6.5. Иммунные антивирусные сыворотки

Иммунные антивирусные сыворотки получают из крови

гипериммунизированных животных. Они предназначены для

идентификации и типирования вирусов в реакциях: нейтрализации

вирусов, торможения гемагглютинации, РСК, преципитации в геле,

иммуноэлектрофореза, иммунофлюоресценции.

Животных для иммунизации выбирают с учетом свойств

вирусов. При этом животные должны быть свободны от каких-либо

патогенных вирусов, так как их присутствие может повлиять на

результат серологических реакций. Наилучшими продуцентами

противогриппозных сывороток являются куры, морские свинки,

хорьки; аденовирусных – кролики; энтеровирусных – кролики,

морские свинки, обезьяны; противоэнцефалитных – белые мыши.

Антигенами для иммунизации животных могут быть как

вирусные вакцины, так и свежевыделенные штаммы вирусов.

Антивирусные диагностические сыворотки выпускаются двух

видов:

– поливалентные, позволяющие установить к какой группе

(семейству) относятся идентифицируемые вирусы;

– типоспецифические, содержащие антитела к одному типу вируса.

Выпускаются антивирусные сыворотки в сухом виде и перед

употреблением растворяются дистиллированной водой соответственно

высушенному объёму. Сыворотки, разведенные стерильно, можно

сохранять в замороженном виде несколько месяцев.

77

Выбор серологической реакции для типирования вируса или его

антигенов производят с учетом биологических свойств вируса.

6.6. Диагностические сыворотки,

содержащие меченые антитела

Серологические реакции с использованием метки позволяют

быстро получить результаты, как правило, отличаются высокой

чувствительностью и находят широкое применение для экспресс-

диагностики вирусных и бактериальных инфекций.

Данные сыворотки широко применяются для постановки

реакций ИФА (иммуноферментного анализа); РИФ (реакции

иммунофлюоресценции); РИА (радиоиммунного анализа).

В качестве метки для антител соответственно используются:

ферменты для ИФА; флюорохромы и металлы лантаноидной

группы – для РИФ; изотопы – для РИА; ферритин – для

иммунноэлектронной микроскопии.

Меченые сыворотки выпускаются 2 разновидностей:

– антимикробные меченые сыворотки, содержащие антитела

против определенных видов бактерий, вирусов, риккетсий, хламидий;

– антиглобулиновые меченые сыворотки, содержащие антитела

против гамма-глобулинов крови человека или животных.

6.6.1. Меченые флюорохромом сыворотки

для постановки рекции иммунофлюоресценции (РИФ)

РИФ основана на использовании флюоресцеинизотиоцианата –

ФИТЦ или других флюорохромов, химически связанных,

конъюгированных с АТ. При этом меченые АТ сохраняют

иммунологическую специфичность и вступают во взаимодействие со

строго определенными корпускулярными АГ. Комплексы АГ с

мечеными АТ можно легко определить по интенсивному желто-

зеленому свечению при изучении препарата в люминесцентном

микроскопе.

Разновидности РИФ:

– прямой метод Кунса;

– непрямой метод Кунса;

– антикомплементарный метод.

78

В прямом методе Кунса используются флюоресцирующие

антисыворотки против определенных видов бактерий, вирусов,

риккетсий и хламидий. В этом методе на предметном стекле с

антигеном (мазок из исследуемой культуры, фиксированный чаще

ацетоном) соединяется меченая антимикробная сыворотка,

выдерживается во влажной камере 30 минут при 25 ºС градусах по

Цельсию, после чего препарат 10 минут при 25 ºС промывают

солевым буферным раствором. Образовавшийся комплекс

антиген + антитело выявляется в люминесцентном микроскопе по

яркому свечению.

В непрямом методе Кунса сначала на предметном стекле с

антигеном соединяется немеченая диагностическая сыворотка во

влажной камере 30 минут, а затем с ней соединяется

антиглобулиновая против гамма-глобулинов того вида животного, на

котором была получена немеченая сыворотка (АГС), меченая

флюорохромом в таких же условиях. Результат наблюдается как и

при прямом методе в люминесцентном микроскопе.

Непрямой вариант РИФ можно использовать не только для

изучения АГ, но и для определения количества АТ в иммунной

сыворотке.

Антикомплементарная РИФ предполагает применение

меченых антител против комплемента морской свинки. Используется

в тех случаях, когда комплекс АГ-АТ способен фиксировать

комплемент. Добавление к такой системе антикомплементарной

меченой сыворотки позволяет выявлять АГ по специфическому

свечению в люминесцентном микроскопе.

Приготовленные препараты высушивают с помощью

фильтровальной бумаги и изучают в люминесцентном микроскопе

сначала при помощи объектива с увеличением в 40 раз (×40), а затем,

поместив на препарат каплю нефлюоресцирующего масла, с

помощью иммерсионного объектива ×90.

Достоинством непрямой и антикомплементарной РИФ является

использование лишь одной светящейся сыворотки (антивидовой или

антикомплементарной) при изучении различных АГ, что значительно

упрощает и удешевляет реакцию.

79