3.3. Безопасность в отношении вирусов и протоонкогенов

Оценка контаминации НПК вирусами и функционально активными протоонкогенами была проведена методом фенольно-детергентной экстракции нуклеиновых кислот из препарата с последующим электрофорезом в 1% агарозном геле в трис-ацетатном буфере (окрашивание бро­мистым этидием) [Мазин А. В. и соавт., 1990].

Результаты исследования НПК представлены на рис. 12 и 13. На рис. 12 в крайних дорожках справа и слева распо­лагается маркер молекулярной массы — ДНК фага лямб­да, обработанная эндонуклеазой Hind III. Во второй до­рожке слева находится нативная ДНК, выделенная фенольно-детергентным методом из слизистой оболочки желудка человека (операционный материал). На электро-фореграмме видно, что нативная ДНК человека распола­гается в виде дискретной полосы выше фрагмента ДНК фага лямбда с молекулярной массой 23 тысячи пар осно­ваний. В дорожках с 3-й по 14-ю расположены образцы НПК 12 наименований, выделенных из различных орга­нов и тканей животных. Как видно на рисунке, эти образ­цы выглядят в виде шлейфов с молекулярной массой от О до 23 тысяч пар оснований.

На рис, 13 представлены результаты обработки образ­цов НПК нуклеазой SI (Fermentas). В дорожках 1, 3, 5 и 7 находятся не обработанные нуклеазой образцы НПК (церебрамина, офталамина, эпифамина, хондрамина), а в до­рожках 2, 4, 6 и 8 — те же образцы, обработанные нукле­азой S1. На рисунке видно уменьшение интенсивности шлейфов во всех обработанных нуклеазой образцах ниже фрагмента ДНК фага лямбда с молекулярной массой 2 ты­сячи пар оснований. Это свидетельствует о том, что ДНК с молекулярной массой ниже 23 тысяч пар оснований со­держит практически по всей длине значительное количе­ство одноцепочечных участков или находится в одноце-почечной форме.

Полученные результаты исследования позволяют ут­верждать, что нуклеиновые кислоты, содержащиеся в цитаминах, представляют собой продукты глубокой де­градации ДНК и РНК, которые не могут иметь матричной или инфекционной активности.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Рис. 12. Электрофорез нуклеопротеиновых комплексов

в 1 % геле агарозы

Дорожки: 1 — ДНК фага лямбда, обработанная эндонуклеазой Hind III;

2 — нативная ДНК, выделенная фенольно-детергентным методом из слизистой оболочки желудка человека (операционный материал);

3— церебрамин; 4 — офталамин; 5 — эпифамин; 6 — хондрамин; 7 — тимусамин; 8 — просталамин; 9 — корамин; 10 — гепатамин;

11 — тесталамин; 12 — панкрамин; 13 — овариамин; 14 ~ тирамин; 15 — ДНК фага лямбда, обработанная эндонуклеазой Hind III

Рис. 13. Электрофорез нуклеопротеиновых комплексов в 1% геле агарозы до и после обработки нуклеазой S1

Дорожки: 1 — церебрамин; 2 — церебрамин, обработанный нуклеазой S1;

3 — офталамин; 4 — офталамин, обработанный нуклеазой S1; 5 — эпифамин;

6 — эпифамин, обработанный нуклеазой S1; 7 — хондрамин', 8 — хондрамин,

обработанный нуклеазой S1, 9 — ДНК фага лямбда, обработанная

эндонуклеазой Hind III

Таким образом, анализ технологии получения нуклео-протеиновых комплексов, выделенных из различных орга­нов и тканей животных, а также установленная экспе­риментально степень деградации нуклеиновых кислот исключают возможность наличия в исследуемых препа­ратах жизнеспособных вирусов или функционально ак­тивных протоонкогенов [Феннер Ф. и соавт., 1977; Маниатис Т. и соавт., 1984].

Всестороннее изучение возможного неблагоприятного действия выделенных из различных органов и тканей животных биологически активных веществ показало пол­ную безопасность их применения, гарантированную тех­нологией производства нового класса препаратов, что по­зволило приступить к проведению клинического изучения эффективности применения цитаминов для лечения и про­филактики возрастной патологии. Клинические исследо­вания проводили в ведущих клиниках страны в соответ­ствии с требованиями, предъявляемыми к проведению кли­нических испытаний лекарственных средств [Бабаян Э. А., Уткин О, Б., 1982].

Эффективность геропротекторного действия цитами­нов оценивали на основании динамики показателей субъективного состояния пациентов, функционального состояния сердечно-сосудистой, эндокринной и централь­ной нервной систем организма, показателей углеводного, липидноро и минерального обмена [Коркушко О. В. и со­авт., 2002].