2.4. Тканеспецифические свойства

Индивидуальные характеристики дифференцирован­ных клеток принято связывать с белковыми рецептора­ми, встроенными в клеточную мембрану. Наряду с одина­ковыми по функциям рецепторами, которые необходимы для обеспечения жизни любой клетки, дифференцирован­ная клетка обнаруживает Тканеспецифические рецепто­ры, ответственные за связывание специфических лигандов [Кабанов А. В., Кабанов В. А., 1994]. Белковые рецеп­торы представляют собой сложные гликопротеины с молекулярной массой от 90 до 250 кДа. Структура «узна­ющей» части рецептора, которая экспонирована во внеш­нюю среду для связывания с лигандом, в значительной степени подобна структуре вариабельной части иммуно­глобулинов, специфических к тому же лиганду.

С помощью электрофореза в полиакриламидном геле были изучены индивидуальные характеристики НПК.

Рис. 3. Электрофореграмма НПК в полиакриламидном геле

Дорожки 1, 4, 7, 10, 13 - маркеры; 2 - эпифамин; 3 - просталамин;

5 - тимусамин; 6 - корамин; 8 - тесталамин; 9 - панкрамин; 11 - вентрамин;

12 - бронхаламин; 14 - вазаламин; 15 - хондрамин

Рис. 4. Электрофореграмма гепатамина и тимусамина

в полиакриламидном геле

Дорожки 1 и 4 - маркеры, 2 и 3 - гепатамин и тимусамин

На рис. 3 отчетливо видны элементы сходства и различия в наборе белковых компонентов исследованных НПК, выделенных из различных органов и тканей животных. Индивидуальные характеристики дифференцированных клеток обычно связывают с белковыми рецепторами, встроенными в клеточную мембрану. Известно, что в пре­паратах, выделенных из различных тканей, присутству­ет набор ядерных гистонов, обозначенных на рис. 4 стрел­ками. Как видно на электрофореграмме, в области гисто­нов не обнаруживается тканеспецифических белковых зон. В то же время в области молекулярных масс от 40 кДа и выше для каждого НПК можно обнаружить белковый компонент, отсутствующий в других препаратах. Напри­мер, на ряде электрофореграмм имеются сдвоенные или строенные полосы в области 65 кДа, которые описаны в литературе для характерного белка В-50 (фосфопротеин, нейростимулин). На электрофореграммах препаратов НПК, выделенных из сосудов и эпифиза, в области 45 кДа наблюдается большая белковая зона, которая отсутствует в других препаратах.

Таким образом, для каждого НПК можно выбрать 1— 2 реперных белка, содержание которых определяет тканеспецифическую принадлежность препарата.

Тканесцецифические свойства НПК изучали в культу­ре ткани. Классическим тест-объектом для биотестиро­вания, например, нейротрофической активности пре­паратов является органотипическая культура спинно­мозговых ганглиев [Хавинсон В. X. и соавт., 1997]. Чувствительные нейроны этих ганглиев отвечают усиле­нием роста нейритов на введение в культуру нанамоляр-ных концентраций нейротрофических факторов. Для изу­чения влияния НПК, выделенных из различных тканей, на развитие клеток центральной нервной системы было проведено исследование некоторых НПК в культуре нерв­ной ткани, когда исключаются реакции целостного организма [Ernf ors P. et al., 1990; Borson S. et al., 1991; Ebendal T., 1992; Seguin M. C., Babizhayev M., 1994].

Эксперименты были проведены в культуре спинномоз­говых ганглиев и фрагментов коры головного мозга и под­корковых образований 10-11-суточных эмбрионов цып­ленка [ЧалисоваН. И. и соавт., 1991; BachrachH. L., 1966; Barde Y. et al., 1980; Levi-Montalchini R., 1982]. Изучали развитие эксплантатов периферической и центральной нервной системы в органической культуре ткани в при­сутствии эффективных концентраций НПК, выделенных из коры головного мозга, печени, хрящей, бронхов. Ре­зультаты исследования представлены на рис. 5. Показано, что в присутствии церебрамина индекс площади эксплан­татов коры головного мозга на 30-40 % выше контрольно­го значения индекса площади (Р<0,05), в то время как до­стоверного увеличения зоны роста эксплантатов при воз­действии гепатамина, хондрамина и бронхаламина не отмечено. Последнее обстоятельство указывает на нали-

Рис. 5. Влияние нуклеопротеиновых комплексов, выделенных из различных тканей, на рост эксплантата коры головного мозга

чие нейритстимулирующей активности только у препа­рата, выделенного из коры головного мозга, — церебрамина.

Подобный эксперимент был проведен также в культу­ре ткани глаза куриных эмбрионов. Результаты исследо­вания, приведенные на рис. 6, свидетельствуют о досто­верном (Р<0,05) специфическом влиянии офталамина на клетки ткани глаза и отсутствии достоверного эффекта при воздействии на данную культуру клеток вентрамина, корамина и тимусамина.

Рис. 6. Влияние нуклеопротеиновых комплексов, выделенных из различных тканей, на рост эксплантата ткани глаза