- •Гоу впо Тверская гма Росздрава
- •Содержание
- •Список сокращений
- •Предисловие
- •Модуль I «Морфология микроорганизмов»
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •1. Правила работы в учебной бактериологической лаборатории
- •2. Мир микробов. Особенности строения про- и эукариотической клетки
- •3. Систематика и номенклатура микроорганизмов
- •4. Морфология и ультраструктура бактериальной клетки
- •Цитоплазма Капсула Ворсинки (пили) Мезосома
- •Цитоплазмамическая мембрана
- •Периплазматическое пространство
- •5. Основные формы бактерий
- •6. Микроскопический метод диагностики инфекционных заболеваний
- •7. Простые и сложные методы окраски
- •8. Механизмы окрасок по Граму и Цилю-Нильсену
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Тема 2: Специальные методы окраски. Устройство биологического микроскопа. Виды
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •1. Специальные методы окраски для выявления отдельных структур бактерий
- •2. Методы окраски отдельных групп про- и эукариот
- •3. Изучение подвижности микроорганизмов
- •4. Виды микроскопии
- •5. Устройство биологического микроскопа
- •6. Порядок проведения иммерсионной микроскопии
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Тема 3: Морфология и ультраструктура отдельных групп микроорганизмов: риккетсий, хламидий, микоплазм, актиномицет, спирохет, грибов, простейших
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Теоретические вопросы для рубежного контроля знаний
- •Перечень практических навыков
- •Модуль ιι «Физиология микроорганизмов»
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •1. Состав и требования, предъявляемые к питательным средам
- •2. Классификация питательных сред
- •3. Понятия асептики и антисептики
- •4. Понятие дезинфекции, методы дезинфекции и контроль эффективности дезинфекции
- •5. Понятие стерилизации, методы, аппаратура и режимы стерилизации
- •6. Методы определения эффективности стерилизации
- •7. Понятие о виде, штамме, колонии, чистой культуре микроорганизмов
- •8. Методы выделения чистых культур микроорганизмов
- •9. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний
- •10. Техника посева микроорганизмов
- •11. Особенности культивирования анаэробных бактерий
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Диагностике инфекционных заболеваний.
- •I этап.
- •II этап. Цель: накопление чистой культуры
- •III этап. Цель: идентификация исследуемой культуры
- •IV этап.
- •Тема 2: Физиология бактерий. Питание, дыхание, размножение, метаболизм и ферментные системы бактерий. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний (2-й день).
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II. Базовый текст
- •1. Метаболизм микроорганизмов
- •2. Ферментные системы микроорганизмов
- •3. Классификация бактерий по типу питания. Источники углерода, азота, макро- и микроэлементов, ростовых факторов для микробов.
- •4. Механизмы питания бактерий
- •5. Классификация микроорганизмов в зависимости от источника энергии
- •6. Классификация бактерий по типу дыхания - биологического окисления.
- •7. Брожение и его виды
- •8. Условия культивирования бактерий
- •9. Рост и размножение бактерий. Фазы размножения бактерий
- •10. Бактериологический метод исследования. Проведение 2 этапа бактериологического метода выделения аэробов. Культуральные свойства бактерий.
- •III. План практической работы
- •4. Заполнить таблицу « Классификация микроорганизмов по типам дыхания»
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Тема 3: Идентификация чистых культур. Биохимическая активность бактерий. Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний (3-день).
