15. Методы микробиологической диагностики сибирской язвы. Дифференциация сибиреязвенных бацилл от антракоидов.

Исследуемый материал — отделяемое язвенного дефекта из-под некротического струпа или содержимое везикул, плевральный пунктат, мокроту, рвотные массы, испражнения, кровь, ликвор, секционный материал.

Микроскопический метод. Мазки, приготовленные из клинического материала, окрашивают по Граму или по Романовскому–Гимзе (с целью обнаружения капсул).

Бактериологический метод.

• Выделенную чистую культуру идентифицируют по морфологическим, тинкториальным, культуральным свойствам.

• Тестируют на:

• подвижность (B. anthracis всегда неподвижна),

• капсулообразование (образует капсулы на сывороточных средах и в макроорганизме),

• отсутствие гемолитической активности (не вызывает гемолиза на агаре с 5% крови кролика),

• лизабельность специфическим сибиреязвенным фагом,

• способность образовывать шарообразные клетки на среде с пенициллином («жемчужное ожерелье»).

• РИФ позволяет с помощью люминесцирующих сибиреязвенных антител выявить капсулу возбудителя в мазках из исследуемого материала.

• Соматический антиген может быть обнаружен в реакции термопреципитации по Асколи в шерсти, коже животных и секционном материале.

• ДНК возбудителя может быть обнаружена методом ПЦР.

Серологический метод.

• С помощью ИФА выявляют наличие специфических АТ (Ig G) к протективному АГ B. anthracis,

+ нарастание титра АТ к летальному токсину методом парных сывороток.

Биологический метод используется для определения вирулентности выделенной чистой культуры возбудителя, путем подкожного заражения кроликов. Животные погибают на 2-3 сутки от явлений септицемии.

Аллергологический метод. Внутрикожное введение антраксина в дозе 0,1 мл позволяет выявить сенсибилизацию организма к возбудителю.

Занятие № 3. Возбудитель дифтерии. Патогенные клостридии.

1. Токсические инфекции. Особенности их этиологии, патогенеза и диагностики.

Пищевые токсикоинфекции (ПТИ) – острые инфекционные заболевания, вызываемые условно-патогенными бактериями, продуцирующими экзотоксины. При попадании микроорганизмов в пищевые продукты в них накапливаются токсины, которые могут вызывать отравления человека.

Общие свойства токсических инфекций:

• возбудитель выделяет экзотоксин

• возбудитель остается в месте входных ворот

• во внутреннюю среду проникают токсины → токсинемия

• тип иммунного ответа – В (Тх2) → АТ-антитоксины

• профилактика – анатоксины

• лечение – антитоксические сыворотки

Этиология

• Пищевая токсикоинфекция (ПТИ) вызывает большая группа бактерий; основные возбудители – Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Bacillus cereus, Clostridium perfringens, Clostridium difficile, представители родов Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Enterococcus и др.

• Для развития заболевания необходимо:

• достаточная инфицирующая доза,

• относительная вирулентность и токсигенность микробных штаммов,

• фоновое состояние макроорганизма (например, снижение колонизационной резистентности).

• Возбудители широко распространены в природе, обладают выраженной устойчивостью и способны размножаться в объектах внешней среды.

• Все они являются постоянными представителями нормальной микрофлоры кишечника человека и животных.

Таксономическое положение

ВОЗБУДИТЕЛИ ТОКСИЧЕСКИХ ИНФЕКЦИЙ
Патогенные коринебактерии	Патогенные клостридии
Family: Corynebacteriaceae Genus: Corinebacterium Species: C. diphtheria C. pseudodiphtheria C. xerosis C. haemolyticum и др.	Family: Clostridiaceae Genus: Clostridium Species: C. perfringens C. tetani C. botulinum C. novi C. septicum C. histolyticum C. difficile

2. Особенности антитоксического иммунитета. Иммунобиологические препараты, используемые для лечения и профилактики токсикоинфекций: анатоксины и антитоксические сыворотки. Их получение, определение активности и практическое использование.

Антитоксический иммунитет — формируется при заболеваниях, возбудители которых продуцируют и выделяют в окружающую среду экзотоксины (возбудители дифтерии, ботулизма, столбняка, газовой раневой инфекции, стафилококки, стрептококки).

• Направлен против токсинов (белковых),

• Механизм — гуморальный,

• Основные пути элиминации токсина:

• нейтрализация токсина АТ

• инактивация токсина

Иммунобиологические препараты (ИМП) – это препараты, которые оказывают влияние на иммунную систему или действие которых основано на иммунологических реакциях. Эти препараты применяют для профилактики, лечения и диагностики инфекционных заболеваний и тех неинфекционных заболеваний, в развитии которых участвует иммунная система.

• ИМП применяют для активации, подавления или нормализации деятельности иммунной системы.

К иммунобиологическим препаратам относят:

1. Вакцины и другие (анатоксины, фаги, эубиотики) лечебные и профилактические препараты из живых микробов или микробных продуктов.

2. Иммунные сывороточные препараты.

3. Иммуномодуляторы.

4. Диагностические препараты, в том числе аллергены.

Анатоксины — Препараты, полученные из бактериальных экзотоксинов, полностью лишенные токсических свойств, но сохранившие антигенные и иммуногенные свойства.

Метод получения:

1. Бактерии выращиваются на жидких питательных средах для накопления токсина.

2. Фильтруют через бактериальные фильтры для удаления микробных тел.

3. К фильтрату добавляют 0,3-0,4 % формалина

4. Помещают в термостат при температуре 37°-40°С на 3-4 недели до полного исчезновения токсических свойств.

5. Полученный анатоксин проверяют на стерильность, безвредность и иммуногенность.

* Такие препараты получили название нативных анатоксинов, т. к. они содержат большое количество веществ питательной среды, которые являются балластными и могут способствовать развитию нежелательных реакций организма при введении препарата. Нативные анатоксины необходимо вводить в больших дозах из-за их невысокой удельной активности.

Антитоксические сыворотки — Получают иммунизацией лошадей возрастающими дозами анатоксинов, а затем и соответствующими токсинами. Сыворотки подвергают очистке и концентрации, контролю на безвредность, апирогенность, затем титруют.

Титрование сывороток по:

• Методу Района — Первичная реакция флоккуляции наступает при соответствии количества антигенных единиц анатоксина количеству антитоксинов в исследуемой сыворотке.

• Методу Эрлиха. — Сначала определяют условно смертельную дозу. Далее ее добавляют к испытуемый сыворотке. Смесь выдерживают и вводят животным. По получаемым результатам производят расчет титра испытуемой антитоксической сыворотки.

• Методу Рёмера — В два этапа, но более экономичный, т.к. опыт проводится на одном животном. Определяют невротическую дозу токсина. Далее испытуемую сыворотку вводят внутрикожно животному и по результатам проводят расчёт титра сыворотки.

В настоящее время выпускаются и применяются следующие антитоксические сыворотки.

1. Противодифтерийную сыворотку — получают гипериммунизацией лошадей дифтерийным анатоксином и применяют, главным образом, с терапевтической целью.

2. Противостолбнячная сыворотка — препарат, получаемый из сыворотки крови лошадей, гипериммунизированных столбнячным анатоксином или токсином.

3. Противогангренозные моно- и поливалентные сыворотки — получают гипериммунизацией лошадей анатоксинами или токсинами возбудителей газовой гангрены