8. Биологический метод диагностики инфекционных заболеваний

Методы заражения животных. Дозы, определяющие вирулентность, зависят не толь­ко от вида и штамма микроорганизма, но и от вида и возраста подопытного животного, а также от способа заражения. Поэтому для получения сравнимых ре­зультатов исследования проводят на животных одного вида, пола и массы. При работе с бактериями использу­ют 18—24-часовую культуру, так как в более старых культурах присутствует много погибших клеток. Лабораторных животных используют также для:

1. вы­деления микроорганизмов из исследуемого материала, особенно в тех случаях, когда возбудитель не может быть обнаружен методом посева, например при вирус­ных заболеваниях, риккетсиозах и др.;

2. для выделения чистой культуры патогенного микроорганизма из мате­риала, загрязненного другими микроорганизмами;

3. для изучения действия микробных токсинов (определение DLM-токсина, определение дермонекротического дейст­вия и т. д.);

4. для экспериментального воспроизведения некоторых инфекций. Последнее часто используют для изучения эффективности антибиотиков, химиотерапевтических и иммунобиологических препаратов.

При выборе вида лабораторного животного необходимо учитывать степень его восприимчивости к изучаемому возбудителю инфекции.

Для экспериментального заражения чаще использу­ют белых мышей, крыс, морских свинок и кроликов. Для некоторых специальных исследований служат обезьяны, кошки, собаки, лошади, крупный и мелкий рогатый скот, дикие животные (хомяки, суслики, дикие крысы, полев­ки), птицы (куры, голуби и т. д.), а также куриные эм­брионы. Перед опытом животных взвешивают, марки­руют, при проведении некоторых опытов термометрируют. При манипуляциях с животными их иммобилизуют с помощью специальных приспособлений или фиксируют мелких животных руками, работая с помощником или без него. Инструменты, предназначенные для работы с животными, стерилизуют кипячением.

Существуют следующие способы заражения: подкож­ный, внутрикожный, накожный, внутримышечный, внутрибрюшинный, внутривенный, пероральный (через рот), интраназальный (через нос в дыхательный тракт), вве­дение в глаз, введение в центральную нервную систему. При внутрикожном или накожном способе зара­жения шерсть на месте введения или нанесения материа­ла удаляют выстриганием, выщипыванием или депилированием.

Вскрытие и микробиологическое исследование погиб­ших животных. Вскрытие следует производить непосред­ственно после гибели животного, чтобы избежать про­никновения микроорганизмов из кишечника в кровь и другие органы. При отсутствии такой возможности тру­пы сохраняют на холоде. Вскрытие производят на спе­циальном столе в отдельной комнате. На столе должно находиться все необходимое для вскрытия и бактерио­логического исследования секционного материала: доска или кювета, залитая парафином,— для фиксации живот­ного, газовая горелка или спиртовка, сосуд со спиртом и ватой на дне, в котором находятся простерилизованные инструменты (ножницы, скальпель, хирургический и анатомический пинцеты и пр.), стерильные ватные тампоны, бактериальная петля, стерильные пастеровские пипетки, предметные стекла, чашки Петри, пробирки с питательными средами. Выбор сред зависит от вида микроорганизма, который считают причиной гибели жи­вотного.

Все наблюдения, сделанные во время вскрытия, про­токолируют. Отмечают вид животного, номер, время и место заражения, материал, применяемый для зараже­ния, время гибели, обнаруженные изменения и т. д. Во время вскрытия необходимо следить за тем, чтобы жид­кость и кусочки тканей и органов не попали на стол. После каждой манипуляции инструменты промывают водой или спиртом и прожигают.

Вскрытие состоит из следующих этапов: 1) фиксация животного; 2) осмотр наружных покровов; 3) вскрытие; 4) ис­следование грудной полости; 5) вскрытие и исследование брюшной полости.

Отмечают цвет, величину и консис­тенцию каждого органа. Из измененных органов (или из всех, в зависимости от цели эксперимента) делают высев на питательные среды, мазки и мазки-отпечатки. Для посева прижженную поверхность органа надрезают сте­рильным скальпелем, из глубины органа вырезают ма­ленький кусочек, часть его помещают в питательную среду, а из другой делают мазки-отпечатки, приклады­вая срезанную часть к стеклу. Обязательно делают по­сев крови из сердца. Для этого прижигают раскаленным скальпелем верхушку сердца и стерильной пастеровской пипеткой прокалывают прожженный участок, кровь при этом поднимается в капилляр. Кровь из капилля­ра выдувают в питательные среды и делают из нее мазки.

После окончания вскрытия производят тщательную уборку рабочего места. Труп животного сжигают или автоклавируют. Инструменты стерилизуют кипячением или автоклавируют. Доску или кювету протирают спиртом и прожигают или заливают на сутки дезинфицирую­щим раствором. Мазки фиксируют в пламени или жид­ким фиксатором, окрашивают и изучают.