4. Методы микробиологической диагностики сифилиса.

Исследуемый материал:

• тканевая жидкость твердого шанкра или высыпаний,

• пунктат регионарных ЛУ для обнаружения трепонем,

• сыворотка крови больного для выявления антител серологическими реакциями.

Микроскопический метод.

• Применяют при первичном и вторичном сифилисе.

• Из исследуемого материала готовят препарат «раздавленная капля» и исследуют в темнопольном микроскопе.

• Можно использовать окрашивание фиксированных мазков по Романовскому-Гимзе, по Бури, серебрением и метод иммунофлюоресценции.

• Бледная трепонема отличается ровными завитками, плавными движениями, она тоньше других трепонем.

• Решающее диагностическое значение имеет обнаружение трепонем в пунктате регионарных лимфатических узлов.

Бактериологический метод — не используется из-за трудности выращивания возбудителя на питательных средах.

Биологический метод — не используется.

Серологический метод.

• Применяют для диагностики сифилиса и для оценки проводимого лечения.

• Серопозитивный сифилис наступает через 2-3 нед после появления твердого шанкра или на 5-6 нед от момента заражения.

• Стандартная серологическая реакция — реакция связывания комплемента (реакция Вассермана):

• реакция с кардиолипидным антигеном,

• реакция с трепонемным антигеном.

• Специфическая серологическая реакция — реакция иммунофлюоресценции (РИФ) — реакция становится положительной уже при серонегативносм периоде сифилиса.

• Диагностика скрытого сифилиса, при поражении внутренних органов, нервной системы, у беременных:

• реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ) — принцип реакции заключается в угнетении движения бледных трепонем (иммобилизация) антителами сыворотки крови больного в присутствии комплемента.

• реакция пассивной гемагглютинации (РПГА),

• иммуноферментный анализ (ИФА),

• реакция микропреципитации (РМП).

Аллергологический метод — не применяется.

5. Иммунитет при сифилисе. Оценка результатов серологических исследований.

Механизм саногенеза.

Для сифилиса характерен инфекционный (нестерильный) иммунитет, который формируется через 10-11 сут после появления твердого шанкра. В этот период повторное заражение не происходит либо новый образовавшийся шанкр протекает абортивно (суперинфекция). Суперинфекция объясняется ослаблением инфекционного иммунитета. Возможно повторное заражение сифилисом излечившегося человека (реинфекция) и, таким образом, утратившего иммунитет. В случае реинфекции инкубационный период короче, чаще образуются множественные язвы, во вторичном периоде папулы нередко эрозируются в связи с формированием ГЗТ. В сыворотке больных сифилисом обнаруживаются противотрепонемные антитела вначале классов Ig M и Ig A, а затем Ig G, а также Ig E (реагины). Напряженность гуморального иммунитета недостаточна для обеспечения гибели всех трепонем, хотя в некоторых случаях наблюдается самоизлечение.

В месте внедрения бледной трепонемы развиваются реакции клеточного и гуморального иммунитета, формирующие лимфоплазмоцитарную гранулему (твердый шанкр), основной морфологической единицей которой является плазматическая клетка. Разрешение высыпаний и очищение от трепонем во многом зависит от клеточно- опосредованного иммунитета, включающего фагоцитоз трепонем активированными макрофагами. Активация последних индуцируется лимфокинами ИЛ-2, IFNY ИЛ-12, продуцируемые антигенспецифическими Т-клетками. Локальные защитные реакции при сифилисе (элиминация бледных трепонем с поверхности твердого шанкра) обусловлены активацией моноцитов-макрофагов, В-клеток и клеток эндотелия липопротеинами мембраны возбудителя.

Длительно персистирующая инфекция приводит к развитию аутоиммунных реакций, лежащих в основе клинических проявлений позднего сифилиса.

6. Возбудители иксодового клещевого боррелиоза (болезни Лайма), патогенез и методы микробиологической диагностики.

Возбудители иксодового клещевого боррелиоза (болезни Лайма) Borrelia burgdorferi, Borrelia garinii, Borrelia afzelii

Морфология.

• Прокариот.

• Извитая спираль длиной от 15 до 25 мкм и толщиной от 0,2 до 0,3 мкм.

• Имеют пенистую эластичную оболочку и цитоплазматическую мембрану, между которыми лежат 15-20 параллельных фибрилл, обвивающих тело клетки.

• Содержат до 20 кольцевых и линейных плазмид.

Тинкториальные свойства.

• Гр-,

• Сравнительно легко окрашиваются анилиновыми красителями.

• По Романовскому-Гимзе окрашиваются в фиолетовый цвет.

Культуральные свойства.

• Облигатные анаэробы.

• Требовательны к условиям культивирования.

• Оптимальная температура роста 33-37 ^оС, время генерации составляет 12 ч.

• Культивируются в средах, обогащенных аминокислотами, витаминами, альбуминами бычьей и кроличьей плазмы.

• Среда BSK-II, пригодная для изоляции и культивирования возбудителей болезни Лайма.

