I. Вопросы для самоподготовки:

1. Специальные методы окраски для выявления отдельных структур бактериальной клетки (Бурри-Гинса, Ожешко, Леффлера)

2. Методы окраски отдельных групп про- и эукариот

3. Изучение подвижности микроорганизмов

4. Виды микроскопии (фазово-контрастная, люминесцентная, темнопольная, электронная)

5. Устройство биологического микроскопа

6. Порядок проведения микроскопии с масляной иммерсией

II. Базовый текст

1. Специальные методы окраски для выявления отдельных структур бактерий

Метод Бурри-Гинса. Относится к сложным методам окраски и используется для выявления капсулы бактериальной клетки. Этапы окраски:

1. На предметном стекле смешать каплю взвеси микробных клеток с каплей туши, разведенной 1:10 и при помощи стекла со шлифованным краем сделать мазок таким же образом, как мазок крови, высушить и осторожно фиксировать в пламени горелки или горящим на мазке спиртом.

2. Нанести на мазок водный раствор фуксина на 1-2 мин.

3. Промыть водой, высушить на воздухе.

Метод Бурри-Гинса относится к негативным методам окраски: на первом этапе тушь, обтекая капсульные бактерии, создает черный или коричневый фон (соответствующий цвету туши) на котором хорошо видны неокрашенные бактерии, которые на втором этапе окрашиваются в красный цвет, а капсула остается бесцветной. Таким образом, капсулы бактерий хорошо видны на темном фоне туши виде белых ореолов вокруг красных бактерий.

Метод Ожешко.Относится к сложным методам окраски и используется для выявления спор бактерий. Этапы окраски:

1. На нефиксированный мазок нанести 0,5% раствор хлористоводородной кислоты и подогреть в течение 2-3 мин на пламени (для протравливания плотной оболочки споры) до полного испарения кислоты.

2. Высушить и зафиксировать мазок в пламени горелки.

3. Окрасить по методу Циля-Нильсена.

Споры бактерий будут окрашиваться в красный цвет (как кислотоустойчивые бактерии), а вегетативные формы в синий цвет (как некислотоустойчивые бактерии).

Метод Леффлера.Относится к простым методам окраски и используется для выявления зерен волютина (цитоплазматических включений полифосфатов) у возбудителя дифтерии (C.diphtheriae), у которого эти включения располагаются по полюсам клетки. Фиксированный мазок окрашивают метиленовым синим в течение 5 минут. Зерна волютина обладают свойством метахромазии и более интенсивно накапливают краситель – цитоплазма бактерий окрашена в голубой цвет, зерна волютина – в темно-синиий.

2. Методы окраски отдельных групп про- и эукариот

Для окраски отдельных групп микроорганизмов используют специальные методы окраски: Романовского-Гимзы, Здродовского и др.

Метод Романовского-Гимзы. Относится к сложным, универсальным методам окраски Его применяют для обнаружения нуклеоида бактерий, а также окраски спирохет, хламидий, риккетсий, простейших и мазков крови. Этапы окраски:

1. На мазок нанести рабочий раствор красителя (2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды), состоящего из смеси основного метиленового синего, азура и кислого эозина на 10-20 минут.

2. Препарат промыть и высушить.

ДНК нуклеоида окрашивается метиленовым синим и азуром в сине-фиолетовый цвет, цитоплазма клетки - эозином в розовый цвет. Представители разных родов спирохет окрашиваются в разные цвета по методу Романовского-Гимзы: боррелии – в сине-фиолетовый, трепонемы – бледно-розовый (T.pallidum– бледная трепонема), лептоспиры – красно-розовый.

Метод Здродовскогоиспользуется для окраски риккетсий, являющихся облигатными внутриклеточными паразитами и вызывающими различные риккетсиозы. Этапы окраски:

1. Окрасить мазок разведенным фуксином Циля (10-15 капель на 10 мл дистиллированной воды) в течение 5 минут, промыть водой

2. Обработать мазок 0,5% раствором лимонной кислоты или 0,01% раствором хлористоводородной кислоты, промыть водой.

3. Окрасить метиленовым синим в течение 1 минуты.

4. Промыть водой и высушить препарат.

Риккетсии, окрашенные по методу Здродовского, имеют красный цвет, цитоплазма клеток, в которых они паразитируют – голубая, ядра – синие.