III. План практической работы

1. Провести обнаружение бактериальных структур, являющихся факторами патогенности

а) капсулы бактерий в готовых мазках

См. Модуль I «Морфология микроорганизмов», окраска по Бурри-Гинсу

б) жгутиков бактерий – зарисовать различные варианты расположения жгутиков (монотрих, лофотрих, амфитрих, перитрих).

См. Модуль I «Морфология микроорганизмов»

в) корд-фактора у патогенных микобактерий

При культивировании микобактерий на предметных стеклах, погруженных в жидкую среду на основе цитратной крови, микроколонии вирулентных штаммов вырастают в виде переплетающихся кос – тяжей, вследствие наличия корд-фактора. Для их обнаружения стекла окрашивают по методу Циля-Нильсена и проводят иммерсионную микроскопию (метод микрокультивирования по Прайсу).

2. Учесть результаты определения факторов патогенности стафилококка: гемолизина, лецитиназы и плазмокоагулазы.

Гемолизин (экзофермент, по механизму действия мембранотоксин) определяют путем посева испытуемой культуры на чашки Петри с кровяным агаром. Посевы инкубирую при 37°С в течение 24 часов. Вокруг колоний гемолитических микроорганизмов образуются зоны полного (β) или неполного, зеленящего (ά) гемолиза.

Для обнаружения лецитиназы производят посев исследуемой культуры на питательный агар с лецитином (желточный агар). Вокруг колоний бактерий, выделяющих фермент, образуется зона помутнения с перламутровым блеском.

Плазмокоагулаза выявляется при посеве испытуемой культуры в 0,4 мл стерильной цитратной плазмы крови. Посевы инкубируют при 37°С в течение 2-5 ч. В случае образования фермента происходит свертывание плазмы (образование геля), а в контроле она остается жидкой (золь).

3. Учесть результаты определения токсигенности дифтерийной палочки, зарисовать.

См. Модуль IV«Общая и прикладная иммунология», виды реакции преципитации

4. Зарисовать схему этапов проведения биологического метода диагностики инфекционных заболеваний.

5. Заполнить таблицы по теме занятия

6. Решить ситуационные задачи

УИРС Учесть результаты чувствительности микрофлоры зева к антибактериальным препаратам, заполнить таблицу.

IV. Примеры ситуационных задач

Ситуационная задача № 1

Больной А, 18 лет, поступил в инфекционное отделение с карбункулом затылочной области. При проведении бактериологического исследования выделена чистая культура этиологического агента инфекционного заболевания. При изучении факторов патогенности выделенной чистой культуры выявлена зона опалесценции на желточном агаре и зона полного просветления на кровяном МПА. Дайте характеристику данного микроорганизма.

1. лецитиназа положительный

2. лецитиназа отрицательный

3. плазмокоагулаза положительный

4. уреаза положительный

5. гемолитический (β-гемолиз)

В инфекционное отделение детской областной больницы поступил ребенок 6 лет с подозрением на дифтерию. В ходе бактериологического исследования выделена чистая культура дифтерийной палочки (Corynebacterium diphtheriae). При проведении реакции преципитации в агаровом геле с антитоксической противодифтерийной сывороткой определяется зона преципитации. Сформулируйте заключение:

1. исследуемая культура дифтерийной палочки лецитиназа положительна

2. исследуемая культура дифтерийной палочки токсигенна

3. исследуемая культура дифтерийной палочки коагулаза положительна

4. исследуемая культура дифтерийной палочки не токсигенна