- •1. Проведение III этапа бактериологического метода выделения чистых культур микроорганизмов. Схема идентификации микроорганизмов
- •2. Определение чистоты выделенной культуры
- •3. Использование ферментативной активности бактерий для идентификации микроорганизмов
- •4. Методы определения гликолитической активности микроорганизмов
- •5. Методы определения протеолитической активности бактерий
- •6. Определение окислительно-восстановительных ферментов бактерий
- •7. Системы для биохимической идентификации бактерий
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Модуль III «Основы антибактериальной химиотерапии»
- •2. Механизмы действия антибиотиков на микроорганизмы
- •3. Побочное действие антибиотиков
- •4. Механизмы антибиотикорезистентности микроорганизмов
- •5. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •III модуль «Инфекция и инфекционный процесс»
- •Тема 2: Инфекционный процесс. Факторы патогенности бактерий. Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний
- •Базовый текст
- •1. Учение об инфекции. Понятия «инфекция» и «инфекционное заболевание»
- •3. Классификации инфекционных заболеваний и форм инфекций
- •4. Периоды и исходы инфекционного заболевания
- •5. Патогенность и вирулентность, единицы вирулентности
- •6. Основные факторы патогенности микроорганизмов
- •7. Микробные токсины
- •8. Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •III модуль «Экология микроорганизмов. Основы санитарной микробиологии»
- •Тема 3:Микрофлора организма человека. Санитарно-бактериологическое исследование воды, воздуха, почвы
- •I. Вопросы для самоподготовки:
- •II.Базовый текст
- •2. Функции нормальной микрофлоры организма человека
- •3. Методы определения микрофлоры организма человека
- •4. Определение понятия дисбактериоз и причины его возникновения
- •5. Принципы диагностики и лечения дисбактериоза
- •6. Предмет санитарной микробиологии и требования, предъявляемые к санитарно-показательным микроорганизмам
- •7. Микрофлора воды, воздуха и почвы
- •8. Методы определения санитарно-показательных микроорганизмов воды, воздуха и почвы
- •III. План практической работы
- •IV. Примеры ситуационных задач
- •Теоретические вопросы для рубежного контроля знаний
- •Перечень практических навыков
- •Литература
10. Бактериологический метод исследования. Проведение 2 этапа бактериологического метода выделения аэробов. Культуральные свойства бактерий.
Цель второго этапа бактериологического метода: получение чистой культуры микроорганизмов и ее накопление. Для этого проводят:
Макроскопическое изучение колоний в проходящем и отраженном свете (характеристика величины, формы, цвета, прозрачности, консистенции, структуры, контура, поверхности колоний).
Микроскопическое изучение изолированных колоний, а затем приготовление и просмотр мазков из этих колоний.
Посев колоний, характерных для определенного вида, на среды накопления чистой культуры или элективные среды и инкубация в оптимальных условиях.
Культуральные признаки микробов определяются характером роста их на питательных средах. Будучи постоянными, для каждого вида микроба, они являются важным диагностическим признаком.
Выделяя чистую культуру микроорганизма, следует обращать внимание на характер роста микроба, т.е. на культуральные особенности как на один из признаков, позволяющий идентифицировать род, вид микроорганизма. При культивировании микроба на жидких средах, можно видеть рост бактерий в виде:
а) диффузного помутнения;
б) придонного и пристеночного роста в прозрачной среде;
в) поверхностной пленки;
г) «комочка ваты».
В полужидких средах можно наблюдать:
а) диффузный рост вокруг посева уколом (подвижные бактерии);
б) рост по ходу укола (неподвижные бактерии);
в) разрыв среды или образование пузырьков газа.
На плотных средах наблюдается:
а) рост отдельными колониями;
б) рост сплошным налетом.
Рост микробов на плотной питательной среде.Для изучения свойств колоний микробы культивируют на плотных питательных средах в чашках Петри. При посеве материала стараются получить изолированный рост колоний.
По характеру колоний выделяют следующие типы:
S-тип (от англ. smooth - гладкий) - колонии характеризуются круглой и выпуклой формой, гладкой поверхностью, влажной консистенцией;
R –тип (от англ. rough – шероховатый) колонии характеризуются шероховатой поверхностью, неправильными краями, сухой консистенцией. Образуются из гладких S -форм в результате мутаций. Переход S-форм в R-формы наблюдается при диссоциации. Явление диссоциации у патогенных микробов наблюдается под действием антибиотико - и химиотерапии, факторов специфического иммунитета, формирующихся в течение инфекционного процесса, а также факторов внешней среды.
