых исследований на дисбактериоз требуется разработка достаточно быстрых биохимических методов, легко осуществляемых на практике.
В ГУ Московском научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевкого МЗ РФ совместно с ООО НИФ "Ультрасан" Кондракова О.А., Бабин В.Н., Дубинин А.В. и соавт. (2001) разработан метод определения метаболической активности микрофлоры кишечника для характеристики микроэкологических и функциональных нарушений толстой кишки по содержанию летучих жирных кислот и их изоформ в фекалиях и отклонениям от показателей, характерных для физиологической нормы. При этом применяется типовое оборудование для газожидкостной хроматографии с использованием капиллярной колонки.
На кафедре микробиологии Тверской ГМА модифицирован экспресс-метод диагностики дисбактериоза кишечника, принцип которого заключается в том, что при взаимодействии протеиназ бактериальных культур с казеином, содержащимся в агаровой среде, происходит его расщепление (Червинец В.М. и соавт., 2003). При добавлении коагулянта белка на мутном фоне агара выявляются зоны просветления вокруг лунок с казеинолитически активными микроорганизмами. Далее при использовании определенных критериев величины зоны просветления проводят оценку степени дисбиоза.
Обязательным и важнейшим при дисбиозе кишечника является устранение причин его возникновения и эффективная терапия основного заболевания. Основными современными приемами сохранения и коррекции микробной экологии является назначение: пробиотиков, пребиотиков, метаболитов бактерий-симбионтов, комплексных пробиотиков, продуктов функционального питания на основе молочнокислых бактерий, пребиотиков, аутопробиотиков, микроэкологическая инженерия.
В рамках микробиологической терапии используются преимущественно микроорганизмы, являющиеся симбионтами человека. Применение именно этих микроорганизмов оправданно, поскольку они адаптированы к внутренней среде человека. Также в схемах лечения могут применяться и несимбионты, например Saccharomyces boulardii. Лакто-, бифидобактерии, энтерококки и Escherichia coli чаще всего являются компонентами микробиологических препаратов и в наибольшей степени изучены.
На сегодняшний день наиболее широко используемыми препаратами являются 3 основные группы: пробиотики, пребиотики и синбиотики.
Пробиотики –это живые микроорганизмы и вещества микробного происхождения, оказывающие при естественном способе введения позитивные эффекты на физиологические, биохимические и иммунные реакции организма хозяина через стабилизацию и оптимизацию функции его нормальной микрофлоры (табл. 22).
Таблица 22. Препараты-пробиотики
Группы препаратов |
Монокомпонентные |
Поликомпонентные |
Комбинированные, сорбированные и метаболитные |
Бифидо-содержащие |
Бифидумбактерин в порошке (B. bifidum). Бифидумбактерин сухой (B.bifidum).
|
Бификол сухой (B. bifidum и E. coli M-17). Линекс (B.infantis, L.acidophilus, E. faecium). Бифиформ (В. longum и Enterococcus faecium). |
Бифилиз сухой (B.bifidum и лизоцим). Бифидумбактерин форте, пробифор (B. bifidum, адсорбированные на активированном угле в дозах 5,0 x107и 5,0x108м.к. соответственно). |
Лакто-содержащие |
Лактобактерин сухой (L.plantarum8RA-3). Биобактон сухой (L.acidophilus 12). Гастрофарм (L.bulgaricusLB-51). |
Ацилакт сухой (L.acidophilus- 3 разных штамма).
|
Кипацид (ацилакт + лизоцим). Аципол (L.acidophilus и полисахарид кефирных грибков). |
Коли-содержащие |
Колибактерин сухой (E.coli М-17). |
Бификол сухой (B.bifidum и E. coli M-17). |
Биофлор (E.coliМ-17 с экстрактами из сои, овощей и прополиса). |
Из других видов бактерий
|
Споробактерин (B.subtilis). Бактиспорин (B.subtilis). Бактисубтил (B.sereus).
|
Биоспорин (B. subtilis и B.licheniformis). |
Хилак-форте содержит комплекс метаболитов E. coli , L.acidophilus, L.helveticus, E.faecalis, молочную, фосфорную и лимонную кислоты. |
Для коррекции дисбиоза необходимы адекватные дозировки пробиотических препаратов с соответствующей длительностью курса. Наиболее распространенным подходом в терапии дисбактериоза является "метод вытеснения", основанный на применении больших доз лечебных бактериальных препаратов. Выявлена прямая зависимость между применяемой дозой и позитивной клинической динамикой.
Пребиотики – это препараты немикробного происхождения, способные оказывать позитивный эффект на организм хозяина через селективную стимуляцию роста или усиления метаболической активности нормальной микрофлоры кишечника. Основные препараты-пребиотики: лактулоза (дюфалак, лактусан), памба (пара-амино-метил-бензойная кислота), лизоцим, патотенат кальция.
Синбиотики - это препараты, полученные в результате рациональной комбинации пробиотиков и пребиотиков. Часто это биологически активные добавки, входящие в состав функционального питания, обогащенные одним или несколькими штаммами представителей родов Lactobacillus и Bifidobacterium. В РФ известны несколько препаратов: Биовестин-лакто, содержащий бифидогенные факторы и биомассу B.bifidum, B.adolescentis, L.plantarum; Мальтидофилюс, содержащий мальтодекстрин и биомассу B.bifidum, L.acidоphilus, L.bulgaricus; Бифидо-бак, включающий фруктоолигосахариды из топинамбура и комплекс из бифидобактерий и лактобацилл, Бифидумбактерин-мульти 1, 2 и 3 содержащие набор различных видов бифидобактерий (B.bifidum, B.longum, B.adolescentis), характерных определенному возрасту пациента, а также набор витаминов, микроэлементов и антиоксидантов; ламинолакт, содержащий энтерококки, аминокислоты, пектины и морскую капусту