- •Гоу впо Тверская гма Росздрава
- •Содержание
- •Список сокращений
- •Предисловие
- •Модуль I «Морфология микроорганизмов»
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •1. Правила работы в учебной бактериологической лаборатории
- •2. Мир микробов. Особенности строения про- и эукариотической клетки
- •3. Систематика и номенклатура микроорганизмов
- •4. Морфология и ультраструктура бактериальной клетки
- •Цитоплазма Капсула Ворсинки (пили) Мезосома
- •Цитоплазмамическая мембрана
- •Периплазматическое пространство
- •5. Основные формы бактерий
- •6. Микроскопический метод диагностики инфекционных заболеваний
- •7. Простые и сложные методы окраски
- •8. Механизмы окрасок по Граму и Цилю-Нильсену
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Тема 2: Специальные методы окраски. Устройство биологического микроскопа. Виды
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •1. Специальные методы окраски для выявления отдельных структур бактерий
- •2. Методы окраски отдельных групп про- и эукариот
- •3. Изучение подвижности микроорганизмов
- •4. Виды микроскопии
- •5. Устройство биологического микроскопа
- •6. Порядок проведения иммерсионной микроскопии
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Тема 3: Морфология и ультраструктура отдельных групп микроорганизмов: риккетсий, хламидий, микоплазм, актиномицет, спирохет, грибов, простейших
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Теоретические вопросы для рубежного контроля знаний
- •Перечень практических навыков
- •Модуль ιι «Физиология микроорганизмов»
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •1. Состав и требования, предъявляемые к питательным средам
- •2. Классификация питательных сред
- •3. Понятия асептики и антисептики
- •4. Понятие дезинфекции, методы дезинфекции и контроль эффективности дезинфекции
- •5. Понятие стерилизации, методы, аппаратура и режимы стерилизации
- •6. Методы определения эффективности стерилизации
- •7. Понятие о виде, штамме, колонии, чистой культуре микроорганизмов
- •8. Методы выделения чистых культур микроорганизмов
- •9. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний
- •10. Техника посева микроорганизмов
- •11. Особенности культивирования анаэробных бактерий
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Диагностике инфекционных заболеваний.
- •I этап.
- •II этап. Цель: накопление чистой культуры
- •III этап. Цель: идентификация исследуемой культуры
- •IV этап.
- •Тема 2: Физиология бактерий. Питание, дыхание, размножение, метаболизм и ферментные системы бактерий. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний (2-й день).
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •1. Метаболизм микроорганизмов
- •2. Ферментные системы микроорганизмов
- •3. Классификация бактерий по типу питания. Источники углерода, азота, макро- и микроэлементов, ростовых факторов для микробов.
- •4. Механизмы питания бактерий
- •5. Классификация микроорганизмов в зависимости от источника энергии
- •6. Классификация бактерий по типу дыхания - биологического окисления.
- •7. Брожение и его виды
- •8. Условия культивирования бактерий
- •9. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения бактерий
- •10. Бактериологический метод исследования. Проведение 2 этапа бактериологического метода выделения аэробов. Культуральные свойства бактерий.
- •III. План практической работы
- •4. Заполнить таблицу « Классификация микроорганизмов по типам дыхания»
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Тема 3: Идентификация чистых культур. Биохимическая активность бактерий. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний (3-день).
- •1. Проведение III этапа бактериологического метода выделения чистых культур микроорганизмов. Схема идентификации микроорганизмов
- •2. Определение чистоты выделенной культуры
- •3. Использование ферментативной активности бактерий для идентификации микроорганизмов
- •4. Методы определения гликолитической активности микроорганизмов
- •5. Методы определения протеолитической активности бактерий
- •6. Определение окислительно-восстановительных ферментов бактерий
- •7. Системы для биохимической идентификации бактерий
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Модуль III «Основы антибактериальной химиотерапии»
- •2. Механизмы действия антибиотиков на микроорганизмы
- •3. Побочное действие антибиотиков
- •4. Механизмы антибиотикорезистентности микроорганизмов
- •5. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •III модуль «Инфекция и инфекционный процесс»
- •Тема 2: Инфекционный процесс. Факторы патогенности бактерий. Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний
- •Базовый текст
- •1. Учение об инфекции. Понятия «инфекция» и «инфекционное заболевание»
- •3. Классификации инфекционных заболеваний и форм инфекций
- •4. Периоды и исходы инфекционного заболевания
- •5. Патогенность и вирулентность, единицы вирулентности
- •6. Основные факторы патогенности микроорганизмов
- •7. Микробные токсины
- •8. Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •III модуль «Экология микроорганизмов. Основы санитарной микробиологии»
- •Тема 3:Микрофлора организма человека. Санитарно-бактериологическое исследование воды, воздуха, почвы
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II.Базовый текст
- •2. Функции нормальной микрофлоры организма человека
- •3. Методы определения микрофлоры организма человека
- •4. Определение понятия дисбактериоз и причины его возникновения
- •5. Принципы диагностики и лечения дисбактериоза
- •6. Предмет санитарной микробиологии и требования, предъявляемые к санитарно-показательным микроорганизмам
- •7. Микрофлора воды, воздуха и почвы
- •8. Методы определения санитарно-показательных микроорганизмов воды, воздуха и почвы
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Теоретические вопросы для рубежного контроля знаний
- •Перечень практических навыков
- •Литература
7. Системы для биохимической идентификации бактерий
В современных условиях для изучения биохимической активности микроорганизмов, наряду с классическими варинтами “пестрого ряда”, применяют системы индикаторных бумажек (СИБ) и наборы мультимикротестов (ММТ).
