7. Микробиологическая диагностика псевдотуберкулеза. Дифференциация возбудителя псевдотуберкулеза и других иерсиниозов.

Для диагностики применяется в основном бактериологический и серологический методы.

Основной материал для исследования — кровь, моча, испражнения, рвотные массы, отделяемое слизистой ротоглотки.

Бактериологический метод.

• Заключается в выделении чистой культуры, путем посева исследуемого материала на среду Серова и культивировании при температуре 25–28°С.

• Идентификацию проводят по комплексу типичных морфологических, культуральных, биохимических свойств.

• Для дифференциации с другими энтеробактериями применяется поливалентный псевдотуберкулезный бактериофаг.

• Можно обнаружить антигены в ранние сроки заболевания в крови, моче, отделяемом слизистой ротоглотки с помощью реакции:

• непрямой гемагглютинации (РНГА),

• реакции непрямой иммунофлуоресценции (НРИФ),

• реакции коагглютинации (РКА),

• латексной агглютинация (РЛА),

• иммуноферментного анализа (ИФА)

• Для обнаружения нуклеиновой кислоты генофора иерсиний разработана полимеразная цепная реакция (ПЦР), которая также может быть поставлена в первые дни заболевания.

Биологический метод.

• Прямой посев крови на питательные среды дает отрицательные результаты.

• Гемокультуру можно получить при внутрибрюшинном заражении морских свинок (не всегда заканчивается выделением чистой культуры и применяется редко)

Серологический метод.

РА — положительная при титре не ниже чем 1:200,

РНГА с эритроцитарным антигенным диагностикумом (1:100)

Реакция коагглютинации (РКА),

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Аллергологический метод не применяется.

8. Возбудитель туляремии, таксономическое положение, биологические свойства. Патогенез туляремии.

Возбудитель туляремия Francisella tularensis

Туляремия – зоонозная природно-очаговая инфекция, с разнообразными путями передачи. Проявляется лихорадкой, выраженной интоксикацией, поражением кожных покровов, лимфоузлов, дыхательных путей, пищеварительного тракта. Разнообразие клинических проявлений зависит от реализации механизмов и путей передачи инфекции.

Выделяют три географических подвида возбудителя:

• неарктический,

• голарктический (в РФ — Francisella tularensis subsp. holarctica, который отличается умеренной патогенностью в отношении животных и человека)

• среднеазиатский.

Морфология.

• Мелкие грамотрицательные коккобациллы.

• Жгутиков не имеют, не образуют спор, но синтезируют капсулу.

Тинкториальные свойства.

• При окраске по Романовскому-Гимзе приобретают красно-фиолетовый цвет.

Культуральные свойства.

• факультативный анаэроб,

• прихотлив к условиям культивирования.

• Нуждается в АК (аргинин, лейцин, изолейцин, лизин, метионин, цистин и др.) и ионах Mg2+.

• Хорошо культивируется в желточном мешке куринного эмбриона и на средах с добавлением цистеина, дефибринированной кроличьей крови и яичного желтка при 37-38 ^оС и рН 6,8–7,4.

• Растет медленно, колонии м/о обнаруживаются на 2-10-е сутки после посева.

• На кровяных средах образуются мутные блестящие слизистые колонии белого цвета,

• На среде Мак-Коя появляется рост в виде нежного «шагреневого» налета.

• Образует S- и R-формы.

• Чувствителен к высокой t^o: при 60 ^oС погибает через 5-10 мин, при 100 ^оС – через 1-2 мин.

• Длительное время (до 4-9 мес) сохраняется при температуре 0–4 ^оС в воде и почве.

• Губительное воздействие оказывают высушивание, УФ-лучи, дезинфицирующие средства.

Ферментативные свойства выражены слабо.

• Возбудитель расщепляет глюкозу, мальтозу, маннозу без образования газа,

• Некоторые штаммы ферментируют левулезу и глицерин.

• Оксидазу не образует.

• При расщеплении белков выделяет сероводород.

Токсинообразование.

• Экзотоксинов не синтезирует.

• При разрушении выделяет эндотоксин.

Антигенная структура

• представлена соматическим О- и капсульным Vi-антигенами. О-антиген имеет родство с антигенами бруцелл.

Патогенность для животных. Высоковосприимчивы и высокочувствительны к туляремии — мышевидные грызуны, ондатры, зайцы, насекомоядные — резервуары инфекции (+кровососущие насекомые)

Патогенез. Больной человек угрозы для заражения окружающих не представляет.

Механизмы передачи:

• контактный,

• алиментарный,

• трансмиссивный

• аспирационный.