Помимо этих двух основных типов колоний существует слизистый М-тип (от лат. mucus - слизистый), характеризующийся тягучей слизистой консистенцией. Образуется в процессе диссоциаций бактериальных культур.
Бактерии каждого вида формируют колонии с различными признаками. Их характер изучают невооруженным глазом в проходящем и отраженном свете, а также с помощью лупы или микроскопа с малым увеличением. В начале исследования чашку поворачивают дном к себе и рассматривают чашки в проходящем свете. При наличии разных колоний каждую из них нумеруют и описывают в отдельности. В протоколе отмечают следующие характеристики.
1. Величина колоний определяется ее диаметром (крупные – диаметром 4-6 мм и более, средние – 2-4мм, мелкие – 1-2мм и точечные – менее 1мм).
2. Форма колоний (правильная круглая, неправильная амебовидная, розеткообразная, ризоидная - корневидная, напоминающая переплетающиеся корни деревьев и т.п.).
3. Степень прозрачности (непрозрачная, полупрозрачная, прозрачная).
4. Структуру колоний. По характеру структуры различают следующие виды колоний:
гиалиновые — бесцветные, прозрачные, без видимой определенной структуры;
зернистые, которые в зависимости от величины зерен разделяются на мелко - и грубозернистые;
нитевидные или волокнистые, характеризующиеся наличием длинных, густо переплетающихся нитей в толще колонии. Колонии бывают однородные и неоднородные. Строение первых одинаково во всех частях, у вторых центральная часть отличается от периферической или отдельные сектора имеют строение, неодинаковое с остальной массой.
5. Цвет колонииопределяется пигментом, который продуцирует культура микробов. Преобладающее большинство патогенных бактерий пигмента не образует, вследствие чего колонии их бесцветны или молочно-мутного цвета, похожи на опал. В проходящем свете такие колонии в большей или меньшей степени прозрачны. Пигментообразующие виды микробов дают колонии различных цветов: кремовые, желтые, золотисто-оранжевые, синие, красные, сиреневые, черные и др.
6. Характер поверхности (шероховатая, блестящая, матовая, сухая, влажная, гладкая, радиально или концентрически исчерченная).
7. Характер контура края. Различают ровные края в виде четко выраженной линии и неровные. Последние делят на:
фестончатый край, состоящий из крупных, слегка округлых или уплощенных зубцов правильной формы;
волнистый край, который несколько отличается от фестончатого тем, что крупные зубцы его выражены нечетко;
эрозированный, или зазубренный, край, состоящий из острых зубцов различной величины и формы;
бахромчатый край, имеющий нежные ворсинки. В некоторых случаях четко выраженная линия, отграничивающая колонию от поверхности среды, отсутствует. Такой край колонии называется расплывчатым.
8. Рельеф характеризуется приподнятостью ее над поверхностью питательной среды и контуром формы в вертикальном разрезе. Различают рельеф выпуклый, вдавленный, плоский, конусообразный, куполообразный, плоский с конусовидным центром, с утолщенными валикообразными краями и т. п.
9. Консистенцию колонии, определяющую ее физическое состояние, исследуют посредством прикосновения или взятия из нее части материала бактериологической петлей бактериальной петлей. По характеру консистенции колонии бывают:
пастообразные, легко снимающиеся и размывающиеся по поверхности питательной среды наподобие сливочного масла;
вязкие или слизистые, прилипающие и тянущиеся за петлей
волокнистые или кожистые, плотные, снимающиеся с поверхности питательной среды в виде упругой пленки, соответствующей величине и форме колонии;
хрупкие, сухие, рассыпающиеся при прикосновении петли.
Колонии некоторых видов бактерий врастают в толщу питательной среды, что также определяют бактериологической петлей.
10. Запах-менее важный признак колоний, поскольку вызываемые им ассоциации носятсубъективный характер.Многие виды бактерий в процессе роста на питательных средах выделяют специфические ароматические вещества. В частности, культуры синегнойной палочки имеют запах карамели, культуры листерий – молочной сыворотки, нокардий – свежевскопанной земли, протеев – гнилостный запах.