• Спирохеты, выращенные в среде, удовлетворительно сохраняются в низкотемпературном холодильнике (-700 – -900С) до нескольких лет, не теряя своих свойств, что позволяет создавать банки штаммов.

Токсинообразование — Белковых токсинов не продуцируют.

Антигенная структура.

• Обладают сложной антигеннной структурой.

• Имеют белковые антигены фибриллярного аппарата (p41) и цитоплазматического цилиндра (p93), антитела к которым появляются на ранних стадиях заболевания, но не обладают защитными свойствами.

• Протективной активностью обладают антигены, представленные липидмодифицированными интегральными белками наружной мембраны, обозначаемые как osp (outer surface protein) A,B,C,D,E,F, детерминация синтеза которых осуществляется группой плазмид.

• OspA-антиген:

• обладает антигенной вариабельностью, подразделяясь на 7 сероваров

• является видоспецифическим.

• В процессе жизненного цикла антигенный состав меняется.

Патогенность для животных: птицы, грызуны, собаки, лошади, др домашние и дикие животные.

Патогенез.

• Иксодовый клещевой боррелиоз (ИКБ) – трансмиссивное природноочаговое заболевание.

• Природные очаги ИКБ характерны для лесных ландшафтам умеренного климатического пояса.

• Резервуаром возбудителей в природе — мелкие млекопитающие, главным образом лесные мыши.

• Механизм заражения – трансмиссивный

• Путь передачи – инокуляционный.

• Заболевание передается человеку через укусы клещей рода Ixodes, выступающими также важнейшими резервуарами инфекции.

• От человека человеку заболевание не передается.

В течении боррелиозной инфекции выделяют три стадии развития болезни:

• I стадия локальной инфекции с развитием патологического процесса в месте внедрения возбудителей;

• II стадия диссеминации (распространения) боррелий по организму от места его первичного внедрения;

• III стадия органных поражений как результат длительного патогенного воздействия возбудителей на органы и системы.

Ход развития заболевания:

• Инкубационный период длится от 3 до 32 дней с момента укуса клеща.

• В месте укуса развивается комплекс воспалительно-аллергических изменений кожи (мигрирующая кольцевая эритема).

• Локальное нахождение возбудителя на протяжении определенного периода времени обусловливает особенности клиники:

• относительно удовлетворительное самочувствие,

• слабовыраженный синдром общей интоксикации,

• отсутствие других характерных для ИКБ проявлений.

• Местное воспаление — способность боррелий к самостоятельным поступательным движениям в тканях.

• В месте первоначального накопления возбудителя в центре эритемы боррелии подвергаются активному воздействию факторов воспаления, они теряют свою подвижность, их количество уменьшается, центр эритемы просветляется (кольцевидная эритема). Возникновение новых колец эритемы (мигрирующая эритема) связано с новыми генерациями боррелий.

• Гематогенно и лимфогенно возбудитель из первичного очага распространяется на другие участки кожи и внутренние органы (сердце, ЦНС, суставы). В ряде случаев заболевание на этой стадии, может переходить в латентную форму.

• Генерализация инфекции клинически сопровождается лихорадкой, симптомами общей интоксикации и полисистемными проявлениями (поражение лимфатических узлов, печени, селезенки, сердца, мышц, суставов, почек, головного мозга с вовлечением в воспалительный процесс мозговых оболочек и др.).

• В результате взаимодействия боррелий с макрофагами происходит выделение:

• ИЛ-1, который индуцирует воспалительный процесс.

• OspА-протеин принимает участие в развитии иммунопатологических реакций, индуцирующих артриты.

• Боррелии в течение длительного времени могут сохраняться в организме человека.

• Заболевание протекает доброкачественно.

• Прогноз благоприятный.

Микробиологическая диагностика.

Материалы для исследования — биоптаты кожи, синовиальная жидкость суставов, ликвор, сыворотка крови.

Микроскопический метод — не используется.

Бактериологический метод.

• Проводится на 1 стадии заболевания (мигрирующая эритема, гриппоподобный комплекс, лимфаденит) – 1-3 нед.

• Для обнаружения боррелий в ликворе и суставной жидкости используется ПЦР: праймеры к ospA gene и p66gene B. burgdorferi.

Биологический метод — не применяется.

Серологический метод.

• Осуществляется, начиная с 3-4 недели заболевания.

• С помощью ИФА или РИФ определяют IgM или нарастание титра IgG.

* Проблема диагностики — наличие у боррелий поверхностных белков перекрестнореагирующих с эпитопами многих инфекционных агентов, а также с некоторыми воспалительными и ревматоидными факторами при различных соматических заболеваниях.

• Используют иммуноблотинг.

Аллергологический метод — недостаточно разработан.

Профилактика и лечение.

• Неспецифическая профилактика — защитная одежда и борьба с клещами.

• Специфическая профилактика не разработана.

Этиотропное лечение проводится антибиотиками тетрациклинового ряда.