Пути передачи:

• прямой контакт (от больного животного)

• водный,

• пищевой,

• инокуляционный (укусы насекомых)

• воздушно-пылевой (вдыхании контаминированного воздушно-пылевого аэрозоля)

Возбудитель проникает в м/о через микротравмы кожных покровов и слизистые оболочки.

Инфицирующая доза возбудителя для контактного и аэрогенного пути составляет от 10 до 50 жизнеспособных бактерий, в то время как для алиментарного и водного пути заражения эта доза возрастает до 108 микробных тел.

Формы туляремии (МКБ-10):

• ульцеро-гландулярная форма (ранее язвенно-бубонная или кожно-бубонная);

• ангинозно-гландулярная (ангинозно-бубонная);

• окуло-гландулярная (глазо-бубонная);

• легочная (торакальная);

• абдоминальная (кишечная);

• генерализованная.

Форма туляремии в зависимости от способа проникновения:

• ульцеро-гландулярная форма — через кожные покровы (контактный и трансмиссивный пути),

• окуло-гландулярная — конъюнктива глаза,

• абдоминальная или ангинозно-гландулярная — инфицирование водным и алиментарным путем,

• легочная — вдыхание инфицированного воздушно-пылевого аэрозоля.

1. В месте входных ворот происходит начало воспалительного процесса — активное размножение.

2. Благодаря капсуле сохраняется жизнеспособность возбудителя внутри макрофага.

3. В составе макрофагов возбудитель проникает в лимфоузлы.

4. В лимфоузлах происходит воспаление (размножение бактерий и незавершённый фагоцитоз)

5. Часть бактерий погибает, а выделяющийся при этом эндотоксин обеспечивает общую интоксикацию.

6. Возбудитель проникает в кровяное русло (плохая барьерная функция лимфоузла) —> различные органы и ткани (наиболее часто в печень, селезенку и легкие).

7. Размножаясь внутри макрофагов, они становится причиной их гибели —> выделяются флогогены — поддерживают воспалительный процесс —> формируются гранулемы.

8. Через 2-5 дней после инфицирования появляются признаки общей интоксикации и лихорадки, затем развиваются симптомы, характерные для какой-либо формы туляремии.

Ульцеро-гландулярная (язвенно-бубонная) форма.

• Встречается наиболее часть.

1. В месте внедрения возбудителя появляется папула —> язва с четкими краями.

2. Одновременно появляется лимфоаденопатия.

3. Регионарные лимфоузлы (наиболее часто поражаются подмышечные, паховые и бедренные) увеличиваются и становятся болезненными, формируются бубоны, которые либо медленно рассасываются, либо спонтанно прорываются.

Окуло-гландулярная (глазо-бубонной) туляремия

• Развивается гнойный конъюнктивит с регионарной лимфоаденопатией.

Ангинозно-гландулярная (ангинозно-бубонная) форма

• Развитие острого экссудативного или мембранозного фарингита и поражением шейных лимфоузлов.

Абдоминальная форма

• Если входными воротами является слизистая оболочка желудочно-кишечного тракта, то в кишечнике образуются язвенные очаги и мезентериальная аденопатия.

• Заболевание сопровождается диареей, интоксикацией, желудочно-кишечными кровотечениями.

Легочная туляремия

• Развивается как первично-легочная или в результате гематогенного заноса при других формах.

• Заболевание протекает по типу пневмонии с выраженной интоксикацией, лихорадкой, кашлем, одышкой, плевральными болями.

• Увеличение прикорневых, паратрахеальных и медиастенальных лимфоузлов.

• Формируются бронхоэктазы и абсцессы.

• Высокий уровень летальности.

Генерализованная форма

• У ослабленных пациентов и проявляется высокой лихорадкой, выраженной интоксикацией, отсутствием характерных воспалительных изменений в регионарных лимфоузлах и в месте входных ворот.

• Осложняется менингитом, менингоэнцефалитом, вторичной пневмонией, возможны перикардит, перитонит, полиартрит, инфекционный психоз.

Механизмы саногенеза.

• Элиминация (очищение крови)— за счет клеточных и гуморальных факторов иммунитета.

• Гиперчувствительность замедленного типа указывает на ведущую роль клеточного типа иммунного ответа.

• В ходе инфекции формируется длительный и напряженный иммунитет.

Профилактика и лечение.

• Неспецифическая профилактика заключаются в осуществлении контроля над природными очагами инфекции, эпизоотической и эпидемической ситуацией в них.

• Специфическая профилактика осуществляется с помощью живой вакцины.