Система индикаторных бумажек (СИБ) позволяет выявлять самые разнообразные ферменты бактерий. Это бумажные диски, пропитанные различными субстратами (индикатором, углеводами, аминокислотами, цитратом, ацетатом, малонатом и др. веществами). Утилизация вещества приводит к изменению рН среды, изменению цвета индикатора. Имеются наборы, которые содержат от десяти до тридцати тест-бумажек. Их можно непосредственно вносить в пробирки со взвесью бактерий либо предварительно поместить в лунки пластиковых планшетов, куда будут внесены исследуемые бактерии и уже через 3-4 часа инкубации в термостате можно судить о разложении реактивов по изменению цвета диска. Так, на практике применяют наборы Minitek Enterobacteriaceaelll и Minitek Neisseria для дифференциальной диагностики энтеробактерий (четырнадцать субстратов) и нейссерий (четыре субстрата), позволяющие получить результаты через 4 ч инкубации при 37 0С. Например, СИБы для идентификации вибрионов, энтеробактерий (Россия).
Микро-тест-системы для биохимической идентификации культур. В настоящее время, кроме классических биохимических тестов, для идентификации выделенных культур микробов применяют микро-тест-системы, которые повышают точность результатов за счет стандартизации и увеличения количества тестов (от 15 до 30), менее трудоемки и, следовательно, сокращают время исследования.Наборы мультитестов – это пластиковые планшеты, в лунки которых помещены различные субстраты и индикаторы. Стандартную взвесь исследуемой культуры вносят в лунки и инкубируют при 37°.
Тест-системы делятся на 2 группы в зависимости от содержания субстрата:
Системы, в которых субстрат и индикатор находится в питательной среде;
Системы, где субстрат и индикатор содержатся в носителе-шаблоне, например в бумажных дисках или полимерном шаблоне-носителе.
Тест-системы первой группы представляют собой полистироловые пластины с микрообъемными лунками, содержащие обезвоженные дифференциально-диагностические среды. Количество тестов в таких системах составляет около 20 и более. Для небольших лабораторий выпускаются индивидуальные тест-системы, на которых идентифицируют одну культуру. В лунки вносят суспензию испытуемой культуры в изотоническом растворе, учет проводят после 18-24 часовой инкубации. Примерами таких тест-систем являются ПБДЭ и ПБДС («Диагностические системы», Г.Н.Новгород), семейство систем API (BioMerieux, Франция), Enterotube П (Becton Dickinson, США) и др. Для крупных лабораторий с большим количеством исследуемых культур имеются коммерческие тест-системы из многорядных планшетов на 8-12 культур, содержащих до 96 лунок, например: ММТ F. 1 и ММТ Е2 («Аллерген», г. Ставрополь), ЭНТЕРО-тест 1 и 2 (Lachema, Чехия).
Инкубация тест-систем проводится в обычных термостатах или в специальных термостатируемых устройствах, входящих в комплект автоматизированных систем, где учет результатов и их интерпретация осуществляется автоматически с помощью компьютера (“Vitek”, BioMerieux, Франция).
Для тест-систем второй группы изучаемую культуру выращивают в жидких питательных средах, в которые помещают шаблон-носитель, содержащий субстрат и индикатор к изучаемому ферменту. Примером такой тест-системы является Micro-ID (Organon Teknika, США).
При необходимости ускоренной идентификации (когда лаборатории работают в круглосуточном режиме) можно использовать коммерческие рапид-системы, в которых тесты основаны не на изменении рН, а на использовании хромогенных или флюорогенных субстратов. Рапид-системы позволяют получить результаты после 4-6 часов инкубации. Примерами коммерческих рапид-систем являются API Rapid 20Е (BioMerieux, Франция), RapiD NF Plus и RapiD ANA П (IDS. США), а также RapID NH для идентификации нейссерий и гемофилов, RapID Е для энтеробактерий и др., позволяющие получить результаты не позднее 4-8 ч.
При идентификации выделенной культуры микроба определяют, чаще всего, ее видовую принадлежность, но иногда достаточно определить род или принадлежность к определенной группе. Учет результатов проводят визуально или с использованием специальных считывающих устройств - ридеров, которые повышают достоверность результатов и снижают субъективизм оценки. Каждый положительный результат оценивается знаком "+", а отрицательный - знаком В некоторых случаях перед учетом результата теста в лунку необходимо добавить специальные проявляющие реактивы.
Фирмы, выпускающие микро-тест-системы, как правило, предлагают к тестам и «Фирменные» программы для компьютерной обработки результатов.